鲜益母草胶囊促进药物流产不全大鼠子宫复旧的实验研究

栾会玲，业 康，金祖汉，金 捷，黄晶晶，杨明华

(浙江省中药研究所有限公司·浙江 杭州 310023)

鲜益母草胶囊是浙江省中药研究所有限公司领衔研发的中药新药，现为浙江义乌大德药业集团有限公司拳头产品。为采用益母草鲜草为原料精制而成，具有活血调经功效，用于血瘀所致的月经不调、产后恶露不绝，症见经水量少、淋漓不净、产后出血时间过长[1]。临床报道其用于产后子宫复旧不全疗效显著[2-3]，为验证该疗效，本文观察鲜益母草胶囊对药物不完全流产大鼠模型的影响，以期为该药的临床应用与进一步开发提供指导。

1 实验材料

1.1 动物 SD 大鼠，鼠龄7～8周，SPF 级，♀♂兼用，体质量(200±20)g，购自浙江省实验动物中心，动物合格证号：SCXK(浙)2014-0001。大鼠分笼饲养于清洁级动物房内，温度20～26 ℃，相对湿度40%～70%，光照明暗交替各12 h，通风≥15 次/h；动物使用设施条件合格证号：SCYK(浙)2018-0011。

1.2 药品及试剂 鲜益母草胶囊：浙江大德制药集团有限公司，批号：180408；益母草胶囊：沈阳永大制药有限公司，批号：20171120。米非司酮片：浙江仙琚制药股份有限公司，批号：180108；米索前列醇片：浙江仙琚制药股份有限公司，批号：190102。

1.3 仪器 Infinate200 PRO酶标仪：Tecan Austria Gmbh； DM4000 B透射显微镜 (明场) +荧光显微镜：德国莱卡仪器公司。

2 方法

2.1 模型制备 取SD大鼠120只，雌雄按2:1比例合笼(16：00)，第二天上午9：00观察阴道栓，进行阴道涂片检查，以发现有精子为妊娠第1天(d1)。预留8只孕鼠作为正常对照组，其它孕鼠于妊娠d11分别按体质量灌胃米非司酮8.3 mg/kg和米索前列醇100 μg/kg，待阴道内有血流出，造模完成。正常妊娠组灌胃等容积的生理盐水。

2.2 动物分组与给药 将成模大鼠随机分为模型组(9只)、益母草胶囊组(8只)、鲜益母草胶囊低剂量组(9只)、鲜益母草胶囊中剂量组(9只)、鲜益母草胶囊高剂量组(9只)；正常妊娠组(8 只)。正常组和模型组，每日灌胃10 mL/kg生理盐水，益母草胶囊组组每日灌胃0.946 g/kg益母草胶囊，鲜益母草胶囊低、中、高剂量组每日灌胃0.18、0.36、0.72 g/kg鲜益母草胶囊。从妊娠d13开始给药，每日灌胃1次，连续给药7 d。

2.3 观察指标及测定

2.3.1 子宫出血时间及出血量测定 成模大鼠于阴道内置入定量棉球1个(棉球重75～80 mg)，次日分别于上午和下午将棉球取出，放入塑料袋中密闭冷藏保存，同时置换一个新棉球于阴道内, 以棉球可见血为标准记录出血时间，连续至d19, 将收集的每鼠阴道棉球进行出血量测定[4]。取大鼠一只，从尾静脉处取血200 μL，立即加入50 g/L的NaOH水溶液中，混匀后定容至2 mL，得100 ml/L血溶液，等量稀释为50、25、12.5、6.25、3.125、1.5625 ml/L 10个浓度，用酶标仪在波长为546 nm处测定各浓度的吸光度。以吸光度为横坐标，血浓度为纵坐标，计算标准曲线的血浓度(y)—吸光度(x)回归方程。每鼠子宫出血棉球分别置于烧杯内，根据出血量情况加适量50 g/L的NaOH溶液浸泡，挤压搓洗棉球血渍，浸洗后的溶液倒入另一烧杯内保存。再加适量50 g/L的NaOH溶液浸泡棉球，挤压搓洗血渍，倒入保存容器。根据棉球血渍洗脱情况决定是否再浸洗一次。将先后所有浸提液混匀，记录所用50 g/L的NaOH溶液总量，取2 mL浸提液3 000 r/min离心10 min，取上清液用酶标仪在波长为546 nm处测定吸光度[4]。依据血浓度(y)—吸光度(x)回归方程，计算出每个阴道棉球的含血量。每鼠所有出血棉球的含血量总和即为该鼠的出血量(mL)。

