医学院校科研教学中神经胶质瘤中淋巴拟态的发现＊

王京峰 接琳琳 张彩霞 张新鹃

（1.滨州医学院烟台附属医院，山东 烟台 264100；2.山东中医药高等专科学校，山东 烟台 264100）

一、研究目的

肿瘤内血管的结构功能与肿瘤的生长、转移及肿瘤的预后密切相关。近年来的研究发现，构成肿瘤血管结构的细胞具有不同源性，一种是来源于宿主的内皮细胞，另一种是由肿瘤细胞转分化形成的内皮细胞，或由肿瘤细胞直接分化而来[1-3]。其中Maniotis等将这种不依赖内皮细胞的、由侵袭性肿瘤细胞构成的功能性管腔样结构即为血管形成拟态（vasculogenic mimicry，VM）。

神经胶质瘤也称为胶质细胞瘤，是最常见的原发性中枢神经系统肿瘤，临床数据显示术后生存率不足8个月[4]。研究发现胶质瘤生长速度快、复发率高、转移和耐药性多的现象与旺盛的新血管形成有关[5]，但是，由于正常脑组织中只有血管，而没有淋巴管分布，因此，目前尚未有胶质瘤中淋巴管形成及转移的相关研究和报道。本课题拟从淋巴管拟态（LM）的形成与神经胶质瘤发病机制的研究展开，为临床治疗神经胶质瘤提供理论依据。

二、材料和方法

1.材料

选用北京天坛医院神经外科（5例）及滨州医学院神经外科（2例）切除的肿瘤组织，固定后切片，切片厚度为4μm。

2.主要试剂及操作方法

羊抗小鼠LYVE-1 美国R&D公司

3.免疫组织化学标记

将切片由二甲苯至酒精中进行脱蜡，后在微波炉中煮沸进行抗原修复；羊血清封闭，后滴入山羊抗人LYVE-1抗体（1：100） 4℃冰箱过夜。第二天自冰箱取出滴入辣根过氧化物酶（HRP）后，DAB显色，最后进行苏木精复染，封片。显微镜下（DP-72，奥林巴斯）观察拍照，用IPP和SPSS软件统计数据。

三、结果

胶质瘤样本中发现了LYVE1 阳性细胞，而正常组中则没有LYVE细胞表达。

四、讨论

1.VM 在神经胶质瘤中的临床研究

血管形成拟态是由Maniotis等首次提出的一种与经典肿瘤血管生成途径不同，不依赖机体内皮细胞的全新肿瘤微循环模式，其具有细胞外基质（ECM） 丰富，侵袭能力强等特点[6]。在16例恶性胶质瘤中发现了VM结构，且VM位于生长良好、微血管密度低的肿瘤区域，周边没有坏死，表明VM是肿瘤血液供应的重要来源。VM本身可以改善神经胶质瘤的微循环，促进肿瘤细胞转移，同时形成VM的肿瘤细胞因具有更高干细胞特性而具有更多恶性肿瘤转移的特性[7]。研究表明VM是一个影响胶质瘤患者预后的独立因素。VM明显不同于正常血管生成，一项研究表明，VM可能是胶质瘤一种重要的生存方式，可能是导致目前阻断肿瘤的血液的抗血管生成作用不明显的原因[8]。Wang等首次报道了乳腺癌中存在淋巴管形成拟态（LM），因此，有必要探讨神经胶质瘤中VM是否具有淋巴管生物学特征。

2.LYVE-1与神经胶质瘤的相关研究

LYVE-1（lymphatic vessel endothelial hyaluronan receptor 1） 即淋巴管内皮透明质酸受体1，被认为是特异性最高的淋巴管内皮标记物之一，研究发现，神经胶质瘤中存在LYVE的异常表达。Prox-1是LYVE-1上游的重要调控基因，是调节血管内皮细胞向淋巴管内皮细胞分化的关键因子[11]。神经胶质瘤中可见Prox-1的异常表达，并且Prox-1通过激活核因子-κB信号通路促进人神经胶质瘤细胞的增殖和侵袭[12]。本课题研究结果发现表达干细胞标记物nestin阳性的胶质瘤干细胞均表达LYVE-1，说明神经胶质瘤中可见淋巴管拟态形成，表明胶质瘤干细胞可以分化成淋巴管样结构。但是，众所周知，正常脑组织中只有血管，并没有淋巴管的分布，那么表达LYVE-1阳性的细胞是从哪里分化来的呢？

目前关于肿瘤中的新生淋巴管的来源一直有争议，部分学者认为肿瘤周围淋巴管再生进入肿瘤内，从而引发转移[13]；另一部分学者认为肿瘤内可以独立形成淋巴管并与肿瘤周围淋巴管融合，最终导致转移。我们大胆设想，神经胶质瘤中的淋巴管拟态形成是否来源于肿瘤内部自己形成的呢？因此，本课题采用LYVE-1对神经胶质瘤细胞进行标记检测，探讨神经胶质瘤中淋巴形成拟态的来源，阐明神经胶质瘤中淋巴形成拟态的结构特征及对于神经胶质瘤转移、预后的作用，为临床探索神经胶质瘤的治疗提供新的思路。