一例猪混合感染的诊断与治疗

文│肖其伟（甘肃省酒泉市肃州区东洞镇人民政府）

2019年11月初，甘肃省酒泉市肃州区某规模化猪场发生疫情，主要是2周龄内仔猪出现大面积腹泻，部分仔猪有类似神经症状，且对猪群紧急免疫接种PRV弱毒疫苗后基本无效。对该场内死亡的仔猪进行剖检，无菌采集病变明显的组织样品，低温送至当地动物疫病专业检测实验室，进行细菌分离与病原诊断。其结果发现，出现疫情主要原因是猪链球菌、PCV2和PEDV混合感染所致，且分离得到菌株对氨苄西林、头孢噻肟和恩诺沙星等较敏感。

一、材料与方法

1.病料来源。该场仔猪腹泻严重，且伴随神经症状濒临死亡的2头仔猪肺、肾、小肠和淋巴结等组织发生病变。

2.主要试剂。PCR预混液、核酸染料、琼脂糖粉末、DL2000marker和cDNA反转录试剂盒等均购自宝生物工程（大连）有限公司；动物组织DNA/RNA核酸提取试剂盒购自郑州智杰生物技术有限公司；不同药敏纸片购自河北利华药业有限公司；普通琼脂培养基和鲜血琼脂培养基由本试验自配。

二、实验方法

1.细菌分离与鉴定。将75%酒精浸泡的手术刀擦拭干净并再次灼烧后，切开腹股沟淋巴结深处组织，用无菌接种后蘸取少量组织液在普通液体培养基中搅拌，将培养基在37℃的摇床（220转/分钟）培养12小时。其后，蘸取少量培养液分别在普通琼脂和鲜血琼脂培养基表面平板划线，置于37℃恒温箱内培养，16～24小时后观察培养基表面是否出现菌落，对获得的菌落进行革兰氏染色法，根据菌落形态学特征进行初步鉴定。

2.细菌药敏试验。将单一菌落扩菌后均匀涂布在普通琼脂培养基表面，待液面稍干贴上含有抗生素的药敏纸片，37℃恒温箱内培养12～16小时后，衡量抑菌圈直径大小。

3.病毒性病原检测。将病变组织样品（淋巴结、肺、小肠和肾等）切碎后混合，放在灭菌研钵中，加入适量生理盐水，反复研磨后过滤获得上清，使用试剂盒提取组织上清中核酸（含DNA和RNA），同时将RNA反转录为cDNA，采用RT-PCR法检测样品中是否存在PEDV、PRV、PRRSV、PCV2、猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）、猪德尔塔冠状病毒（PDcoV）和猪轮状病毒（PoRV）核酸。反应结束后，取5微升产物进行琼脂凝胶电泳，并观察结果。

三、实验结果

1.临床症状及病理变化。笔者随养殖人员进入发病猪场内，见大量因严重腹泻而极度消瘦的仔猪。仔猪腹泻呈喷射状，且肛门处沾满粪污；部分仔猪有神经症状，如转圈、磨牙等。该场暴发疫情以来，仔猪发病率达60%左右，病死率达75%。将病猪剖检发现，其全身淋巴结肿大；肾表面有出血点；小肠中可见少量内容物，肠壁薄且充血严重。

2.细菌分离鉴定与药敏试验结果。将培养基置于恒温箱内培养24小时后，可见2种培养基表面均出现光滑、湿润的菌落，进一步染色鉴定发现视野可见成对或成排的短链状革兰氏阳性菌，根据其形态学特征可确定为猪链球菌。进一步药敏试验结果发现，分离纯化的菌株，对氨苄西林、头孢噻肟、头孢氨苄、阿莫西林和恩诺沙星高度敏感，其抑菌圈直径均大于28毫米；对氟苯尼考、庆大霉素、四环素、林可霉素、链霉素等常见抗生素耐药，抑菌圈直径均低于10毫米。

3.病毒性病原检测结果。分子生物学诊断结果显示，检测的2份病料组织样品中均为PCV2和PEDV核酸阳性，但未检测出其他病原核酸。

四、诊断结果及讨论

综合发病猪群临床症状、剖检病变特征和实验室诊断结果，最终判定该场仔猪发生严重疫情由PCV2、PEDV和猪链球菌混合感染所致。

PCV2在我国猪场流行广泛，可导致病畜出现系列临床症状，如呼吸困难、消瘦和皮炎等。但PCV2感染导致病畜死亡率较低，可使病畜出现免疫抑制，从而导致病畜更加容易感染其他病原。猪链球菌属于机会致病菌，在猪场内广泛存在，当猪群免疫力较好时感染该病不表现明显临床症状；猪群因应激、营养不良或其他因素导致免疫力下降时，该病便表现出严重症状，如败血症、关节炎，甚至死亡。PEDV是导致仔猪腹泻的主要病原之一，但其引发的临床症状与其他肠道腹泻病相似，病原确定常需实验室诊断。

目前，猪群多种病原混合感染情况较为常见，对于此类疫病确诊也需要依靠实验室相关技术。对于细菌性病原的治疗可以通过菌株敏感药物的使用，而病毒性疫病防控暂时没有特效药物，只能依靠疫苗紧急免疫接种、抗病毒药物的使用和对症治疗。