无针注射器接种犬瘟热疫苗免疫效果评价

翟晓虎 ， 曹 斌 ， 贺卫华 ， 祝正高 ， 张春莉

(1.江苏农牧科技职业学院 , 江苏 泰州 225300 ； 2. 江苏珀可医疗科技有限公司 , 江苏 泰州 225300)

犬瘟热(Canine distemper，CD)是由犬瘟热病毒(Canine distemper virus, CDV)感染引起的急性、高度接触性传染病[1]。CDV可以感染犬科、猫科、浣熊科以及非灵长类等动物[2-3]。CDV主要侵害动物的消化系统、呼吸系统和神经系统[4]，幼龄动物易感，幼犬感染后死亡率较高[5-6]。动物接种疫苗是控制该传染病的最有效途径，主要接种的疫苗有灭活苗和弱毒苗，以弱毒苗为主[7]。

目前，动物医院注射疫苗的方式仍以普通带针头注射器为主，而有些犬、猫对疼痛比较敏感，注射后经常会出现一些副作用。无针注射可以降低因注射疼痛而出现的并发症，得到临床兽医的认可。无针注射是指进行药物注射时利用机械装置产生的推力瞬间将药液穿过皮肤表皮细胞，像水花均匀分布在皮下或皮内的注射方法[8]。如今人医有关无针注射技术的报道主要集中在胰岛素的注射和瘢痕组织药物注射治疗[9-10]。其用于疫苗接种方面可表现为注射效率高、避免交叉感染、抗原分散高和降低动物疼痛感等优点。周海龙等[11]对猪瘟活疫苗无针注射的免疫效果进行了评价，而有关犬无针注射疫苗免疫效果评价的文献并未查到。本试验采用无针注射接种犬瘟热疫苗，观察注射时疼痛反应、副作用并评估免疫效果。

1 材料与方法

1.1 试验动物 年龄为42～45日龄健康拉布拉多犬和金毛巡回猎犬，均断奶且未注射任何疫苗,来自江苏农牧科技职业学院宠物繁育中心。

1.2 试验材料 卫佳伍疫苗(含犬瘟热抗原Snyder hill株)，购自泰州欣牧宠物用品有限公司(批号：300628A)；犬瘟热病毒抗体(CDV Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒，购自上海联硕生物科技有限公司(货号：AE93755Ca，批号：201911)；有针注射器；无针注射器(型号：POK-P-I)，由江苏珀可医疗科技有限公司提供。

1.3 试验方法 将30只42～45日龄幼犬随机分成3组，每组10只；第1组采用有针注射器注射1头份卫佳伍疫苗，第2组使用无针注射器注射1头份卫佳伍疫苗，第3组使用无针注射器注射1/2头份卫佳伍疫苗。第2组、第3组无针注射接种时CO2气体压力为1.5 MPa。首免后14 d和28 d，再用同样的接种剂量和接种途径进行二免和三免。

1.4 比较2种注射方法接种疫苗后对动物的影响 采用有针注射器和无针注射器接种疫苗后，分别于接种后10 min、30 min、1 h、6 h和12 h观察疫苗接种部位有无出现红、肿、热、痛等炎症反应；观察注射后幼犬疼痛反应、有无药液渗出；观察疫苗注射后1 d、3 d和5 d幼犬的食欲、精神状态，比较无针注射器和有针注射器接种疫苗后对幼犬的影响。

1.5 CDV抗体检测 卫佳伍疫苗首免后14 d、二免后14 d、三免后14 d颈静脉采血，分离血清，按照犬瘟热病毒抗体(CDV Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒操作步骤进行检测，在450 nm波长处测定OD值，将OD值带入标准品制作的直线回归方程，计算每只犬产生的CDV抗体浓度。

1.6 统计分析 用SPSS软件统计每组犬在免疫后同一时间节点产生抗体浓度，结果以平均值±标准差表示，分析各组之间的差异，确定无针注射器对犬瘟热疫苗免疫效果的影响。

