伊犁贝母中化学成分及其体外抗肿瘤活性研究

金悦仙，魏鸿雁，马晓玲，陈 刚，石磊岭*，张 晶

伊犁贝母中化学成分及其体外抗肿瘤活性研究

金悦仙1, 2，魏鸿雁2，马晓玲2，陈 刚2，石磊岭2*，张 晶1*

1. 吉林农业大学中药材学院，吉林 长春 130118 2. 新疆维吾尔自治区中药民族药研究所，新疆 乌鲁木齐 830002

研究伊犁贝母的化学成分及其体外抗肿瘤活性。应用多种色谱方法进行分离纯化，利用NMR、MS等波谱技术结合理化性质进行结构鉴定；并采用MTT法评价化合物对子宫颈癌HeLa细胞、结肠癌Ht-29细胞和人恶性黑色素瘤A375细胞的体外抑制活性。从伊犁贝母95%乙醇提取物中分离得到13个化合物，分别鉴定为1--阿魏酰单甘油酯（1）、4-羟基苯甲醛（2）、环()-脯-()-苯丙（3）、香草酸（4）、2-羟基-3-苯基丙酸甲酯（5）、灯盏花苷II（6）、反式肉桂酸甲酯（7）、西贝母碱（8）、阿魏酸乙酯（9）、贝母辛（10）、环(脯氨酸-甘氨酸)（11）、西贝母碱苷（12）、6,7-二甲氧基-2-萘乙酸（13）。化合物1～7、9、11、13为首次从伊犁贝母属中分离得到；化合物3、8、10～12对3种肿瘤细胞株具有不同程度的抑制活性，其中化合物10活性较强，其半数抑制浓度（IC50）分别为22.07、52.47、48.27 μmol/L。

伊犁贝母；生物碱类；抗肿瘤活性；灯盏花苷II；西贝母碱；贝母辛；西贝母碱苷

伊犁贝母Schrenk为百合科（Liliaceae）贝母属L.植物，主要分布于新疆伊犁河流域[1-2]。其鳞茎入药，味苦、甘、微凉，归肺、心经，临床上是用于治疗呼吸系统疾病的良药。伊犁贝母被收录在《中国药典》2015年版中的“伊贝母”项下[3]，是新疆维吾尔族传统维药之一[4]，且产量较高，和同类贝母相比较具有较高的生物碱含量[5]。现代药理学表明，伊犁贝母具有镇咳祛痰、抗炎、抗菌等生理活性[6-7]。为进一步阐明伊犁贝母的物质基础，本研究对伊犁贝母95%乙醇提取物进行了系统研究，分离得到了13个化合物，分别鉴定为1--阿魏酰单甘油酯（1--feruloylglycerol，1）、4-羟基苯甲醛（4-hydroxy- benzaldehyde，2）、环()-脯-()-苯丙[cyclo()-Pro- ()-Phe，3]、香草酸（vanillic acid，4）、2-羟基-3-苯基丙酸甲酯（2-hydroxy-3-phenylpropanoic acid methyl ester，5）、灯盏花苷II（erigeside II，6）、反式肉桂酸甲酯（methyl cinnamate，7）、西贝母碱（imperialine，8）、阿魏酸乙酯[ethyl 3-(4-hydroxy- 3-methoxyphenyl) acrylate，9]、贝母辛（peimisine，10）、环(脯氨酸-甘氨酸)[cyclo(pro-gly)，11]、西贝母碱苷（sipeimine-3β--glucoside，12）、6,7-二甲氧基-2-萘乙酸（6,7-dimethoxynaphthalene-2- carboxylic acid，13）。其中，化合物1～7、9、11、13为首次从伊犁贝母属中分离得到。通过MTT法评价了13个化合物针对人宫颈癌HeLa细胞、结肠癌Ht-29细胞、人恶性黑色素瘤A375细胞的体外抑制活性，结果显示化合物3、8、10～12分别对3种肿瘤细胞株具有不同程度的抑制活性，其中化合物10活性最强，其半数抑制浓度（IC50）分别为22.07、52.47、48.27 μmol/L。

1 仪器与材料

Bruker Avance III 600型核磁共振波谱仪（德国Bruker公司）；赛默飞世LTQ-Obitrap XL液质联用仪（美国Thermo Fisher公司）；柱色谱硅胶和薄层色谱用硅胶G、H、GF254（青岛海洋化工有限公司）；HW-40C凝胶（Toyopearl公司），V-3003K型旋转蒸发仪、SZ-93型循环水真空泵（上海振捷实验设备有限公司）；超声波清洗仪（天津科贝尔光电技术有限公司）；BS223S分析天平（北京赛多利斯仪器系统有限公司）；常规试剂均为分析纯（北京化工厂）。

