姜藤茶对寒凝血瘀痛经大鼠的影响

孟 君，秦画置✉，周 扬，李 丹，刘昊奇，邓郊梅，杨 知

（1.株州千金药业股份有限公司，株州 412000；2.湖南斯莱克景达实验动物有限公司，长沙 400125）

痛经（dysmenorrhea）是一种较为常见的妇科疾病，已经严重影响妇女正常工作和生活。痛经是指出现在月经期和月经期前后的周期性下腹痛，常发生在月经前和月经期，偶尔发生在月经期后数日内[1-3]。痛经的症状：下腹部呈痉孪性疼痛，有的会痛引腰骶，甚至严重者可能会出现剧痛难忍，并伴有恶心呕吐，头昏厥逆[4-5]。痛经分为原发性和继发性两种痛经。原发性痛经是指痛经在初潮后的几年内发生且生殖器官无器质性病变者[6]。中医认为痛经的病机是邪气内伏，气血阻滞造成不通则痛或者说不荣则痛。痛经患者的食疗方法主要有以下几种：姜枣红糖水（将干姜切片，红枣去核，煎煮后把红糖放下溶开，喝汤吃大枣，具有温经通络的作用）、当归生姜羊肉汤（在煲羊肉的时候适当的放入当归和生姜，既可以去腥又可温通经络，食用时可加适量的黄酒，对治疗痛经十分有效）、山楂葵瓜子红糖汤（将山楂和葵瓜子煎炒后磨成粉，用红糖冲服）。其中姜和红糖是痛经食疗中比较常用的食材。而藤茶，不是茶，殊胜茶。藤茶是一种药食两用的植物，《中国中草药汇编》记载：藤茶味甘淡，性凉，具有清热解毒，降暑生津，祛风湿，强筋骨，消炎利尿，抗心律失常，抗心肌缺血，缓解酒精作用等功效。长期饮用对皮肤癣癞，黄疸性肝炎，感冒风热，咽喉肿痛，急性结膜炎，痛疖，高血压，高血脂，高血糖，护扶养颜等都有极好作用。姜藤茶由红糖、姜、藤茶、低聚木糖和菊花等组成，具有舒缓痛经等功能。本实验对姜藤茶的药理作用进行实验研究，为姜藤茶开发提供了试验依据。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 药品和试剂

姜藤茶（原料成分为红糖、姜、藤茶、低聚木糖和菊花），批号 20180930：株州千金药业股份有限公司；痛经宝（原料成分为红花，当归，肉桂，三棱，莪术，丹参，五灵脂，木香和延胡索（醋制）），批号180901：仲景宛西制药股份有限公司；阿司匹林（原料成分为乙酰水杨酸），批号 1802086：阿斯利康制药有限公司；苯甲酸雌二醇，批号180802：四川省泰信动物药业有限公司；缩宫素，批号170816：马鞍山丰原制药有限公司；盐酸肾上腺素注射液，批号180104：丹东医创药业有限责任公司；大鼠 6酮前列腺素F1α试验盒，批号 2018-12、大鼠 β-内腓肽试验盒，批号2018-12：江苏晶美生物科技有限公司。

1.1.2 仪器

ES-1000E 电子天平：长沙湘平科技有限公司；16号灌胃器：东西仪器（北京）科技有限公司；一次性使用人体静脉血样采集容器：湖南省浏阳市医用仪具厂；一次性使用血样采集针：山东省奥赛特医疗器械有限公司；SA-6000全自动血液动态粘度分析仪：北京赛科希德科技发展有限公司。

1.1.3 实验动物

SD大鼠：湖南斯莱克景达实验动物有限公司（实验动物生产许可证号SCXK（湘）2016-0002，实验动物使用许可证号SYXK（湘）2014-0012，实验动物质量合格证号 No.43004700054992、No.43004700055436，湖南省实验动物设施使用证明No.00091337、No.00091531）。

1.2 方法

1.2.1 对痛经模型大鼠的影响

1.2.1.1 分组及造模 SD大鼠，雌性，70只，随机分为7组：空白对照组，模型组，姜藤茶低、中、高剂量组，痛经宝颗粒组，阿司匹林组。除空白组皮下注射生理盐水外，其余60只，皮下注射苯甲酸雌二醇，连续10 d，1次/d（第1 d：0.5 mg/只，第 2～9 d：0.2 mg/只，第 10 d：0.5 mg/只）。

1.2.1.2 治疗方法 造模同时给药，空白、模型组（蒸馏水），姜藤茶低、中、高剂量组（1.8、3.6、7.2 g/kg），痛经宝颗粒组（3.6 g/kg），阿司匹林组（0.1 g/kg），灌胃体积10 mL/kg，1次/d，连续10 d。

