秩边透水道针法干预少弱精症大鼠的实验研究

曹韵茗，姜会真，李佳茹，杨郁鹏，司佳弘，任华山，赵季宇，金晓飞，燕 平

（山西中医药大学，山西 晋中 030619）

男子不育的原因多为少弱精症，少弱精症是指男性精液中精子数量低于正常参考值范围（20×106/mL），或精子运动能力差，甚至不运动［1］。

“秩边透水道”是长针疗法中的特殊刺法，由山西名医冀来喜教授提出并规范了其操作方法，后又通过多年的临床实践和科学研究，逐渐建立起较为成熟的针法体系［2］。基于该针法能够有效治疗泌尿生殖系统疾病，并且普通常规针刺能够对少弱精症患者的精液质量有所改善［3-4］，本研究欲探究“秩边透水道”针法对腺嘌呤诱导下少弱精症大鼠的精液质量及激素卵泡刺激素（follicle-stimulating hormone，FSH）、黄体生成素（luteinizing hormone，LH）、睾酮（testosterone，T）水平的影响，从而为临床提供可靠的实验依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 Sprague-Dawley（SD）大鼠40只，清洁级、健康、成年雄性，体质量（200±20））g，购于北京市海淀兴旺动物养殖场［SCXK（京）2014-0013］，并于山西中医药大学动物实验中心饲养，室温（25±2）℃，湿度55%～60%，噪音低于60 分贝，自由摄食饮水。

1.1.2 试剂与仪器 Vetec Adenine（美国SIGMAALORICH）；徕卡（Leica）正置生物显微镜（DM400B/DFC4SOC，徕卡微系统有限公司）；Rat Testosterone（T）ELISA Kit 96T，Rat Luteotropic hormone（LH）ELISA Kit 96T，Rat Follicle-stimulating hor mone（FSH）ELISAKit 96T 均购置于Bio-Swamp公司。

1.2 实验方法

1.2.1 分组与造模 将40 只SD 大鼠称重后编号，根据随机数字表法分为空白组、模型组、肾俞组、秩边透水道组4 组，每组10 只，5 只/笼。模型组、肾俞组、秩边透水道组大鼠以20 mg/mL 腺嘌呤溶液按1 mL/100 g 体质量灌胃，共28 d，制备大鼠少弱精症模型。空白组使用等量的生理盐水连续灌胃28 d。

1.2.2 干预措施 模型建立后，肾俞组选取双侧肾俞穴进行针刺干预，深度约为6 mm。秩边透水道组治疗方法：大鼠呈俯卧位进行固定，用针灸针快速刺入秩边穴，并往水道穴方向透刺进针，深度8～12 mm。皆行平补平泻手法，留针30 min，1 次/d，连续治疗28 d。空白组与模型组只进行等时间的抓取固定，不做其他处理。

1.2.3 标本采集与指标观察

1.2.3.1 一般情况 逐日监测记录各组大鼠毛发光泽、活动状况、反应表现、食量、体质量等方面的变化。

1.2.3.2 血清中FSH、LH、T 含量 大鼠使用10%水合氯醛麻醉，待夹尾无肢体反应后于腹主动脉处进行采血，静置、分离出血清，并遵照ELISA 试剂盒说明书对血清中FSH、LH、T 的含量进行检测。

1.2.3.3 精子质量分析 麻醉后断头处死各组大鼠，摘取睾丸、附睾、肾脏等相关脏器，剪取附睾尾部10 mg，经离心、孵化、混匀后，在血细胞记数板上行镜下观察，记录精子总数与活力，并计算出精子密度。按照WHO 推荐使用的方法对精子活力进行分级并记录。向前运动（PR）：即不考虑速度的情况下能够主动呈直线或沿大圆周进行运动。非向前运动（NP）：即其余非向前运动的形式，如运动轨迹呈现出小圆周型，尾部无法驱动头部，或者仅有尾部运动。不动（IM）：即没有运动。精子活动率=（PR+NP）/ PR+NP+IM。

1.3 统计学方法

使用SPSS 24.0 软件对资料进行统计与分析，数据以均数±标准差（）表示。计量资料满足正态性且方差齐，组间采取单因素方差分析（One-way ANOVA）进行比较，两两比较以LSD-t法进行；符合正态分布、方差不齐及不符合正态分布，采用非参数检验比较。以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 一般情况

