HIV感染者宫颈组织中转化生长因子-β1蛋白表达及其与HPV感染的关系

彭 灵，曾 静，张 容

(1.重庆市公共卫生医疗救治中心妇产科，重庆 400036；2.重庆渝北区第一人民医院妇产科，重庆 401120；3.重庆市涪陵区人民医院妇产科，重庆 408000)

2016年我国新发人免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus，HIV)感染6.441 6/100 000例，因感染致死1.034 2/100例[1]。人乳头瘤病毒(human papillomavirus，HPV)感染在HIV感染患者中较为常见，HIV阳性女性的HPV感染率高出HIV阴性女性的2.2～2.8倍[2]，而HPV感染又是宫颈癌发生的危险因素[3]。高危型HPV检测是筛查HIV感染宫颈癌患者的重要方法，但是灵敏度和特异度不高[4]，并且不能区分HPV短暂感染和持续感染，因此亟需寻找潜在的生物学标志物。

转化生长因子-β1(transforming growth factor β1，TGF-β1)在免疫炎症、组织修复和胚胎发育等过程中起到重要作用[5]。有研究[6]显示，TGF-β1与高危型HPV感染有关，对宫颈癌的发生和发展有一定价值。然而HIV感染会引起机体免疫功能紊乱，造成TGF-β1水平变化[7]，因此，有必要探讨HIV感染宫颈癌患者TGF-β1的表达及意义。本研究对TGF-β1与HPV感染的关系进行分析，并探讨TGF-β1表达与HIV阳性宫颈病变的关系，现将结果报告如下。

1 对象与方法

1.1 研究对象

选取2014年6月至2018年9月重庆市公共卫生医疗救治中心收治的89例HIV感染妇女为研究对象，年龄21～56岁，平均(30.08±11.07)岁；配偶HIV感染41例(46.07%)；性伴侣(3.12±1.48)个；均为汉族。其中CIN1级30例，CIN2级22例，CIN3级16例，无宫颈癌癌前病变21例。所有受试者对本研究均知情同意并签署知情同意书。

纳入标准：1)HIV感染阳性，符合《中国艾滋病诊疗指南(2018版)》[8]；2)均接受阴道镜检查和宫颈活检；3)年龄≥18岁。排除标准：1)子宫手术史；2)合并急慢性感染性疾病；3)妊娠。

1.2 检测方法

1.2.1 HPV基因分型检测

充分暴露宫颈外口，用无菌棉球轻轻拭去宫颈表面过多的分泌物，将专用HPV采样刷尖端插入宫颈口，顺时针旋转5圈，随后去除刷柄放入细胞保存液。HPV分型检测试剂盒购于广东凯普生物科技股份有限公司，通过提取DNA，基因扩增，倒流杂交，最后显色和分析。该试剂盒可以一次性检测15种HPV高危亚型：16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、68，6种HPV低危型：6、11、42、43、44、81。

1.2.2 阴道镜及宫颈活检

首先用无菌棉球轻轻擦拭宫颈表面分泌物，先低倍镜后高倍镜观察局部改变，用3%醋酸涂抹宫颈30 s，绿色滤镜下观察宫颈血管形态，随后用5%卢戈试剂涂抹宫颈了解病变范围。对阴道镜下提示异常的宫颈行多点活检，均由本院病理科检查，对患者进行宫颈上皮内瘤变(cervical intraep-ithelial neoplasia，CIN)分级，CIN1级为轻度非典型增生，CIN2级为中度非典型增生；CIN3级为重度非典型增生和原位癌。

1.2.3 组织TGF-β1蛋白表达

采用免疫组织化学法检测组织TGF-β1蛋白表达。由重庆市公共卫生医疗救治中心平顶山院区病理科制作宫颈组织石蜡切片，厚度为4 μm，在70 ℃下烤片30 min，随后进行脱蜡处理。用Tris/EDTA修复液进行抗原修复，羊血清封闭30 min，加入鼠抗人TGF-β1单克隆抗体(1:200)4 ℃过夜，加入辣根过氧化物酶标记山羊抗小鼠IgG，37 ℃孵育30 min。随后用辣根标记的链霉素卵白素工作液和DAB显色液处理，苏木紫复染。经过脱水、透明、封片处理后在显微镜下观察。每张切片随机取10个视野，每个视野计数100个细胞，根据细胞的染色强度及阳性细胞比例判断TGF-β1表达情况。染色强度分为：0分(阴性)，1分(弱阳性，染色为浅黄色)，2分(中度阳性，染色为棕黄色)，3分(强阳性，染色为棕褐色)。阳性细胞比例：1分为0%～10%，2分为>10%～50%，3分为>50%～80%，4分为>80%～100%。将2个得分相乘得出最终结果：0(-)；1～3(+)；4～8()；9～12()。

1.3 统计学方法

采用SPSS20.0进行统计学分析，组间比较用卡方检验；等级资料比较用非参数检验；相关性分析用Spearman秩相关性分析。以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 HIV患者宫颈组织TGF-β1蛋白表达与高危型HPV感染的关系

