抑癌基因PTEN在乳腺浸润性小叶癌组织中的表达及临床意义

2021-03-22何中南谭敏华周泳健马德奎陆国芬何颜英广东医科大学附属肇庆市第一人民医院乳腺外科病理科广东肇庆56000

广东医科大学学报 2021年1期

何中南，谭敏华，周泳健，马德奎，陆国芬，何颜英（广东医科大学附属肇庆市第一人民医院 .乳腺外科；.病理科，广东肇庆 56000）

随着表皮生长因子受体2(HER2)、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)等生物学标志物被发现与乳腺癌预后相关，开启了乳腺癌的分子治疗时代[1-3]。探究与乳腺癌发生、发展相关的分子生物学标志物，及其相关的信号通路和生物学作用机制，寻找与乳腺癌复发和转移有关的分子生物学标志物，将有助于改善乳腺癌患者的生活质量和预后。第10号染色体缺失的磷酸酶和张力蛋白同源物基因(PTEN)是迄今为止发现的唯一具有编码双重脂质磷酸酶和蛋白磷酸酶活性的抑癌基因，可通过促进乳腺癌细胞的凋亡、诱导乳腺癌细胞周期的阻滞、抑制乳腺癌细胞的迁移、抑制肿瘤血管生成等途径，抑制乳腺癌的发生、发展[4-5]。研究发现，PTEN蛋白低表达可能在乳腺浸润性导管癌的发生、进展、浸润及预后中起重要作用[6]。但目前鲜有 PTEN对乳腺浸润性小叶癌预测价值等方面的研究。为此，本研究采用免疫组化法检测 46例乳腺浸润性小叶癌组织中PTEN的表达情况，分析 PTEN表达与浸润性小叶癌患者临床病理特征间的关系，以期为后续探究PTEN及其相关信号通路在浸润性小叶癌中的生物学作用提供依据。

1 资料和方法

1.1 一般资料

选取2015年1月至2019年12月肇庆市第一人民医院乳腺疾病防治中心的乳腺浸润性小叶癌患者46例。纳入标准：(1)行乳腺癌根治术；(2)患者均为女性，术后病理诊断为原发性浸润性小叶癌，基本病例资料齐全；(3)患者术前均未行抗肿瘤治疗；(4)获得知情同意，填写知情同意书，自愿参加此次研究。排除标准：(1)乳腺小叶原位癌患者；(2)有远处转移者(IV期者)；(3)患者为双侧原发性乳腺癌或既往有对侧乳腺癌病史；(4)有乳腺癌外的其他恶性肿瘤。同时选取石蜡包埋组织相应的 46例癌旁乳腺组织和50例乳腺增生组织作对照。本研究经我院医学伦理委员会审核通过。

1.2 试剂与设备

兔抗人 PTEN单克隆抗体(克隆号：SP128)购买于安必平公司，ER抗体试剂(ZM-0104鼠单抗)、PR抗体试剂(ZM-0215鼠单抗)、ki-67抗体试剂(ZM-0166鼠单抗)、HER2抗体试剂(ZM-0065鼠单抗)均购于北京中杉金桥生物公司，免疫组化试剂盒及 DAB显色试剂盒购于 DAKO公司。主要仪器包括奥林巴斯ULH100-3显微镜(日本奥林巴斯)、LEICA RM2235病理石蜡切片机(德国莱卡)、医用冷藏冰箱(浙江和利制冷设备有限公司)、电热恒温鼓风干燥箱DHCT-9070A(上海精宏实验设备有限公司)、微波炉M1-230E白色(广东美的厨房电器制造有限公司)、LEICA CV5030封片机(德国莱卡)等。

