RRM1、PDCD-5、VEGF对非小细胞肺癌放疗后近期疗效及预测价值

张昊 徐新禹 崔秀洁 郭玉华

三维放射是目前临床治疗非小细胞肺癌（nonsmall cell lung cancer，NSCLC）患者的有效手段。但相关研究发现，三维放射治疗放疗后部分患者症状缓解率较低，如有生物标记作为标准帮助筛选患者进行治疗，可提高疗效，降低毒副反应，故寻求有效肿瘤标志物对NSCLC 患者具有重要意义［1］。研究显示核苷酸还原酶1（ribonucleotide reductase subunitl，RRM1）在多种恶性肿瘤中高表达，其分泌与肺癌肿瘤关系密切［2］。程序化死亡因子5（Programmed death factor 5，PDCD-5）是临床上重要的凋亡调控分子，经临床实验证明其对肿瘤化疗具有协同增敏的作用［3］。而血管内皮生长因子（vasclar endothelial growth factor，VEGF）系肿瘤生长、侵袭及转移相关主要调控因子之一，证实其表达水平与肿瘤组织及淋巴结转移密切相关［4］。本研究对RRM1、PDCD-5及VEGF 表达对NSCLC 患者放疗后近期疗效评价及预测价值系进行分析，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2015年5月至2017年5月本院收治的NSCLC 患者126例，其中男85例，女41例；年龄52～78 岁，平均（68.79±3.31）岁。根据放疗后近期疗效情况分为：完全缓解组：61例，部分缓解组：36例，未缓解组：29例。纳入标准：①所有患者均予以外科切除手术明确的病理，符合中华医学会肺癌临床诊疗指南（2018 版）［5］标准；②入组前均接受一个月放疗；③根据本院实际情况纳入年龄在51～78 岁之间；④临床资料完整且真实。排除标准：①合并血液疾病者；②严重精神疾患或痴呆等无法配合本研究者；③存在除NSCLC 以外其他原发性恶性肿瘤者；④合并风湿免疫及结缔组织病变者。本研究经医院伦理委员会批准通过，受试者均同意研究并签署知情同意书。

1.2 放射治疗

NSCLC 患者予以三维适形放疗，放疗部位包括原发灶、同侧肺门、纵隔可见淋巴结。三维放射治疗计划系统中根据放疗计划分别统计V20、V30（接受20 Gy/30 Gy 照射的肺占全肺总体积的百分数）和全肺照射平均剂量。

1.3 标本采集及检测方法

RRMl 多克隆抗体，购自北京博奥森生物技术有限公司；PDCD-5 单克隆抗体购于北京宝赛生物技术有限公司；VEGF 单克隆抗体试剂盒购于北京中山生物技术有限公司。免疫组化采用链霉素抗生物素蛋白一过氧化酶连接法（streptavidin-perosidase，SP）法，SP 试剂盒购自北京中山生物科技有限公司。各步骤均严格按照试剂盒说明书进行操作［6］。染色结果判定标准［7］：以细胞核中出现棕黄色颗粒为RRM1、PDCD-5、VEGF 阳性染色细胞。每张切片随机选取10 个高倍视野，按照阳性细胞的染色数量和显色强度分级评分，取其平均值。细胞染色数量的评分按照阳性细胞计数占同类细胞的百分比，计算该病例的细胞阳性率。

1.4 近期疗效研究方法

采用世界卫生组织（World Health Organization，WHO）评价标准［8］：分为：完全缓解、部分缓解、无变化、进展。

1.5 临床分期及分化程度判定

根据美国癌症联合委员会系统（American Joint Committeeon Cancer，AJCC）［9］建议进行TNM分期，结合有关肿瘤、附近淋巴结和远处器官转移的信息，使用Ⅰ到Ⅳ期进行描述。并根据切除的病理组织切片对患者分化程度进行判断。

1.6 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计数资料以n（%）表示，行χ2检验；采用多元Logistic 回归分析影响NSCLC 患者近期疗效的独立危险因素；采用ROC 曲线分析RRM1、PDCD-5 及VEGF 对NSCLC 患者近期疗效的预测价值；以P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 RRM1、PDCD-5 及VEGF 水平表达

研究组RRM1、PDCD-5、VEGF 阳性表达率高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1、图1。

表1 RRM1、PDCD-5 及VEGF 水平表达［n（%）］Table 1 Expression of RRM1，PDCD-5 and VEGF［n（%）］

图1 RRM1、PDCD-5 及VEGF 在NSCLC 癌组织的表达（SP，×400）Figure 1 expression of RRM1，PDCD-5 and VEGF in NSCLC carcinoma（SP，×400）