1.2.1.3 检测指标 最后一次给药后1 h，腹腔注射缩宫素10 U/只，观察30 min内大鼠疼痛反应，以扭体反应（大鼠腹部收缩内凹，躯干与后肢伸展，臀部与一侧肢体内旋）为子宫强烈收缩（痛经）的指标。30 min后，大鼠麻醉，腹主动脉取血，3 000 r/min 离心15 min，取上清液，ELISA试剂盒测定β-内腓肽（β-EP）和6酮前列腺素F1α的浓度。取子宫、卵巢，固定于福尔马林溶液中，HE染色，观察组织形态的变化。

1.2.2 对寒凝血瘀模型大鼠的影响

1.2.2.1 分组及给药 SD大鼠，雌性，70只，随机分为7组：空白对照组（蒸馏水），模型组（蒸馏水），姜藤茶低、中、高剂量组（1.8、3.6、7.2 g/kg），痛经宝颗粒组（3.6 g/kg），阿司匹林组（0.1 g/kg）。灌胃给药，1次/d，连续7 d，给药体积10 mL/kg。

1.2.2.2 造模 第6、7 d给药1 h后，皮下注射盐酸肾上腺素注射液 0.6 mg/kg，大鼠浸入冰水（0～2 ℃）刺激1次，4 h后再次注射盐酸肾上腺素注射液，造成大鼠寒凝血瘀证模型。

1.2.2.3 指标检测 次日腹主动脉取血，SA-6000全自动血液动态粘度分析仪测定大鼠血液流变学指标（全血粘度、血浆粘度）及红细胞压积。

1.3 统计分析方法

2 结果

2.1 对痛经模型大鼠的影响

2.1.1 对扭体次数、β-内腓肽和6酮前列腺素F1α的影响

与空白对照组比较，模型组扭体次数显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，姜藤茶低、中、高剂量组、痛经宝组和阿司匹林组大鼠扭体次数显著降低（P＜0.01）。与空白对照组比较，模型组大鼠β-内腓肽（β-EP）和6酮前列腺素F1α显著降低（P＜0.01），与模型组比较，姜藤茶高剂量组和痛经宝组大鼠 β-EP显著升高（P＜0.01），且痛经宝组大鼠6酮前列腺素F1α显著升高（P＜0.01）。结果见表1。

表1 姜藤茶对扭体次数、β-内腓肽和6酮前列腺素F1α的影响（±SD，n=10）Table 1 Effect of jiangtengcha on writhing times,β-endorphin and 6-keto-prostaglandin F1α (±SD,n=10)

表1 姜藤茶对扭体次数、β-内腓肽和6酮前列腺素F1α的影响（±SD，n=10）Table 1 Effect of jiangtengcha on writhing times,β-endorphin and 6-keto-prostaglandin F1α (±SD,n=10)

注：与空白对照组比较，“*”表示 P＜0.05，“**”表示 P＜0.01；与模型组比较，“Δ”表示 P ＜0.05，“ΔΔ”表示 P ＜0.01。

组别 扭体次数/（次/30 min) β-内腓肽/（pg/mL） 6酮前列腺素F1α/（ng/L）空白对照组 0.00±0.00 3 774.86±391.82 954.23±83.00模型组 10.90±0.99** 2 913.26±270.43** 747.72±137.99**低剂量组 7.30±0.67ΔΔ 2 983.79±145.79 751.40±93.14中剂量组 5.00±0.67ΔΔ 3 113.41±261.51 769.03±54.03高剂量组 3.10±0.74ΔΔ 3 424.75±229.93ΔΔ 817.61±52.86痛经宝组 3.30±0.67ΔΔ 3 679.55±388.71ΔΔ 908.31±99.29ΔΔ阿司匹林组 2.50±0.53ΔΔ 3 176.31±315.06 800.36±115.00

2.1.2 对子宫和卵巢组织学的影响

子宫和卵巢组织学显示，空白对照组动物卵巢结构和形态发育正常，卵泡形态结构清楚，无异常；子宫内膜间质内均可见嗜酸性粒细胞浸润，属于正常发情期变化。模型组卵巢结构和形态发育正常，卵泡形态结构清楚，无异常；子宫内膜无嗜酸性粒细胞浸润，无发情期变化。姜藤茶低剂量组卵巢结构和形态发育正常，卵泡形态结构清楚，无异常；1例正常发情期变化，子宫内膜间质内可见嗜酸性粒细胞浸润。姜藤茶中剂量组和痛经组卵巢结构和形态发育正常，卵泡形态结构清楚，无异常；2例正常发情期变化，子宫内膜间质内可见嗜酸性粒细胞浸润。姜藤茶高剂量组和阿司匹林组卵巢结构和形态发育正常，卵泡形态结构清楚，无异常；3例正常发情期变化，子宫内膜间质内可见嗜酸性粒细胞浸润。结果见图1。

图1 子宫和卵巢组织学图（HE）Fig.1 Histology of uterus and ovary (HE)

2.2 对寒凝血瘀模型大鼠的影响

2.2.1 对红细胞压积的影响

与空白对照组比较，模型组大鼠红细胞压积显著增加（P<0.05）；与模型组比较，药物组红细胞压积均有减少，但都未见明显差异（P＞0.05）。结果见表2。

表2 姜藤茶对红细胞压积的影响（X ± SD，n=10）Table 2 Effect of jiangtengcha on hematocrit (X ± SD,n=10)

