乳腺癌中抵抗素和Fascin-1蛋白表达的相关性及临床预后意义

金璐璐 王艳 王倩 邵俊康 黄必飞 王超群

1东阳市人民医院温州医科大学附属东阳医院生物医学实验室 322100；2东阳市人民医院温州医科大学附属东阳医院肿瘤内科 322100；3东阳市人民医院温州医科大学附属东阳医院病理科 322100

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤之一，其发病人数和死亡人数均处于恶性肿瘤前列［1-2］。抵抗素（Resistin）是脂肪细胞分泌的一种细胞因子，最初对其的研究主要集中在肥胖和胰岛素抵抗等方面，它可通过多种分子途径参与机体的代谢、炎症和自身免疫［3］。目前研究发现其和多种恶性肿瘤的发生和进展相关［4］。在乳腺癌中，多项研究显示血清Resistin 水平升高与乳腺癌风险增加及进展相关［5-7］。细胞骨架蛋白Fascin-1（FSCN1）在乳腺癌、胃癌等多种肿瘤中高表达，与肿瘤发生、进展密切相关［8-13］。我们先前的研究显示p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路调控FSCN1 表达，并进一步影响乳腺癌细胞侵袭转移［12］。有研究报道Resistin 亦可通过p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路促进骨肉瘤血管新生及平滑肌增殖［14-15］。而乳腺癌中Resistin和FSCN1之间是否存在某种关联尚未见相关报道。本研究采用免疫组织化学Envision 法检测400 例乳腺癌组织中Resistin 和FSCN1 蛋白的表达，探讨Resistin 和FSCN1 的相关性，并探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2007 年1 月至2019 年6 月东阳市人民医院病理科浸润性乳腺癌石蜡标本400例。按WHO标准（2012年）对各病例进行分型和分级。患者年龄范围为26～90 岁，中位年龄52 岁；组织学分级：Ⅰ级20 例，Ⅱ级264例，Ⅲ级116例；pTNM 分期：Ⅰ期106例，Ⅱ期195例，Ⅲ期99例，Ⅳ期0例。所有患者术前未做化疗、免疫及放射治疗。在本组乳腺癌病例中，239例有完整的随访资料者纳入本研究生存分析。本研究经东阳市人民医院医学伦理委员会批准。

1.2 免疫组织化学染色 免疫组织化学实验采用Envision 二步法（Dako 公司），具体实验步骤、条件如前所述［12-13］。本研究所使用一抗包括：鼠抗人Resistin 单克隆一抗（克隆号：C-10，Santa Cruz公司）；鼠抗人FSCN1单克隆一抗（克隆号：55K-2，Santa Cruz公司）。

1.3 免疫组织化学评分 （1）Resistin染色主要定位于细胞浆，其染色强度计分：0（无染色）、1（淡黄色）、2（棕黄色）和3（棕褐色），以0～1 为低表达，2～3 为高表达［16］。（2）FSCN1染色结果判定采用前述标准［13］，以强阳性视为高表达。

1.4 随访 随访方案及具体步骤如前所述［17］。

1.5 统计学分析 数据处理采用SPSS19.0 统计软件，样本率比较应用χ2检验。Resistin 和FSCN1 蛋白表达的相关性采用Spearman 相关分析。采用Kaplan-Meier 法绘制生存曲线，患者生存分析用Log-Rank 检验。P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结 果

2.1 乳腺癌中Resistin 和FSCN1 蛋白的表达及相关性 在400 例乳腺癌组织中，334 例（83.5%）Resistin 蛋白高表达；75 例（18.8%）FSCN1 蛋白高表达。Resistin 高表达患者的FSCN1 蛋白高表达率（21.0%，70/334）较Resistin 低表达者（7.6%，5/66）显著增强，差异有统计学意义（P=0.011），见图1。Spearman 相关分析显示乳腺癌中Resistin 和FSCN1蛋白表达显著正相关（r=0.127，P=0.011）。

2.2 乳腺癌中Resistin 和FSCN1 共同高表达对患者预后的影响 乳腺癌患者术后平均随访时间为60 月（3～80 月）。生存分析显示，在获得随访信息的239 例乳腺癌患者中，5 年总生存率为88.3%（211/239），5 年无复发生存率为79.1%（189/239）。

Resistin和FSCN1均高表达的乳腺癌患者5年平均生存期为54.3 月，总生存率为78.8%（26/33），显著低于Resistin和FSCN1 单一高表达者［5 年平均生存期为57.9 月、总生存率为88.5%（146/165）］及Resistin和FSCN1均低表达者［5年平均生存期为58.0 月、总生存率为95.1%（39/41）］，差异有统 计学意义（χ2=4.744、P=0.029，图2A）。 Resistin 和FSCN1 均高表达者5 年平均无复发生存期为50.3 月，无复发生存率为75.8%（25/33），低于Resistin 和FSCN1单一高表达者［5 年平均无复发生存期为53.6 月、无复发生存率为78.2%（129/165）］及Resistin 和FSCN1均低表达者［5年平均无复发生存期为54.8 月、无复发生存率为85.4%（35/41）］，但差异未见统计学意义（χ2=1.228、P=0.268，图2B）。

图1 乳腺癌中Resistin和FSCN1免疫组织化学染色，Envision二步法（×200）

图2 239例乳腺癌患者生存曲线

3 讨 论

先前研究显示，Resistin 参与肥胖相关的亚临床炎症、胰岛素抵抗、动脉粥样硬化等疾病，其通过下游分子途径参与代谢、炎症和自身免疫［3］。近年来，研究发现Resistin 在非小细胞肺癌、乳腺癌、子宫内膜癌等恶性肿瘤患者血液中高表达，其单核苷酸多态性与多种肿瘤发生和进展密切相关，提示Resistin 与恶性肿瘤发生或进展密切相关［4-7，18-19］。然而，目前关于Resistin 在乳腺癌组织中表达的报道少见。我们前期应用免疫组化技术检测了154 例乳腺癌组织中Resistin 蛋白的表达，结果显示乳腺癌相对于正常乳腺组织Resistin 表达显著增强，表明Resistin 与乳腺癌发生密切相关［16］。

FSCN1与肿瘤细胞侵袭和转移密切相关［20］。研究显示乳腺癌中p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路通过调控FSCN1 表达，进一步影响乳腺癌细胞侵袭转移［12］。同时有报道显示Resistin 通过p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路促进骨肉瘤血管新生及平滑肌增殖［13-14］。那么，在乳腺癌中，Resistin 和FSCN1 之间是否存在某种关联呢？目前尚未见相关报道。阐明该问题可能为今后抗乳腺癌治疗提供新的靶点和思路。

本研究结果显示，在Resistin 高表达的乳腺癌组织中FSCN1 表达增高，Spearman 相关分析显示Resistin 和FSCN1 蛋白表达显著正相关。结合文献报道，我们推测乳腺癌中Resistin 及其下游信号通路可能对FSCN1 存在正性调控作用。p44/p42 MAPK（ERK1/2）通路是否可能介导了Resistin 对FSCN1 表达的调控有待进一步研究。本研究生存分析结果显示Resistin 和FSCN1 均高表达的乳腺癌患者5年平均生存期和总生存率显著低于Resistin和FSCN1单一高表达者及Resistin 和FSCN1 均低表达者，提示Resistin 和FSCN1 均高表达的乳腺癌患者预后不良，它们高表达对患者预后的影响可能具有协同作用。因此，同时抑制Resistin和FSCN1 可能是抗乳腺癌治疗的一个新的潜在可行的策略。

利益冲突：作者已申明文章无相关利益冲突。