2.2 放疗后RRM1、PDCD-5 及VEGF 在NSCLC患者水平表达

放疗后，完全缓解组及部分缓解组RRM1、PDCD-5、VEGF 阳性表达率及阴性表达率比较差异无统计学意义（P＞0.05）；完全缓解组及部分缓解组RRM1、PDCD-5、VEGF 阳性表达率较未缓解组低，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

2.3 影响NSCLC 患者放疗后近期疗效的因素分析

患者年龄非影响近期疗效危险因素；临床分期（Ⅲ+Ⅳ）期、分化程度（低、中分化）、RRM1、PDCD-5 及VEGF 阳性为影响NSCLC 患者放疗后近期疗效的独立危险因素（P＜0.05）。见表3。

表2 比较放疗后RRM1、PDCD-5 及VEGF 在NSCLC 患者水平表达［n（%）］Table 2 The expression of RRM1，PDCD-5 and VEGF in NSCLC patients after radiotherapy［n（%）］

表3 影响NSCLC 患者放疗后近期疗效的因素分析Table 3 Analysis of factors affecting the short-term efficacy of radiotherapy in patients with NSCLC

2.4 RRM1、PDCD-5 及VEGF 单项及联合检测对NSCLC 患者近期疗效的预测价值

ROC 曲线显示：RRM1、PDCD-5 及VEGF 单项及联合检测曲线下面积分别为0.817、0.705、0.798、0.938，联合检测最大。见表4、图2。

表4 RRM1、PDCD-5 及VEGF 单项及联合检测对NSCLC 患者近期疗效的预测价值Table 4 The predictive value of single and combined RRM1，PDCD-5 and VEGF tests on the short-term efficacy of NSCLC patients

图2 RRM1、PDCD-5 及VEGF 单项及联合检测曲线分析Figure 2 Analysis of single and combined detection curves of RRM1，PDCD-5 and VEGF

3 讨论

研究发现，NSCLC 五年生存率仅为28.13%［10］。近年来，有学者发现肿瘤转移抑制基因和宿主因素间相互作用密切相关，这为进一步探讨NSCLC 发病机制并优化诊疗方案提供了新的思路。

RRM1系肿瘤转移抑制基因，其在多种肿瘤组织中高表达，参与细胞增殖、凋亡、自噬等多个生物学过程。众多研究发现，DNA 修复基因的能力与肺癌的发病及耐药有关；DNA 修复基因修复力低者肺癌发生的风险较正常人明显增加，而修复力高者对放疗耐受，使放疗失败［11］。相关动物实验研究发现，RRM1 可在影响DNA 化学损伤修复的效率及核苷酸的代谢的同时，减少黏着斑激酶磷酸化，对肿瘤细胞的转移具有抑制作用［12］。本文发现，研究组RRM1阳性表达率明显高于对照组，且完全缓解组及部分缓解组RRM1阳性表达率较未缓解组高，考虑其原因与癌组织存在基因损伤使DNA 修复基因的表达增加有关。

PDCD-5是由北京大学人类疾病基因研究中心马教授发现的一种新的凋亡调控基因，也是目前国际肿瘤研究的热点之一。研究表明PDCD-5与多种恶性肿瘤的发生、发展密切相关［13］。本研究显示PDCD-5在NSCLC 癌组织中表达率高，但予以放疗后缓解率升高。一方面与PDCD-5经真核表达载体导入或大肠杆菌表达重组蛋白导入多种细胞后，不能单独对细胞产生明显的影响，但加入诱导凋亡的因素可明显促进细胞凋亡，表明PDCD-5是凋亡增强剂，而非诱导剂；另一方面，PDCD-5表达量减少，可能使其抵抗化疗药物诱导凋亡刺激信号发生的作用机制之一。

VEGF 是近年来才被发现的一种促血管生长因子，可促进血管内皮细胞的增殖和迁移，与肿瘤浸润转移关系密切，通过癌组织增殖与淋巴结转移过程中发挥重要作用；并在胃癌、直肠癌、乳腺癌、胰腺癌等多种实体癌中均具有表达［14］。本研究结果显示，VEGF 与NSCLC 患者密切相关，在癌组织中阳性表达率高，这与Woodford 等［15］对肺癌患者VEGF 水平研究有一定出入，考虑其原因与样本量不足，导致部分结果未显示明显差异有关，后续将加大样本量，以完善研究的可靠性。此外，本文为深入了解NSCLC 患者放疗情况，对患者近期疗效进行研究发现，RRM1、PDCD-5 及VEGF 水平与是患者近期疗效危险因素相关；且ROC 曲线显示，三者水平对患者近期疗效预测价值最佳，说明检测三指标可作为预测患者近期疗效的有效手段。

综上所述，NSCLC 患者放疗后近期疗效与RM1、PDCD-5 及VEGF 水平密切相关，临床应对其指标进行监测对该疾病患者具有重要意义。