空白组大鼠无异常情况，模型组、肾俞组和秩边透水道组大鼠均有不同程度的变化，出现毛发发黄，粗糙，光泽度下降，并且整体精神状态欠佳，活动量也有所下降。

2.2 血清中FSH、LH、T 含量

4 组大鼠血清FSH 含量比较差异无统计学意义（P＞0.05）；与空白组比较，模型组LH 含量升高，T 含量下降（P＜0.01）；与模型组比较，肾俞组、秩边透水道组LH 含量降低，T 含量升高，差异具有统计学意义（P＜0.01）；肾俞组、秩边透水道组LH、T 含量比较差异无统计学意义。结果见表1。

表1 大鼠血清中FSH、LH、T 水平的变化 （）

表1 大鼠血清中FSH、LH、T 水平的变化 （）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01

2.3 精子质量

与空白组比较，模型组大鼠精子密度与活力下降明显（P＜0.01），提示造模成功；与模型组比较，肾俞组、秩边透水道组精子密度和活力均升高（P＜0.01），秩边透水道组较肾俞组精子密度及活力升高幅度更大（P＜0.05）。结果见表2。

表2 各组精子密度与精子活力的变化 （）

表2 各组精子密度与精子活力的变化 （）

注：与空白组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01；与肾俞组比较，3）P＜0.05

3 讨论

造成男性不育症的原因大致有先天生殖器异常、内分泌紊乱、免疫性因素以及外界环境污染、化学药物造成的器质性病变，或因功能性病变如早泄、勃起功能障碍、性欲淡漠等，从而引起下丘脑-垂体-睾丸轴调节功能异常［5］，造成睾酮T 等激素水平下降，精子密度和精子活力也随之下降。

用以维持男性生殖系统正常功能的雄激素，是精子得以产生、发育和成熟的基础，主要为睾酮（T），经由生物轴下丘脑-垂体-睾丸实行双向调控分泌［6］。呈脉冲式分泌的促性腺激素释放激素（GnRH）由下丘脑产生并作用于垂体，使垂体前叶继而分泌合成卵泡刺激素（FSH）和黄体生成素（LH），睾丸内的间质细胞受到LH 的刺激生成睾酮，以促进精子的成熟；而FSH 通过结合相应受体提高曲细精管腔的睾酮浓度，进而加快成熟精子的分化程度［7］，所以说睾酮的含量直接影响到精子的质量。

在一些生殖泌尿疾病的治疗中，针灸已作为一种常用的手段和方法。在临床实践中，作为传统针法的秩边透水道技术已得到广泛使用。从其经络属性上来看，秩边穴归属于膀胱经，络肾，膀胱经分布于头面、腰背及下肢外侧，别入于肛。根据现代解剖研究，膀胱经与人体中枢神经及周围神经存在着某种联系［8］，加之骶区的秩边穴下分布有丰富的神经网络，无疑可扩大其主治范围［9］。临床治疗时发现针感可向下肢放射至足趾部，治疗下肢、腰部的疾患，如坐骨神经痛［10］；针刺朝向肛周区域可用于直肠痈等肛肠类疾病的治疗［11］；若针尖转向会阴部，则可放射至前阴部，通过刺激盆丛神经治疗多种原因导致的尿潴留［12-13］、尿失禁［14］以及前列腺相关的泌尿生殖系统疾病［15-16］；刺向小腹则擅治原发性痛经［17-18］和多囊卵巢综合征［19］等妇科疾患。

基于秩边穴的特殊解剖位置，本研究通过秩边透刺水道来刺激阴部神经、盆丛神经等，以激活下丘脑-垂体-睾丸轴的分泌作用。结果显示4 组间FSH 含量比较差异无统计学意义，与高学勇等［20］研究结果类似，分析其可能与该生物轴复杂的双向调节机制有关。在GnRH 的影响下，FSH 和LH同样呈现出脉冲式分泌，加之FSH 比LH 的半衰期长，故而FSH 的脉冲式分泌特征不如LH 明显［21］；同时GnRH 的脉冲频率也会影响到LH 和FSH的分泌水平，GnRH 脉冲频率较高时有利于促进LH的分泌，而较低时则有利于促进FSH 的分泌［22］；另外，睾丸支持细胞内的FSH 受体在受到FSH 刺激后会分泌生成一种抑制素，而这种物质具有选择性抑制垂体分泌FSH 的功能［23］。

本研究结果提示两种针刺干预手段对少弱精症大鼠模型均有效果，均能降低大鼠血清中FSH、LH、T 含量，提高大鼠精子密度与活力，且秩边透水道针法对精子密度与活力的疗效更明显。由于本实验的局限性，未能测得两种针刺干预方法对激素分泌时间与效应关系的影响，有待于进行进一步的实验探究。