双重超声造影评估胃癌细胞侵袭及血管生成的价值

庞娟娟 张永凤 王 雪

目前，我国胃癌的发病率逐渐升高，大部分胃癌患者早期不会出现明显症状，因此早期胃癌的诊断准确率较低［1］。临床上以灶细胞活检和病理结果作为诊断胃癌的金标准，但胃镜检查具有创伤性，无法作为常规筛查手段。杨琴［2］发现双重超声造影可通过造影剂和超声影像反映肿瘤部位血流灌注情况，已应用于肝、肺、直肠癌等肿瘤疾病的诊断，但对于胃癌早期细胞侵袭和新生血管形成研究较少。基于此，本研究对40例胃癌患者行双重超声造影检查，旨在探讨超声造影评估胃癌患者癌细胞增殖、侵袭功能及血管新生的临床应用价值。

资料与方法

一、研究对象

选取2018年8月至2019年12月我院收治的40例胃癌患者（观察组），男22例，女18例，年龄46～77岁，平均（62.25±5.74）岁，体质量49～81 kg，平均（60.65±6.65）kg；病理分化中低分化24例，中高分化16例。纳入标准：①均经病理确诊为胃癌；②3个月内未行胃镜检查，无放化疗干预史；③不伴其他恶性肿瘤疾病。排除标准：①妊娠期或哺乳期患者；②存在认知功能障碍或无法正常沟通交流者；③合并凝血功能障碍疾病者；④对本研究方法或药物不耐受者。另选同期行胃镜检查的健康成人50例（健康对照组），男27例，女23例，年龄44～79岁，平均（61.87±6.03）岁，体质量50～82 kg，平均（61.16±6.85）kg。两组一般资料比较差异均无统计学意义。本研究经我院医学伦理委员会批准，所有患者及家属均签署知情同意书。

二、仪器与方法

1.双重超声造影：使用麦迪逊Accuvix XQ彩色多普勒超声诊断仪，探头频率3.5～5.0 MHz。检查前受检者禁食8 h，取仰卧位，常规超声观察其空腹状态下肝脾肾胃胆及盆腔等部位是否存在异常回声［3］；然后服用造影剂600 ml（1.5%泛影葡胺，南京正大天晴制药有限公司），观察食管、胃部灌注情况，于不同体位下扫查胃底部、胃中部、胃窦，明确病变部位，记录胃部形态和病灶信息（位置、体积、回声、形态、浸润程度等），调整图像直至出现肿瘤病灶最清晰、最大横截面。经肘正中静脉注入造影剂（碘帕醇注射液，南京正大天晴制药有限公司）2.4 ml与生理盐水5.0 ml混合液，随即注射生理盐水5.0 ml冲管，启动计时器，观察病灶区域动态造影图像并储存。造影过程为5 min，观察肿瘤病灶与正常组织的超声造影感兴趣区，分析仪器内置时间-强度曲线（TIC），获得超声造影参数增强时间（ET）、峰值时间（TTP）、曲线上升支斜率（WIR）。

2.实验室检查：①胃癌细胞侵袭基因mRNA表达检测使用荧光定量法，操作流程严格按照KAPA Express Extract试剂盒（广州燕嘉生物科技有限公司）说明书，检测指标包括真核起始因子4E（EIF4E）、CD44基因、E-钙黏蛋白（E-cadherin）、泛素样含PHD和环指域蛋白1（UHRF1）的mRNA侵袭表达量；②血管新生指标检测使用酶联免疫吸附法，操作流程严格按照试剂盒（上海沪震实业有限公司）说明书，检测指标包括内皮生长因子（VEGF）、促生长因子（IGF-1）、α-1-微球蛋白-胰蛋白酶抑制剂前体（AMBP）、可溶性E-钙黏蛋白（SE-CAD）等。

三、统计学处理

结 果

一、两组双重超声造影检查情况

超声造影显示观察组胃壁广泛不规则增厚，胃腔严重狭窄，呈“面包圈”征，强化部分与邻近正常组织界限不明显；病灶区域局部血流速度加快，造影剂强化时间缩短。观察组ET、TTP水平均低于健康对照组，WIR高于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1和图1。

表1 两组超声造影参数比较（±s）

表1 两组超声造影参数比较（±s）

ET：增强时间；TTP：峰值时间；WIR：曲线上升支斜率

组别健康对照组观察组t值P ET（s）15.44±1.89 9.29±1.01 18.556＜0.001 TTP（s）29.62±3.35 23.17±2.54 10.075＜0.001 WIR 5.28±0.73 7.86±0.93 14.356＜0.001

二、两组实验室检查指标比较

观察组EIF4E、CD44、UHRF1水平均高于健康对照组，E-cadherin水平低于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。观察组VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD水平均高于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表2。

图1 两组双重超声造影图

表2 两组实验室检查指标比较（±s）

表2 两组实验室检查指标比较（±s）

EIF4E：真核起始因子4E；E-cadherin：E-钙黏蛋白；UHRF1：泛素样含PHD和环指域蛋白1；VEGF：内皮生长因子；IGF-1：促生长因子；AMBP：α-1-微球蛋白-胰蛋白酶抑制剂前体；SE-CAD：可溶性E-钙黏蛋白

