35%氯氟吡氧乙酸异辛酯·氰氟草酯·异噁草松乳油高效液相色谱法分析

2021-03-31徐勇存金鑫雷杨明君范伟赠张平

农业与技术 2021年5期

徐勇存金鑫雷杨明君范伟赠张平

(浙江天丰生物科学有限公司检测中心，浙江金华 321000)

35%氯氟吡氧乙酸异辛酯·氰氟草酯·异噁草松乳油是由氯氟吡氧乙酸异辛酯原药、氰氟草酯原药、异噁草松原药及乳化剂溶解在适宜的溶剂中配制而成的,是水稻田选择性茎叶处理三元复配除草剂,可用于防除千金子、稗草、马唐、牛筋草、狗尾草、双穗雀稗、空心莲子草等杂草。目前包含此3 种有效成分复配混剂的检测方法未见公开报道。本文列举的氯氟吡氧乙酸异辛酯·氰氟草酯·异噁草松检测方法可将氯氟吡氧乙酸异辛酯、氰氟草酯、异噁草松及其杂质快速的分离、检测。有利于帮助企业组织生产,并进行科学全面的质量管理,维护公司产品的信誉和用户的利益。

1 实验部分

1.1 仪器设备

高效液相色谱仪LC1260:配有二极管阵列检测器(美国Agilent 公司)；色谱柱:Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm (i.d.) 1.8μm (美国Agilent 公司)；电子天平:BP211D (德国赛多利斯公司)；超声波清洗器:KQ-400B (昆山市超声仪器有限公司)；超纯水机:Milli-Q (美国Millipore 公司)。

1.2 试剂

甲醇:色谱纯(美国TEDIA 天地试剂公司)；磷酸:分析纯(国药集团化学试剂有限公司)；氯氟吡氧乙酸异辛酯标样、氰氟草酯标样、异噁草松标样:采购自国家农药质量监督检验中心(沈阳),其质量分数分别为98.8%、98.7%、97.6%；35%氯氟吡氧乙酸异辛酯·氰氟草酯·异噁草松乳油样品(6.0%氯氟吡氧乙酸异辛酯加20.0%氰氟草酯加9.0%异噁草松):浙江天丰生物科学有限公司。各有效成分结构式见图1、图2、图3。

1.3 标准溶液和试样溶液的制备

1.3.1 标样溶液的配制

称取氯氟吡氧乙酸异辛酯标样0.012g、氰氟草酯标样0.040g、异噁草松标样0.018g (精确至0.00002g) 置于100mL 容量瓶中,加甲醇溶解,超声波浴槽中脱气10min,取出降至室温后,定容,摇匀,经微孔滤膜过滤,此为标样溶液。

1.3.2 试样溶液的配制

称取试样约0.20g (精确至0.00002g) 置于100mL容量瓶中,加甲醇溶解,超声波浴槽中脱气10min,取出降至室温后,定容,摇匀,经微孔滤膜过滤,此为试样溶液。

1.4 HPLC 分析条件

流动相:Ψ(甲醇+0.05%磷酸水溶液)=72+28(V/V)；流速:1.8mL·min-1；检测器波长:235nm；柱温:45℃；进样体积:5μL。

1.5 测定和分析

在上述操作条件下,待仪器基线稳定后,连续注入数针标样溶液,计算各针有效成分响应值的重复性,待相连两针各有效成分的峰面积变化小于1.5%时,按照标样溶液、试样溶液、试样溶液、标样溶液的顺序进行测定。35%氯氟吡氧乙酸异辛酯·氰氟草酯·异噁草松乳油典型的标样、试样色谱图见图4、图5,异噁草松保留时间约0.6min、氰氟草酯保留时间约1.7min、氯氟吡氧乙酸异辛酯保留时间约3.6min。

2 结果和讨论

2.1 色谱条件的选择

2.1.1 色谱柱的选择

选用Agilent Eclipse Plus C18,50mm × 4.6mm(i.d.) 1.8μm；Agilent Eclipse Plus C18,250mm×4.6mm (i.d.) 5μm；Thermo BDS HYPERSIL C18,250mm×4.6mm (i.d.) 5μm 色谱柱进行试验。经过试验发现,3 根色谱柱都能较好地分离各有效成分及杂质,但是Agilent Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm(i.d.) 1.8μm 色谱柱各有效成分的保留时间短,出峰快,检测时间短,故选择Agilent Eclipse Plus C18,50mm×4.6mm (i.d.) 1.8μm 色谱柱。

2.1.2 检测波长的选择

用二极管阵列检测器(DAD) 进行光谱扫描,结果在235nm 波长处各有效成分(氯氟吡氧乙酸异辛酯、氰氟草酯、异噁草松) 吸收值较大,各杂质在此波长下吸收值很小,故选择235nm 为检测波长。

2.1.3 流动相的选择

选用甲醇-0.05%磷酸水溶液、甲醇-水溶液不同配比浓度时,经过试验发现当流动相选用Ψ(甲醇+0.05%磷酸水溶液)=72+28 (V/V) 时,各有效成分及杂质得到很好的分离,峰形对称。

2.2 方法线性关系的测定

称取一定量的氯氟吡氧乙酸异辛酯标样、氰氟草酯标样、异噁草松标样 (精确至0.00002g) 置于50mL 容量瓶中,用甲醇溶解,定容。用移液管分别移取上述标准溶液1.0mL、2.0mL、5.0mL、8.0mL、10.0mL 至50mL 容量瓶中,加甲醇定容。在同一色谱条件下测定上述5 个浓度的氯氟吡氧乙酸异辛酯(氰氟草酯或异噁草松) 峰面积,以质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标作图,测定其线性回归方程。结果见图6、图7、图8。

结果表明,氯氟吡氧乙酸异辛酯(氰氟草酯或异噁草松) 在此分析条件下具有良好的线性关系。氯氟吡氧乙酸异辛酯线性回归方程为y=4503.5x-7.6121,相关系数R2=0.9994。氰氟草酯线性回归方程为y=7633.6x+20.959,相关系数R2=0.9997。异噁草松线性回归方程为y=2760.5x+3.4615,相关系数R2=0.9995。

2.3 方法精密度的测定

选取一批合格的35%氯氟吡氧乙酸异辛酯·氰氟草酯·异噁草松乳油样品,按上述方法平行检测5次,方法精密度测定结果见表1。氯氟吡氧乙酸异辛酯标准偏差为0.03,相对标准偏差为0.50%；氰氟草酯标准偏差为0.06,相对标准偏差为0.30%；异噁草松标准偏差为0.04,相对标准偏差为0.42%。各组分的相对标准偏差均小于Horwits 公式计算值,证明此方法精密度较高,符合方法确认要求。

2.4 方法准确度的测定

在已知质量分数的35%氯氟吡氧乙酸异辛酯·氰氟草酯·异噁草松乳油试样中,加入一定量的氯氟吡氧乙酸异辛酯标样、氰氟草酯标样、异噁草松标样,按上述方法检测5 次,测定结果见表2,结果表明,氯氟吡氧乙酸异辛酯的平均回收率为99.07%,氰氟草酯的平均回收率为99.38%,异噁草松的平均回收率为99.16%,此方法具有较高的回收率。