1.3 方法

石蜡包埋组织标本，厚度为4μm，行 HE染色和免疫组织化学 S-P法染色，实验均设阳性对照和阴性对照。免疫组化结果判定采用半定量分析法[7]，由2名经验丰富的病理医师独立完成。PTEN试剂染色模式为细胞质/细胞核着色，评分标准以染色强度结合阳性细胞数百分比综合计分，染色强度：无着色为0 分，淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分。阳性细胞百分比即每张切片随机选择10～20个高倍(×400)视野，随机计数1000个细胞，按阳性细胞个数占同类细胞总数的百分比计分：0～5%为 0 分，6%～25%为 1分，26%～50%为 2分，51%～75% 为3分，＞75%为4 分。染色强度与阳性细胞百分比计分的乘积判读免疫组化结果：0 分为阴性(－)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。其中(－)和(+)为PTEN蛋白低表达，(++)和(+++)为PTEN蛋白高表达。根据乳腺癌雌、孕激素受体免疫组织化学检测指南，ER 和PR染色阳性定位于肿瘤细胞核，≥ 1%肿瘤细胞核阳性为 ER/PR阳性，＜1%时为ER/PR阴性[8]。根据2015年国际乳腺癌会议[9]，本研究以 ER阳性细胞比例≤10%定为低表达，阳性细胞比例＞10%为高表达；PR阳性细胞比例≤20%定为低表达，阳性细胞比例＞20%为高表达。HER2阳性判读依据乳腺癌 HER2检测指南2019版[10]。ki-67染色阳性定位于肿瘤细胞核，阳性细胞比例≤14%定为低表达，阳性细胞比例＞14%为高表达[11]。

1.4 统计学处理

采用SPSS 24.0进行处理，计数资料以百分数表示。PTEN在乳腺浸润性小叶癌组织、癌旁组织、乳腺增生组织中的表达差异采用Mantel-Haenszel卡方检验，两两比较采用卡方分割法；PTEN表达与患者临床病理因素的关系采用(校正)卡方检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 PTEN蛋白在浸润性小叶癌组织、癌旁组织和乳腺增生组织中的表达

PTEN蛋白在浸润性小叶癌组织、癌旁组织和乳腺增生组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.01)。PTEN蛋白表达水平随着乳腺疾病的进展而下降(P＜0.01)。见表1。PTEN蛋白在浸润性小叶癌组织、癌旁组织和乳腺增生组织中的表达情况分别见图1、2、3。

表1 PTEN蛋白在不同乳腺病变组织中的表达例(%)

2.2 PTEN蛋白表达与浸润性小叶癌患者临床病理特征的关系

PTEN的表达与患者的年龄、肿瘤直径、ER表达、PR表达、HER2表达无关(P＞0.05)，而与病理分期、组织学分级、淋巴结转移、脉管癌栓侵犯、ki-67表达有关(P＜0.05或 0.01)。见表2。

3 讨论

图1 PTEN在癌组织中的表达情况

图2 PTEN在癌旁组织中的表达情况

乳腺癌已发展为女性发病率最高的恶性肿瘤，其治疗效果与乳腺癌的复发和转移密切相关[12]。根据WHO乳腺肿瘤分类，乳腺浸润性小叶癌是由一致的、缺乏黏附性的癌细胞组成的常伴有小叶原位癌成分的浸润性癌[13]。浸润性小叶癌次居于浸润性导管癌，是乳腺浸润性癌中第二大病理类型，具有特殊的基因表型、临床病理特征以及对治疗的独特反应[14]。国内研究报道浸润性小叶癌约占浸润性乳腺癌的 3%，而国外报道则占5%～15%，提示不同地区、不同种族浸润性小叶癌的发病有一定差异[15]。本研究结果发现，PTEN蛋白在浸润性小叶癌组织、癌旁组织和乳腺增生组织中的表达率分别为21.7%、60.9%和94.0%，PTEN蛋白表达水平随着乳腺疾病的进展而下降，提示PTEN低表达可能与乳腺浸润性小叶癌的发生、发展有关。本实验对 PTEN的表达与浸润性小叶癌患者的临床病理特征进行比较分析，发现PTEN蛋白低表达与浸润性小叶癌患者的肿瘤直径、年龄及 HER2、ER、PR表达无关，而与患者的肿瘤分期、组织学分级、淋巴结转移、脉管癌栓侵犯、ki-67表达有关(P＜0.05或0.01)，说明组织学分级和病理分期越高，淋巴结转移个数越多，PTEN表达率越低，浸润性小叶癌则越容易发生复发转移。ki-67抗原是细胞核内增殖相关蛋白，反应了肿瘤的增殖能力。ki-67高表达的患者，其 PTEN表达更低，提示PTEN低表达可能在一定程度上促进浸润性小叶癌细胞的增殖。脉管瘤栓是肿瘤细胞脱离原发部位进入血液循环的结果，涉及复杂的上皮间充质转化及肿瘤转移过程[16]。脉管瘤栓患者的 PTEN表达降低，说明PTEN低表达可能促进了上皮间充质转化及肿瘤的转移过程。