鸭疫里默氏杆菌的研究进展

2021-03-27黄宁

甘肃畜牧兽医 2021年7期

黄宁

（西南大学动物医学院，重庆 402460）

鸭疫里默氏杆菌（Riemerella anatipestifer,RA），原名鸭疫巴氏杆菌，属于黄杆菌科里氏杆菌属，是引起1～8周龄，尤其是2～3周龄雏鸭传染性浆膜炎的病原菌[1]，已成为严重危害养鸭业的细菌性传染病之一。自1982年郭玉璞等[2]于北京郊区鸭场中分离出鸭疫里默氏杆菌后，我国各养鸭地区出现RA感染的报道层出不穷。RA感染后雏鸭主要表现生长发育受阻、肝周炎、纤维素性心包炎和气囊炎，严重者甚至死亡。此外，RA还可以侵害雏鹅、野鸡、火鸡等动物。目前国际认可的RA血清型有21个[3-5]，由于其血清型多样，且不同血清型菌株缺乏交叉免疫保护力，导致免疫预防效果不佳、极易产生耐药性。由此可见，RA给养鸭及其他养禽业带来了极大挑战。

鸭疫里默氏杆菌的防控对养鸭业的稳定持续发展尤为重要，本文对鸭疫里默氏杆菌的血清型、耐药机制、检测方法与治疗措施进行了综述，以期为进一步防控鸭疫里默氏杆菌疾病奠定理论基础。

1 鸭疫里默氏杆菌的流行情况

鸭疫里默氏杆菌病的传染源主要是被鸭疫里默氏杆菌感染而发病的鸭、鹅等动物。RA可以通过空气、被污染的饲料和饮水等途径传播，其主要传播方式包括消化道传播、呼吸道传播，其次是由于皮肤破损而感染[6]。该病属于接触性、细菌性传染病，在我国呈流行性分布，无明显季节性。

鸭疫里默氏杆菌病的最早报道是在美国纽约州长岛的养鸭场，在当地称作“新鸭病（New duck syndrome）”，后也被称作“鸭败血症（Duck septicemia）”。由于其典型病理表现为全身的浆膜面均可见纤维素性渗出物，且大多伴有炎性细胞浸润，Dougherty针对其典型的病理变化将该病命名为“传染性浆膜炎”[1]。

我国首次在北京发生鸭疫里默氏杆菌病，此后该病在全国各地，尤其是养鸭密集地区均有发生。如2017年雍燕等[7]于广东3个地区疑似患鸭疫里默氏杆菌病鸭中分离出16株对部分抗生素耐药的鸭疫里默氏杆菌；2020年陈国权等[8]于贵州省三穗县暴发大规模雏鸭死亡的养鸭场中分离出11型血清型的鸭疫里默氏杆菌，首次证明贵州省存在11型RA，并通过耐药基因检测出分离菌为5重耐药菌株；2021年董洪燕等[9]于江苏从鹅源分离出2型血清型的鸭疫里默氏杆菌，通过药敏试验结果显示所分离的RA多重耐药性严重。从各地区相关报道来看，我国RA的耐药现象不断出现，多重耐药性逐渐成为基本态势。

2 鸭疫里默氏杆菌的血清型

目前国际公认的RA血清型有21个[3-5]，该菌血清型多样复杂，且各血清型之间免疫交叉保护性差。1969年，Harry等[10]通过平板凝集试验将分离得到的鸭疫里默氏杆菌鉴定为16个血清型，并命名为A-P型。此后，随着其他血清型的相继发现，RA被重新用阿拉伯数字分为21个血清型[11]。2003年，程安春等[12]通过玻片凝集试验和琼脂扩散沉淀试验，对我国29个省分离到的1 842株RA进行血清学鉴定，发现了4株血清型，分别命名为22、23、24和25型血清型。2005年，张大丙[13]采用琼脂扩散沉淀试验，从只与血清10型的抗血清发生凝集反应的分离株中分离出4个亚型，分别是C2、C449、C459和C598。随后，张大丙等[14]又用凝集试验和琼脂扩散沉淀试验鉴定出从河北鸭场分离的13个RA株可能属于一种独立的血清型。这些发现刷新了我国及国际的鸭疫里默氏杆菌血清型数据，为进一步有效防控鸭疫里默示杆菌病奠定了理论基础。

近年来，我国流行菌株主要以1型血清型和2型血清型为主，其次是血清6型、10型。山东、广东、广西、湖北等地区的优势血清型为1型，浙江、贵州等地区的优势血清型为2型，江苏、安徽的优势血清型包括1型、2型[15]。部分地区的RA流行菌株暂不确定。

3 检测方法与防治措施

3.1 检测方法

目前，可根据患病动物的临床症状、病理剖检变化进行初步诊断，确诊需要进行实验室诊断。

3.1.1 临床症状该病可根据病程长短分为最急性型、急性型、亚急性型和慢性型。急性型发病急，较少见。慢性型主要见于日龄大的雏鸭[16]。患鸭主要表现为精神沉郁，食欲减退，消瘦，生长迟滞，喜卧恶动，缩颈垂翅；呼吸道症状主要见于咳嗽、打喷嚏，鼻、眼等天然孔可见大量黏液性、浆液性、脓性分泌物；神经症状表现为角弓反张，步态不稳，头颈歪斜，呈劈叉姿势，抽搐痉挛，最终死亡。患病鹅等其他易感禽类症状与患鸭相似。

