泌尿生殖道标本解脲脲原体和人型支原体检测及抗菌药物敏感性试验结果分析

殷怡华，张贤华

解脲脲原体（Ureaplasma urealyticum）和人型支原体（Mycoplasma homini）均属柔膜体纲，是泌尿生殖道常见病原体，可引起男、女性非淋球菌性尿道炎，女性子宫内膜炎、绒毛膜羊膜炎、不孕不育、妊娠自然流产，新生儿早产、低体重及小儿肺炎、脑膜炎等[1-3]。由于此类微生物没有细胞壁，对青霉素、头孢菌素β内酰胺类，以及万古霉素等糖肽类抗菌药物天然耐药。临床常用治疗药物为四环素类、大环内酯类和喹诺酮类。近年来解脲脲原体和人型支原体耐药株增多，临床治疗药物选择日益困难[4]。本研究对同济大学附属上海市第一妇婴保健院连续3年泌尿生殖道标本解脲脲原体和人型支原体培养鉴定及药物敏感性试验结果进行分析总结，为临床合理选用抗感染药物提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源及采集 收集2016年1月—2018年12月本院临床常规送检的泌尿生殖道标本，标本类型包括女性宫颈分泌物或男性精液。根据标准操作流程采集标本。

1.1.2 试剂 采用珠海丽拓发展有限公司生产的支原体鉴定、药敏试剂盒（微生物检验法，生产许可证编号粤食药监械生产许20010312号）；试剂盒药敏板A列和B列所含抗菌药物终浓度见表1。

表1 药敏板中抗菌药物浓度Table 1 Concentration of antimicrobial agents in susceptibility testing plate

1.2 方法

1.2.1 药敏试验 根据支原体鉴定、药敏试剂盒操作说明书进行培养鉴定和药敏试验。药敏结果判读：药敏板接种样品后经培养，培养液呈红色判定为阳性，即支原体生长，黄色判定为阴性，即不生长；A列含低浓度抗菌药物，B列含高浓度抗菌药物，A列和B列均为黄色判定为对抗菌药物敏感（S），A列呈红色、B列呈黄色判定为中介（I），A列和B列均为红色判定为对抗菌药物耐药（R）。

1.2.2 数据分析 采用上海佰冠信息科技有限公司的lis360软件进行数据统计、分析。

2 结果

2.1 标本培养阳性率及病原体分布

2016年1月—2018年12月共采集临床标本35 006份，其中解脲脲原体检出率35.9%，解脲脲原体与人型支原体混合检出率3.1%，人型支原体检出率0.04%。解脲脲原体检出占泌尿生殖道标本所有分离株的92.0%（12 572/13 660），而单纯检出人型支原体者少见，仅为0.11%（15/13 660）。解脲脲原体和人型支原体的检出结果见表2。

表2 2016—2018年泌尿生殖道人型支原体和解脲脲原体检出及分布Table 2 Annual detection rate of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis in urogenital tract

2.2 药敏试验

药敏试验结果显示，单一检出的解脲脲原体对四环素类和克拉霉素、交沙霉素的敏感率高，单一检出的人型支原体对上述药物敏感性也较高，但较解脲脲原体略低，解脲脲原体与人型支原体混合检出体对四环素类和大环内酯类的敏感性较单一检出者低些，但对多西环素、米诺环素敏感率仍＞70%。解脲脲原体和人型支原体对喹诺酮类耐药率均较高。药敏试验结果见表3。

表3 解脲脲原体和人型支原体对12种抗菌药物的敏感性Table 3 Susceptibility of Ureaplasma urealyticum and Mycoplasma hominis strains to 12 antimicrobial agent

3 讨论

解脲脲原体和人型支原体等柔膜体纲微生物是体外能独立生存的最小微生物。CLSI M43-A推荐的支原体培养及药敏试验需采用液体-固体培养基进行分离培养，然后使用肉汤微量稀释法进行药敏测定。但是由于体外培养条件苛刻，对实验室技术要求高，很难在临床微生物实验室常规开展。因此目前国内各临床实验室多采用支原体培养-药敏一体化试剂盒进行临床标本检测。但由于此类试剂盒培养方法和药敏判断标准与CLSI M43-A推荐方法相差较大，其检测结果与采用CLSI标准方法所获结果可能存在一定差异，故仅可作为药敏趋势分析及临床抗菌药物选择的有限参考[5]。本院2016—2018年送检标本解脲脲原体和人型支原体总检出率为39.0%，与先前结果相比，总检出率相仿[5]。多年的临床检测结果显示，此检测方法所获得的结果较为稳定[5]。

由于此类微生物没有细胞壁，对于β内酰胺类、糖肽类等通过抑制细胞壁合成的抗菌药物天然耐药。大环内酯类、四环素类和喹诺酮类药物为解脲脲原体和人型支原体感染的常用抗菌药物。本研究药敏结果显示，单一检出的解脲脲原体对四环素类抗菌药物四环素、多西环素、米诺环素，大环内酯类克拉霉素（十五元环）和交沙霉素（十六元环）的体外敏感率均≥94.3%；相较我院2013年检测结果，解脲脲原体对多西环素和米诺环素的耐药率略有上升，但对四环素的耐药率下降（13.4%对4.2%）[5]。单一检出的人型支原体对上述药物亦较为敏感，体外敏感率≥86.7%。泌尿生殖道解脲脲原体和人型支原体对喹诺酮类药物，尤其是对诺氟沙星、氧氟沙星具有较高的耐药率，这与国内相关报道结果相似[6-7]。需要注意的是，本研究所用试剂盒解脲脲原体对四环素耐药判读标准高于CLSI M43-A标准，故耐药率可能被低估。

人型支原体在本研究中被单独检出的比例很低（0.04%），但解脲脲原体和人型支原体同时检出比例达3.1%。临床送检标本同时检出解脲脲原体和人型支原体的报道并不少见[5，8]，提示存在解脲脲原体和人型支原体混合感染可能。尽管解脲脲原体和人型支原体混合药敏目前没有统一标准，其检测结果对临床预测解脲脲原体和人型支原体对抗菌药物的敏感性仍有一定参考价值。本研究显示解脲脲原体和人型支原体混合检出体，对四环素类敏感性较早年有所下降[5]，但对多西环素、米诺环素敏感率仍可保持70%以上，而大环内酯类仅有交沙霉素敏感率较高（＞70%）。解脲脲原体和人型支原体混合检出体对喹诺酮类药物耐药率高，与我院早先数据相仿[5]。

总之，本研究结果显示，泌尿生殖道标本送检数及支原体检出率较早年增多，且有逐年增多趋势，提示临床解脲脲原体和人型支原体所致泌尿生殖道感染逐渐增多，部分患者可能存在解脲脲原体和人型支原体混合感染，值得关注。解脲脲原体和人型支原体对四环素类、大环内酯类和喹诺酮类的敏感性存在一定差异。四环素类多西环素及米诺环素和大环内酯类中的交沙霉素对解脲脲原体或人型支原体有着较为良好的体外抗菌活性；但解脲脲原体或人型支原体对喹诺酮类药物耐药率高。