2 结果

2.1 不同接种方法接种卫佳伍疫苗后对犬的影响 2种注射方法接种疫苗后均未出现食欲减退、精神萎靡、药液渗出等现象。结果显示(表1)，有针注射接种疫苗后1只犬接种部位皮肤出现轻微炎症反应，12 h后消失；有针注射接种疫苗时，针刺入皮肤到药液注射完毕，8只犬出现挣扎和呻吟等疼痛反应，而无针注射接种疫苗时，只在接种瞬间因设备内部击发装置撞击时产生的声响，犬会出现立耳等集中注意力表现，并无疼痛反应。

表1 不同接种方法接种疫苗对犬的影响Table 1 Effects of different vaccination methods on dogs

2.2 各组CDV抗体浓度比较 分别于首免后14 d、 二免后 14 d和三免后14 d采血分离血清，检测血液里CDV抗体浓度，根据上海联硕生物科技有限公司犬瘟热病毒抗体(CDV Ab)酶联免疫分析(ELISA)试剂盒说明书，当测得抗体浓度大于12 ng/L 时，判断该样本抗体呈阳性，具有保护作用。结果显示(图1)，采用有针注射方法接种1头份疫苗和无针注射方法接种1头份、1/2头份疫苗，首免、二免和三免后14 d所测的抗体浓度均能达到保护水平。首免后14 d、二免后14 d和三免后14 d所测抗体水平，无针注射方法略高于有针注射。二免后14 d 后体内产生的抗体水平大于首免后14 d，说明第2次加强免疫可继续提高抗体水平，但是三免后14 d，3种注射方法抗体水平均呈现下降趋势，但仍可达到保护水平。

图1 免疫后CDV抗体浓度检测Fig.1 Detection of CDV antibody concentration after immunization注：小写字母不同表示差异显著(P<0.05)，字母相同或无标记表示差异不显著(P>0.05)Note: Different lowercase letter superscripts show significant difference (P<0.05)，same letter or no letter superscript show no significant difference (P>0.05)

3 讨论

3.1 无针注射接种疫苗的有效性 2种注射方法接种卫佳伍疫苗后，首免后14 d的CDV浓度均达到最低有效浓度，具有保护作用，说明犬采用无针注射接种疫苗是有效的；本试验首免后14 d、二免后14 d和三免后14 d对比2种注射方法抗体生成浓度，无针注射组抗体水平略高；无针接种1/2头份疫苗和有针注射1头份疫苗相比，相同阶段无针注射1/2头份疫苗产生的抗体水平略高，这可能是因为无针注射药液进入体内瞬间分散，这种分散的抗原有利于与免疫细胞的接触，生成相对较多的抗体。周海龙等[11]也曾报道，无针注射1/2头份猪瘟活疫苗和使用有针注射器注射1头份疫苗产生抗体相当。本试验检测三免后14 d的CDV抗体浓度低于首免后14 d、二免后14 d。其原因是按照该疫苗免疫程序接种，二免后抗体水平已经很高，第3次免疫中和了部分抗体，导致血清抗体浓度下降，但仍大于12 ng/L，具有保护作用。

3.2 无针注射的安全性 本试验采用的2种接种疫苗方法，无针注射后没有出现食欲不振、精神萎靡及注射部位炎症反应等副作用，而且明显降低犬疼痛感，说明采用无针注射器接种疫苗是安全的。朱文勇等[12]在无针皮内免疫接种Sabin IPV疫苗的安全性及免疫原性研究中也评估了无针接种sIPV疫苗是安全的。

综上所述，采用无针注射器给犬接种疫苗是安全的、有效的，而且最大的优点是降低了动物注射时的疼痛感，进而减小了兽医人员给犬接种疫苗时被犬咬伤的风险，可代替普通注射器进行疫苗接种。