89例HIV感染患者中，高危型HPV感染65例，占73.03%。单型高危HPV感染患者TGF-β1蛋白阳性表达率明显较高(P<0.05)，见表1。

表1 高危型HPV感染患者TGF-β1蛋白阳性表达情况 n(%)

2.2 TGF-β1蛋白表达与病理诊断的关系

TGF-β1在HIV感染患者的宫颈组织中的表达见图1。CIN1级患者TGF-β1阳性细胞主要位于上皮下1/3，以细胞浆染色为主，少见细胞核染色；CIN2级和CIN3级患者TGF-β1阳性细胞主要位于上皮下2/3或全层，细胞浆和细胞核均可见染色。89例患者无宫颈癌癌前病变21例(对照组)、CIN1级30例、CIN2级22例、CIN3级16例，对照组和CIN 1-3级间基线资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)，CIN 1-3各分级患者间基线资料比较，差异无统计学意义(P>0.05)。TGF-β1蛋白阳性表达的HIV感染患者CIN级别更高(Z=-4.904，P<0.001)，见表2。

A：对照组；B：CIN1级；C：CIN2级；D：CIN3级。图1 TGF-β1蛋白在HIV感染患者宫颈组织中的表达(×10)

表2 TGF-β1蛋白表达与病理诊断的关系n(%)

2.3 TGF-β1表达强度与病理诊断的关系

TGF-β1蛋白表达强度与CIN分级的关系如表3所示，Spearman秩相关性分析显示，TGF-β1蛋白表达强度与CIN分级呈正相关(r=0.420，P<0.001)。

表3 TGF-β1表达强度与病理诊断的关系n(%)

3 讨论

HIV感染阳性患者罹患宫颈癌风险及死亡风险较高[9]。有些HIV感染患者并未早期接受有效的宫颈癌筛查。HPV感染是宫颈癌发生的重要机制，但是在HPV感染的妇女中，仅有少部分发展为功宫颈癌，提示还有其他病理机制涉及宫颈癌的发生，逃避TGF-β的调控就是重要的机制之一[10]。

TGF-β是一个同源二聚体，包括TGF-β1、TGF-β2及TGF-β3共3种亚型，其中TGF-β1在细胞中含量最多、活性最强、功能最广泛，是近年来研究的重点[5]。它在胚胎发育、组织再生、免疫炎症和血管再生等病理生理过程中起到重要作用[5,11]，能通过调节细胞增殖、分化、凋亡、迁移和血管生成等促进肿瘤发生和发展[12-13]。TGF-β1能通过调节细胞侵袭和迁移促进宫颈癌的发展[6]。它在宫颈癌组织和外周血中表达水平均升高，提示TGF-β1对宫颈癌的早期诊断可能有重要价值[14-15]，可能是HPV感染诱导宫颈癌的一个中介因素[16]。有研究[10]发现，TGF-β1能够抑制T淋巴细胞的增殖分化、诱导凋亡，引起免疫抑制，进而影响机体对HPV的清除，最终导致HPV感染相关的子宫颈上皮内瘤变。故TGF-β1参与HPV引起宫颈癌的机制尚不明确，需要今后深入分析。

本研究显示，HPV感染阳性患者TGF-β1蛋白阳性表达率较高，并且在单型HPV感染中表现得尤为明显，提示TGF-β1蛋白对鉴别单型和多型HPV感染可能有一定价值。TGF-β1在HIV感染中同样也起到重要作用，例如在慢性呼吸道疾病患者中，TGF-β1可提高HIV病毒载量，进而加重肺部疾病[17]，TGF-β1还与抗病毒疗效有关[18]。

TGF-β1在HIV感染患者宫颈组织中的表达及意义既往少有报道。CARNEIRO等[19]分析了11例HIV感染宫颈上皮内瘤变患者和12例HIV未感染宫颈上皮内瘤变患者，发现TGF-β1在2组高级别宫颈病变患者中均高水平表达，并且外周血CD4+T细胞水平与TGF-β1呈正相关。早期也有研究[20]显示，与单纯CIN患者比较，HIV感染CIN患者TGF-β1表达水平降低。由于既往研究样本量较小，难以得出明确结论。本研究分析了89例HIV感染患者的宫颈组织标本，TGF-β1蛋白在对照组、CIN1级、CIN2级和CIN3级中阳性表达率逐渐升高。另外TGF-β1蛋白表达强度与CIN分级呈正相关，提示TGF-β1蛋白免疫组织化学染色对鉴别低级别和高级别的宫颈上皮内瘤变有一定价值。

综上所述，在HIV感染患者中，HPV感染阳性患者TGF-β1蛋白阳性表达率较高，并且在单型HPV感染中表现得尤为明显，提示TGF-β1蛋白对鉴别单型和多型HPV感染可能有一定价值。TGF-β1蛋白与HPV感染密切相关，对宫颈上皮内瘤变及严重程度有一定预测价值，可以考虑成为HIV感染患者宫颈癌的一个筛查指标。