2.2.2 对寒凝血瘀证大鼠血液流变学指标的影响

与空白对照组比较，寒凝血瘀证模型组大鼠全血低、中、高切粘度，低切相对值，红细胞聚集指数都显著增高（P＜0.01），卡松粘度明显增加（P<0.05）；与模型组比较，姜藤茶中剂量组全血低切粘度和低切相对值有明显降低（P<0.05）；姜藤茶高剂量组全血低、中、高切粘度，低切相对值和红细胞聚集指数显著降低（P＜0.01），卡松粘度明显降低（P<0.05）；痛经宝组全血低、中、高切粘度显著降低（P＜0.01），低切相对值和卡松粘度明显降低（P<0.05）；阿司匹林组全血低、中、高切粘度，低切相对值，红细胞聚集指数和卡松粘度显著降低（P＜0.01），高切相对值明显降低（P<0.05）。结果见表3、4。

表3 对寒凝血瘀证大鼠血液流变学的影响（X ± SD，n=10）Table 3 Effect on Hemorheology of rats with cold blood stasis syndrome (X ± SD,n=10)

表4 对寒凝血瘀证大鼠血液流变学的影响（X ± SD，n=10）Table 4 Effect on Hemorheology of rats with cold blood stasis syndrome (X ± SD,n=10)

3 讨论

“痛经”最早来自《金匮要略》中提到的“经水不利，少腹满痛”。《中医妇科学》教材中，将痛经分为以下类型：气滞血瘀、寒凝血瘀、湿热蕴结、气血虚弱、肾气亏损[7]。现代医学普遍认为，神经内分泌失调引起的子宫张力增加和过度痉挛性收缩都可引起原发性痛经，而激素水平失调、催产素、加压素以及某些自主神经系统递质如内皮素等与痛经的发病直接相关[8-9]。

方玲等[10]考察临床经验方剂经前三剂止痛方（JQF）对痛经模型大鼠子宫前列腺素和雌激素、孕激素的调节作用，JQF能够有效调节痛经模型大鼠子宫组织中前列腺素和雌激素、孕激素水平，从而抑制子宫平滑肌收缩，降低子宫平滑肌紧张度，可能是其治疗痛经的作用机制。朱世鹏[11]用粗针深刺结合手法与细针浅刺不做手法的刺激量对寒凝型痛经大鼠都有镇痛效果，两者比较有显著性差异。不同针刺刺激量对子宫LTB4含量存在不同的调节趋势，其具体机制有待于进一步研究证明。

本实验采用苯甲酸雌二醇和缩宫素构建痛经模型时，腹腔注射缩宫素30 min内，模型组大鼠出现剧烈扭体反应，而空白对照组无扭体反应，且两者扭体反应有显著性差异，说明痛经模型构建成功[12-15]。而姜藤茶剂量组与模型组比较，扭体反应有显著差异，说明姜藤茶对痛经模型大鼠有较好的疗效，对痛经改善有改善作用。大量文献研究表明[16-18]，β-内啡肽（β-EP）具有内源性镇痛作用。β-EP是新的神经递质或神经调节物质同时具有吗啡样活性的神经多肽，在镇痛及激素的分泌等调节起到作用。其参与生殖内分泌的调节，调控下丘脑-垂体的功能方面起重要作用[19-21]。在痛经模型试验中，对血清中 β-EP浓度进行检测，模型组β-EP含量降低，使其镇痛作用降低，动物模型痛经的发生可能与 β-EP的释放和活性降低等因素有关，而与模型组比较，姜藤茶高剂量组大鼠β-EP显著升高，从扭体方面可以得到验证发现表明姜藤茶对痛经机理有一定影响。

另外，寒凝血瘀，使血流速度减慢，血滞于脉络，造成血瘀[22-23]。采用冰浴+盐酸肾上腺素制备寒凝血瘀模型[24-25]时，与空白对照组比较，模型组大鼠全血低、中、高切粘度，低切相对值，红细胞聚集指数都显著增高，表明寒凝血瘀模型构建成功。与模型组比较，姜藤茶中剂量组全血低切粘度和低切相对值有明显降低；姜藤茶高剂量组全血低、中、高切粘度，低切相对值和红细胞聚集指数显著降低，卡松粘度明显降低，说明姜藤茶能降低寒凝血瘀模型大鼠全血粘度及血浆粘度，表明姜藤茶对寒凝血瘀证有一定的改善作用。

4 结论

本实验通过对痛经和寒凝血瘀两种模型鼠的一系列研究，实验结果表明：姜藤茶能减轻痛经大鼠的扭体次数，提高了β-内腓肽和6酮前列腺素F1α水平含量，对痛经有一定改善作用。姜藤茶能降低寒凝血瘀模型大鼠全血粘度及血浆粘度，对寒凝血瘀有一定治疗效用。但姜藤茶对痛经和寒凝血瘀模型大鼠在作用机制还不明确，还需进一步研究。