3.1.2 病理剖检变化该病的病理变化主要以纤维素性物质渗出为主，常见典型症状有心包炎、肝周炎、气囊炎等[1]。此外，可见肝、脾肿大，被膜显著增厚，表面被覆灰白色或灰黄色、易剥离的纤维素膜。大多数急性型病例可见心脏肿大，表面被覆灰白色绒毛状的纤维素性渗出物，且伴有大量炎性细胞浸润；大多数病鸭气囊也可见灰白色纤维素性渗出物，且炎性细胞浸润；少数病鸭生殖系统可见病变，如输卵管膨大，横切可见内含大量豆腐渣样的白色干酪样物质；关节液明显增多，关节（尤其是跗关节）肿大；大脑为纤维素性脑膜炎，也可见大量纤维素性渗出物和炎性细胞浸润；极少数病例肺脏出现充血、出血和实变等明显病变[17]。

3.1.3 鉴别诊断由于鸭疫里默氏杆菌病、大肠杆菌性败血症和鸭沙门氏菌病理变化均可见浆膜炎病理变化，故三者容易混淆，需要通过细菌的分离培养和生化试验进一步鉴定。

3.1.4 实验室诊断一是细菌的分离与鉴定。无菌条件下采集病鸭的脑组织、心血、肝脏等病原菌较丰富的部位，分别接种于普通琼脂、胰酶大豆琼脂培养基（TSA）、巧克力琼脂培养基、鲜血琼脂培养基和麦康凯琼脂培养基，置于CO2培养箱或蜡烛缸，37℃培养24～48 h[1,6,18]。

肉眼观察菌落形态特点，鸭疫里默氏杆菌在普通琼脂培养基、麦康凯琼脂培养基上不生长（该特点可与大肠杆菌区别），在巧克力或TSA培养基上可见呈灰白色、圆形隆起、奶油状、表面光滑、湿润、直径1～2 mm的菌落。挑取巧克力琼脂培养基上的单个疑似菌落涂片，采用革兰氏染色或瑞氏染色等方法染色，镜检，可见鸭疫里默氏杆菌呈短杆状或椭圆形，散在、成双或短链排列，革兰氏染色呈阴性、瑞氏染色呈两极着染[1]。

二是生化试验诊断。挑取平板上的单个疑似菌落分别接种于生化反应管中，37℃培养24～48 h，与多杀性巴氏杆菌病不同，鸭疫里默氏杆菌不发酵葡萄糖、蔗糖。硝酸盐还原、VP试验、甲基红试验、尿素分解试验等均呈阴性，不产生硫化氢。触酶试验、氧化酶试验呈阳性。无溶血现象，可液化明胶[1]。

三是药敏试验诊断。由于大多数养殖场存在抗生素滥用的现象，不同血清型的RA对多种抗生素均产生不同程度的耐药性。因此，RA耐药性的鉴定对养殖场合理防治鸭疫里默氏杆菌病显得尤为重要。主要采用K-B纸片扩散法，在已涂布分离菌的TSA平板表面贴上不同的抗生素纸片，48 h后通过测量各抑菌圈直径大小判断分离菌的耐药性。抑菌圈直径大于20 mm，非常敏感；抑菌圈直径为15～20 mm，高度敏感；抑菌圈直径为10～15 mm，中等敏感；抑菌圈直径小于10 mm，低等敏感甚至不敏感[6]。

四是免疫学诊断。目前国内外常用的血清型鉴定方法包括玻片凝集试验、试管凝集试验和琼脂扩散沉淀试验[19,20]。1982年，Brogden[21]等认为琼脂扩散沉淀试验可以有效进行血清型分型，且通过稀释琼扩抗原可避免交叉反应。1991年，Sandhu和Leister[22]提出采用细菌洗涤的玻片凝集试验可以快速有效检测出大量野外分离菌。

近年来，Bin Huang[23]等建立了用RA的P45 N末端重组蛋白作为包被抗原的间接ELISA检测方法，对RA早期感染进行检测。2004年，程安春[24,25]等以采用超声波裂解的血清1型、2型、4型RA作为包被抗原，建立血清1型、2型、4型的RA抗体水平检测的间接ELISA检测方法。这些新建立的ELISA法具有定性或定量检测血清中的抗体水平、判定疫苗免疫效果、判定是否RA感染、特异性强等特点。

五是分子生物学诊断。PCR法也可用于RA鉴定，具有操作简便、快捷、特异性强、灵敏度高等特点，适用于大量样本的检测。2002年胡清海[26]等以RA的15型CVL110/89株编码42-kDa主要外膜蛋白的基因序列设计合成一对引物，建立了RA的PCR检测方法，并利用该法对7个血清型的RA纯培养菌的DNA成功扩增出809 bp的DNA，而对照组的大肠杆菌和沙门氏菌纯培养物DNA扩增结果呈阴性。2005年，Hsiang-Jung Tsai[27]等建立了16S rRNA法，并利用该法扩增了18株台湾株和10株参考株。

3.2 防治措施

3.2.1 日常预防措施加强饲养管理和生物安全措施。对于规模化养殖场，应采取全进全出的管理模式。合理控制饲料配比，饲喂营养充足的饲料，适时补充维生素和矿物质等营养物质，有利于提高机体免疫力。尽量减少各种应激因素，定期进行环境卫生消毒，尤其避免饲料和饮水被污染。避免养殖场鸭群或鹅群接触野生动物，也可以根据药敏试验结果选用合适的抗菌药物。此外，如果养殖场位于疫病流行区，应及时对动物群体进行疫苗接种。由于RA血清型多样，且各血清型之间无交叉免疫保护，因此可以制备当地流行菌株的灭活疫苗进行预防接种。

3.2.2 疫病发生时的措施如果发生疫病，应及时将患病动物群与假定健康动物进行隔离。对患病及病死鸭、鹅等动物尸体和粪便进行焚烧、填埋等无害化处理。对被污染的禽舍环境可以使用高效消毒剂消毒[28]。根据药敏试验结果，对患病鸭、鹅进行药物治疗，严重者需及时淘汰，防止病原扩散。