激素处理对仙鹤草不定芽诱导和增殖的影响

方利娟

（百色学院 广西百色 533000）

仙鹤草（AgrimoniapilosaL.），又名鹤草芽、龙牙草、施州龙牙草等[1]。蔷薇科，多年生木本植物，主要产地在江苏、浙江、湖北等，仙鹤草是一种较常见的中药材，药性平和，味道略苦涩；具有归心、肝经、止泻止痢、解毒截疟之功，对治疗脱力劳伤有大作用，同时仙鹤草亦可抑制直肠癌、膀胱癌、宫颈癌细胞活性，同时具有明显的止血镇静作用[2]。随着仙鹤草研究的不断深入，仙鹤草的药用、食用、观赏及饲用价值不断被开发[3,4]，采摘量逐年递增，通过植物组织培养技术得到遗传性状良好的育种苗，经过大棚种植，可以获取到大量的仙鹤草，为药物加工和生产提供充足原料[5]。

1 材料与方法

1.1 材料

产于四川宜宾的野生仙鹤草幼嫩茎段。

1.2 方法

1.2.1 不定芽诱导试验

采取野生仙鹤草的幼嫩茎段为外植体，先用75%酒精消毒20 s，再用0.1%氯化汞消毒5 min，接种到含有不同6-BA（1.0 mg/L，2.0 mg/L，3.0 mg/L）和NAA（0 mg/L，0.5 mg/L，1.0 mg/L）的MS 诱导培养基上培养，20 d 后统计腋芽的萌发率。

1.2.2 不定芽增殖试验

当诱导得到的不定芽长至2.0～3.0 cm 时，用无菌手术的或无菌剪刀将其切成含顶芽或一个侧芽的1.0 cm 左右的茎段，接种到含有不同6-BA（1.0 mg/L，2.0 mg/L，3.0 mg/L）和NAA（1.0 mg/L，2.0 mg/L，3.0 mg/L）的增殖培养基上培养，培养过程中观察并记录腋芽的生长情况，20 d后统计腋芽的增殖倍数及苗的状态。

1.3 培养条件

以MS+3%蔗糖+0.7%琼脂为基本培养基，激素处理为不同浓度的6-BA 与 NAA 组合。培养室温度白天24 ±2 ℃，夜晚20 ±2 ℃，光照时长12 h/d，光照强度2 000 ±50 lx，湿度70%。

2 结果与分析

2.1 不定芽诱导结果

由表1、表2不定芽诱导结果来看，植物激素6-BA 对于仙鹤草腋芽诱导影响极显著，NAA 对于仙鹤草腋芽诱导影响显著，所以两种激素对于腋芽诱导的影响力为 6-BA＞NAA，而6-BA 与NAA 的交互作用对于腋芽诱导无显著差异影响。当两种激素作用于外植体时，诱导率随着激素浓度的升高，先升高后降低，而当6-BA 浓度为2.0 mg/L、NAA 浓度为0.5 mg/L 时，诱导率最高，分别为65.28%和54.17%。而且当激素组合为 2.0 mg/L 6-BA +0.5 mg/L NAA，诱导率为75%，是最高的，且苗的生长情况最好，外植体诱导芽个数均值最多（4～5 个），同时苗的长度和状态也是最好的（苗呈绿色，长3～4 cm）。所以培养基MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA 的处理组合为仙鹤草带腋芽的茎段诱导的最适培养基。

表1 6-BA 与NAA 组合对仙鹤草不定芽诱导的影响

表2 6-BA 与NAA 组合对仙鹤草不定芽诱导影响的方差分析

2.2 不定芽增殖结果

由表3、表4不定芽的增殖结果来看，使用不同浓度6-BA 对腋芽增殖影响存在差异，6-BA 浓度为1.0 mg/L 时处理效果不明显，而6-BA 浓度为3.0 mg/L 时则会抑制腋芽增殖，6-BA 为2.0 mg/L 时腋芽增殖倍数远高于其余两组，增殖倍数为1.57 倍；不同浓度的NAA对腋芽增殖影响存在显著差异，当NAA 浓度为2.0 mg/L 时，增殖倍数最高，为1.57 倍，而NAA 浓度为1.0 mg/L 和3.0 mg/L 时分别为1.22和1.01 倍，说明NAA 浓度过低影响腋芽增殖，过高的NAA 浓度则对腋芽增殖不利，比较适宜的NAA 浓度应为2.0 mg/L。同时通过对表的数据分析，可知培养基MS＋2.0 mg/L 6-BA＋2.0 mg/L NAA 与其他处理组组间差异显著，增殖倍数均值为2.2 倍，远高于其他组。进一步观察小苗的长势，该组合增殖苗比较强壮，颜色深绿色，分支较多，叶片呈7～8 片。

表3 6-BA 与NAA 组合对仙鹤草不定芽增殖的影响

表4 6-BA 与NAA 组合对仙鹤草不定芽增殖影响的方差分析

3 小结与讨论

通过试验现象和数据处理结果发现，以仙鹤草带腋芽的茎段为外植体，最合适的消毒方法是75%酒精浸泡茎段30 s，0.1%氯化汞溶液浸泡消毒3 min（期间震荡几次）；腋芽诱导最适培养基配方是MS＋2.0 mg/L 6-BA＋0.5 mg/L NAA，诱导率75%；腋芽增殖最适培养基配方是MS＋2.0 mg/L 6-BA＋2.0 mg/L NAA，增殖倍数2.2 倍。

植物生长调节剂在腋芽诱导过程中作用十分重要，因为植物生长调节剂的双面性，对于其浓度的把控十分重要，而本实验参考了罗常荣的三叶青茎段带腋芽诱导过程中激素的配比浓度，使用的植物外植体的部位一致，所研究的植物材料同属于多年生草本植物，有部分相似性，具有一定的参考价值。NAA 和6-BA 对于腋芽的诱导都具有良好的效果。特别是6-BA*NAA 的交互作用在适宜的浓度下要比NAA、6-BA 单独使用时效果要好。当6-BA 浓度不发生变化时，NAA 浓度往上增加时，诱导率减少。在不定芽的增殖方面，NAA、6-BA、NAA*6-BA的交互作用对增殖都有明显影响，其中影响依次为NAA＞6-BA＞NAA*6-BA。