组别健康对照组（50）观察组（40）t值P组别健康对照组（50）观察组（40）t值P EIF4E 97.32±9.55 215.48±25.55 30.204＜0.001 VEGF（μg/L）74.92±9.04 253.87±59.07 68.404＜0.001 CD44 98.32±10.20 223.71±25.49 31.783＜0.001 IGF-1（μg/L）103.40±13.78 332.88±46.43 33.209＜0.001 E-cadherin 99.86±10.15 23.29±2.89 46.190＜0.001 AMBP（μg/ml）5.26±0.78 10.33±1.63 19.410＜0.001 UHRF1images/BZ_27_1538_476_1538_477.png103.31±11.64 243.18±29.01 31.137＜0.001 SE-CAD（μg/L）10.61±1.76 25.68±4.27 22.687＜0.001

三、相关性分析

Pearson相关分析显示，ET、TTP与E-cadherin均呈正相关，与EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈负相关（均P＜0.001）；WIR与Ecadherin呈负相关，与EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈正相关（均P＜0.001）。见表3。

表3 超声造影参数与胃癌细胞侵袭、血管生成指标的相关性分析

讨 论

胃癌是消化道常见恶性肿瘤之一，近年来我国发病率逐渐增高。血管新生是胃癌局部肿瘤恶性发展的重要特征，测定局部病灶组织内的微血管密度可获取其血管新生程度，进而确定病灶恶性发展程度。病灶血管新生检测方法多采用细胞组织活检法观察其微血管数量，过程复杂易出错，且会对患者造成二次伤害［4］。近年来，双重超声造影逐渐运用于胃癌的诊断和血管新生评估，其可清晰显示局部病灶内的血流灌注情况。本研究通过分析超声造影参数与胃癌细胞侵袭基因mRNA和胃部新生血管组织间的关系，旨在探讨双重超声造影评估胃癌患者癌细胞侵袭和血管新生的临床应用价值。

正常生理状态下的胃腔含大量气体和黏液，胃壁无法形成清晰的反射面，导致超声无法成为胃部疾病患者的常规检查手段。双重超声造影通过向胃腔内静脉注射造影剂，消除胃腔内胃气和黏液，可较清晰地显示胃壁内各层次组织。超声造影参数ET、TTP、WIR表示病变组织内浸润侵袭程度，当局部病灶组织血管内的血流速度越快、流量越大，造影剂强化时间就越短，通过比较造影剂灌注情况可分析局部肿瘤细胞侵袭程度和血管新生情况［5-6］。本研究选取40例胃癌患者作为观察对象，与健康对照组比较，胃癌患者的超声造影参数ET、TTP均降低，WIR升高，差异均有统计学意义（均P＜0.05），表明双重超声造影能够反映胃癌病灶与正常组织间的差异。马林伟等［7］发现，在疾病恶化进展过程中，胃癌病灶内出现大量新生血管，为病灶组织的恶性生物学行为提供营养支持，同时为病灶局部浸润和细胞远处转移提供物质支持。张海峰等［8］发现，VEGF、IGF-1作为肿瘤病灶内表达特异性最高的血管新生因子之一，是诱导增加促血管生长因子释放的关键因素。VEGF可通过直接刺激血管内皮细胞诱导其大量生成血管结构；IGF-1具有促有丝分裂作用，可刺激细胞快速增殖。此外，AMBP、SE-CAD等具有细胞侵袭功能的多种因子均具有促血管新生成作用。本研究观察组VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均高于健康对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），表明胃癌患者局部肿瘤病灶内的血管新生程度显著增多，细胞侵袭程度显著升高。

基因特殊表达也是病灶内组织细胞病变的重要表现，如胃癌病灶内的mRNA基因EIF4E、CD44、UHRF1高表达及E-cadherin低表达，均是通过调控基因异常表达加快肿瘤细胞病变转移［9］。本研究结果显示，观察组EIF4E、CD44、UHRF1水平均高于健康对照组，E-cadherin水平低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05），表明胃癌恶化发展与细胞侵袭基因特殊表达有关，可作为胃癌病灶恶性发展的判断指标。本研究相关性分析发现，ET、TTP与E-cadherin均呈正相关，与EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈负相关（均P＜0.05）；WIR与E-cadherin呈负相关，与EIF4E、CD44、UHRF1、VEGF、IGF-1、AMBP、SE-CAD均呈正相关（均P＜0.05）。提示双重超声造影参数ET、TTP、WIR与胃癌细胞侵袭、血管新生存在一定相关，与刘婕和贺海玲［10］的研究结论一致。

综上所述，超声造影参数ET、TTP、WIR能准确评估胃癌患者癌细胞侵袭和血管新生，具有较好的临床应用价值。今后需进一步纳入不同分期胃癌患者进行超声造影对比分析，为临床治疗提供更加准确的参考依据。