2.3.2 子宫和卵巢指数的测定 各组大鼠末次给药1 h后乌拉糖麻醉处死，切开腹部，取出子宫和卵巢称重。按以下公式计算子宫和卵巢指数。子宫指数 =子宫湿重/大鼠体重 ×100%；卵巢指数=卵巢湿重/大鼠体重 ×100%。

2.3.3 子宫病理变化 分离子宫后，观察子宫形态变化。将子宫放入10 %甲醛溶液中固定，进行HE染色，光学显微镜下观察子宫的病理变化。参考子宫病理分级标准评定[4-5]。

2.4 统计学处理 采用 SPSS 11.0 统计分析软件处理实验数据。数据采用平均数±标准差表示，各组间比较采用单因素方差分析，方差检验齐者用LSD法，方差不齐者用用DunnettT3检验。P<0.05 表示差异有统计学意义。

3 结果

3.1 各组大鼠子宫出血时间和出血量的比较 见表1。

表1 各组大鼠子宫出血时间和出血量的测定结果

3.2 各组大鼠子宫和卵巢指数的比较 见表2。

表2 各组大鼠子宫和卵巢指数比较

3.3 各组大鼠子宫病理变化的观察结果

肉眼观察：正常妊娠组大鼠子宫胚胎发育完整，胚胎数8～16个。模型组子宫膨大的结节明显，但胚胎之间界限不明显，有明显的残留和瘀血，颜色暗红，为不完全流产。各用药组大鼠子宫，除了有些子宫周围充血外均无结节状膨大和明显瘀血点。说明鲜益母草和益母草对模型大鼠的子宫复旧不全均有较好的促进作用。

光学显微镜观察：正常妊娠大鼠子宫组织，有明显的滋养细胞存在。模型组大鼠子宫组织，虽然无明显的滋养细胞，但均有明显的蜕膜细胞与淤血。其余各组除低剂量组个别大鼠子宫有明显的蜕膜细胞与淤血，各组大鼠子宫组织均无明显的滋养细胞和蜕膜细胞。见图 1。各组大鼠子宫内膜病理学分级及评分见表3。

图1 各组大鼠子宫组织形态学变化(×100)

表3 各组大鼠子宫内膜病理形态分级及评分比较

4 讨论

益母草其味辛苦，性微寒，归心、肝、膀胱经，功擅活血调经、清热解毒、利尿消肿，为“妇产科要药”。《本草纲目》言其具有“活血、调经、解毒……治崩中漏下”。鲜益母草胶囊以鲜益母草为原料，利用匀浆、喷雾干燥工艺制备而成[6]，临床报道，鲜益母草胶囊活血祛瘀，促进子宫收缩效果明显,对治疗产后子宫复原不全、恶露不绝的总有效率达96.67%[7]。

现代药理研究显示，益母草对子宫有明显兴奋作用，能增强子宫平滑肌收缩，促进子宫内残留物排出，抑制药流后大鼠子宫出血[8]；益母草对药物流产后大鼠具有明显的止血作用，能减少宫内滞留物、增强子宫收缩活动[9]。项目组早期的研究表明，与益母草胶囊比较，鲜益母草胶囊具有更好的收缩子宫和活血化瘀作用[10]。

本研究结果显示：鲜益母草能减少药物流产不全大鼠子宫出血量(P<0.01)， 缩短子宫出血时间(P<0.01)；出血时间明显短于益母草胶囊组(P<0.05)；与模型组比较，鲜益母草和益母草均能减少药流后大鼠子宫指数(P<0.05)。病理学观察结果显示鲜益母草和益母草均能促进子宫腔内的绒毛、蜕膜组织物排出。

综上所述，鲜益母草胶囊能明显抑制药物不完全流产后大鼠子宫出血，促进子宫复原。其作用机制有待进一步深入研究。