正交实验法优选醋南五味子的工艺研究

种 振，高 波，罗 川，胡 雨

(1 安徽华润金蟾药业股份有限公司，安徽 淮北 235000；2 华润三九医药股份有限公司，广东 深圳 518000)

南五味子为木兰科植物华中五味子的干燥成熟果实。加工方法为采摘，晒干，除去果梗和杂质[1]。其主要化学成分有木脂素及挥发油等[2]。临床上多用于久嗽虚喘，梦遗滑精，自汗盗汗，津伤口渴，心悸失眠[1]。其中，五味子酯甲是五味子木脂素的主要成分之一，具有较强的抗氧化活性[3-4]。南五味子醋炙以后，温补功效增强，常采用加入米醋拌匀润透后蒸制加工而成[5]。《中华人民共和国药典》2015版对南五味子醋制加工炮制工艺收载比较笼统，概括性较强，没有确切的执行参数。目前，关于醋南五味子工艺研究的文献[6-7]，没有对南五味子醋制加工后成品的性状评价。而本研究以南五味子醋制成品的性状和五味子酯甲为双指标，采用正交实验设计，优选南五味子醋制加工工艺，以期为南五味子醋制加工的产量化及规模化生产提供技术支持[8]。

1 仪器和试剂

1.1 仪 器

高效液相Ultimate 3000色谱系统，包括自动进样器、色谱柱温箱、紫外检测器、色谱管理系统；C18色谱柱、超声清洗仪、中药粉碎机、XP26型百万分之一电子天平。

1.2 试 剂

五味子酯甲对照品、色谱乙腈、水为娃哈哈纯净水、南五味子饮片(批号：18042511)；本研究用的南五味子饮片购自亳州市某饮片厂，经鉴定是：木兰科植物华中五味子的干燥成熟果实[1,8]。

2 方 法

2.1 指标性成分含量测定

2.1.1 色谱条件及系统适用性

C18色谱柱，流动相：四氢呋喃-水(38:62)，检测波长：254 nm；流速为 1.0 mL/min，柱温：25 ℃。理论板数按五味子酯甲峰计算应≥3000，色谱峰对称性良好[1,8]。见图1。

图1 南五味子HPLCFig.1 HPLC of vinegar prepared South Wuweizi

2.1.2 对照品溶液的制备

取对照品五味子酯甲适量，参照《中国药典》(2015版)南五味子药材标准含量测定项对照品溶液的制备方法制备对照品溶液，即得[1,8]。

2.1.3 供试品溶液的制备

参照《中国药典》(2015版)南五味子药材标准含量测定项供试品溶液的制备方法制备样品溶液，即可[1,9]。

2.2 正交实验

2.2.1 醋南五味子炮制工艺的正交实验设计

基于南五味子醋制加工文献检索综述[5-10]及单因素实验考察，采用L9(34) 正交实验，考察醋的用量(A)、蒸制加工时间(B)、闷润透心时间(C) 等因素，以南五味子醋制品性状和及南五味子有效成分五味子酯甲为双评价指标，优选南五味子醋制加工的炮制工艺。因素水平见表1。

表1 正交实验因素水平表Table 1 Table of factors and levels of orthogonal test

2.2.2 饮片性状的评分标准

《安徽省中药饮片炮制规范》(2005版)及《中华人民共和国药典》(2015版)关于南五味子醋制加工品的性状收载为：南五味子醋制品表面棕黑色，油润。微有醋香气[1,11-12]。本实验按照正交实验加工制备南五味子醋制品，参照药典及炮制规范对南五味子醋制品进行性状评分，南五味子醋制加工品具体性状及评分详见表2[8]。

2.2.3 综合评分标准

为了更客观地评价南五味子醋制品的质量，本研究以南五味子醋制品外观性状和五味子酯甲为评价指标，用综合评分法来评定实验[12-13]。五味子酯甲是《中华人民共和国药典》(2015版)规定的指标性成分，故拟定该指标权重系数为0.7；饮片外观性状是中药饮片的传统质量评价指标，是评价饮片质量优劣的关键性因素之一[13-14]，故将其作为评价指标，并拟定其权重系数为0.3。综合的评分=饮片的性状评分+五味子酯甲含量评分[8,12-13]。实验结果及直观分析结果见表2，方差分析结果见表3。

表2 南五味子醋制工艺的正交实验结果(n=3)Table 2 The results of orthogonal test of vinegar prepared South Wuweizi(n=3)

由直观分析的结果可知，各个因素对南五味子醋制加工工艺的影响顺序为 B>C>A。由方差分析可知蒸制加工时间(B因素)对南五味子醋制加工工艺有显著性影响[7]，醋的用量及闷润透心时间(A及C 因素)则对南五味子醋制加工工艺无显著性影响。故综合分析可知南五味子醋制的最佳炮制工艺为 A1B1C2，即取净南五味子适量，加入南五味子量20%的米醋拌匀，闷润1 h至透心，放入蒸药锅中蒸制加工7 h，取出，在60 ℃条件下干燥[7-8]。

表3 综合评分方差分析Table 3 Variance analysis of comprehensive score

2.3 验证性实验

取净南五味子样品适量，依照优化出的最佳工艺平行制备3 份样品，观察南五味子醋制品性状及测定成品中五味子酯甲含量，具体实验结果见表4。

表4 验证结果Table 4 The results of verification test

结果表明，采用该优选工艺炮制的样品性状及五味子酯甲含量均较稳定，表明该加工工艺较稳定。即南五味子醋制最佳工艺为：取净南五味子适量，加入南五味子量20%的米醋拌匀，闷润1 h至透心，放入蒸药锅中蒸制加工7 h，取出，在60 ℃条件下干燥[8]。

3 讨 论

南五味子醋制加工品蒸至外表面呈棕黑色，稍有光泽，油润，微有醋香气时，成品质量较优，这也与南五味子醋制加工成品传统外观性状及现行版药典描述相一致[8]。表明外观性状是中药饮片的关键评价指标之一，是传统意义上饮片内在化学成分及化学成分集群不能替代的评价标准[14]。

南五味子醋制加工文献[5-7]优选的工艺各不相同，本文以多指标代替单一指标来考察醋南五味子的炮制工艺，其结果更具科学性和客观性。本实验以外观性状及五味子酯甲为综合评价指标，采用正交实验法优选出的醋南五味子的加工炮制工艺稳定，重现性良好，可为醋南五味子的工业化生产提供一定的数据支持。将来，还应把化学成分与药效学结合一起优选加工炮制工艺，以期所优选工艺更客观实用。