伊犁贝母（栽培）采自新疆博尔塔拉蒙古自治州温泉县安格里格乡奇其尔根布呼村，经新疆维吾尔自治区中药民族药研究所贾晓光研究员鉴定为伊犁贝母Schrenk的干燥鳞茎。

2 提取与分离

取伊犁贝母鳞茎部20 kg，均分成2部分，阴干，粉碎为粗粉，每个部分（10 kg）均用体积分数95%乙醇回流提取3次，每次2 h，合并提取液，减压回收溶剂，得到的总浸膏分为2部分，第1部分浸膏（1089 g）、第2部分浸膏（991 g）。

第1部分总浸膏用水分散后，依次用石油醚、氯仿、醋酸乙酯各萃取3次，萃取液减压浓缩至干，最终得到石油醚部位浸膏49.2 g、氯仿部位浸膏56.1 g、醋酸乙酯部位浸膏94.5 g。取氯仿部位浸膏（56.1 g）经硅胶柱（100～200目）色谱，石油醚-氯仿（40∶1→0∶1）、氯仿-甲醇（80∶1→0∶1）梯度洗脱得到10个流分Fr. 1～10。Fr. 5（2.7 g）经硅胶柱（100～200目）色谱，石油醚-氯仿（1∶1.5→0∶1）、氯仿-甲醇（80∶1→0∶1）梯度洗脱得到8个流分Fr. 5-1～5-8。Fr. 5-4经HPLC半制备色谱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，60%甲醇）得到化合物1（2.4 mg）和2（2.3 mg）。Fr. 5-6经C18反相柱色谱（30%～90%甲醇溶液梯度洗脱）得到6个流分Fr. 5-6-1～5-6-6，Fr. 5-6-2经HPLC半制备色谱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，65%甲醇）得到化合物3（3.2 mg）。Fr. 6（2.9 g）经C18反相柱色谱（30%～90%甲醇溶液梯度洗脱）得到6个流分Fr. 6-1～6-6，Fr. 6-1经反复凝胶及高效液相色谱分离纯化得到化合物4（4.9 mg）。Fr. 7（3.1g）经C18反相柱色谱（30%～90%甲醇溶液梯度洗脱）得到6个流分Fr. 7-1～7-6，Fr. 7-2经HPLC半制备色谱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，60%甲醇）得到化合物5（2.9 mg）。Fr. 9（3.3 g）经C18反相柱色谱（30%～90%甲醇梯度洗脱）得到6个流分Fr. 9-1～9-6，Fr. 9-2经HPLC半制备色谱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，55%甲醇）得到化合物6（3.4 mg）。

第2部分用2%盐酸（pH 3.5）捏溶，滤得酸液，将酸液用石油醚萃取脱脂, 然后用氨水调pH值至10，依次用氯仿及水饱和的正丁醇萃取，得到氯仿部位（18.2 g）和正丁醇部位（70.3 g）。取氯仿部位浸膏（18.2 g）经硅胶柱（100～200目）色谱，石油醚-丙酮-三乙胺（20∶1∶0.1→1∶5∶0.1）梯度洗脱得到9个流分Fr. A～I。Fr. A经反复硅胶、凝胶色谱分离纯化，得到化合物7（2.8 mg）。Fr. B经反复重结晶得到化合物8（30 mg）。Fr. C经HPLC半制备色谱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，60%甲醇）得到化合物9（2.5 mg）。Fr. E经HPLC半制备色谱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，70%甲醇）得到化合物10（3.1 mg）和11（4.4 mg）。Fr. G经反复重结晶得到化合物12（62.3 mg），其母液经HPLC半制备色谱（YMC-Pack ODS-A，250 mm×10 mm，5 μm，48%甲醇）得到化合物13（2.9 mg）。

3 结构鉴定

化合物1：淡黄色油状物，ESI-MS/: 291 [M＋Na]+（计算值291，C13H16O6Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.68 (1H, m, H-7′), 7.08 (1H, m, H-2′), 7.04 (1H, m, H-6′), 6.93 (1H, m, H-5′), 6.36 (1H, m, H-8′), 4.37 (2H, m, H-1), 3.86 (1H, m, H-2), 3.85 (2H, m, H-3), 3.92 (3H, s, 3′-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 168.9 (C-9′), 146.3 (C-3′), 146.2 (C-7′), 146.1 (C-4′), 126.9 (C-1′), 123.6 (C-6′), 114.9 (C-5′), 114.6 (C-8′), 109.5 (C-2′), 72.6 (C-2), 65.6 (C-1), 62.4 (C-3), 56.1 (3′-OMe)。以上数据与文献报道一致[8]，故鉴定化合物1为1--阿魏酰单甘油酯。

化合物2：淡黄色油状物，ESI-MS/: 145 [M＋Na]+（计算值145，C7H6O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.82 (1H, d,= 8.4 Hz, H-2), 6.96 (1H, d,= 8.4 Hz, H-3), 6.94 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 7.81 (1H, d,= 8.4 Hz, H-6), 9.88 (1H, s, 1-CHO), 5.67 (1H, s, 4-OH)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 130.3 (C-1), 132.5 (C-2), 116.1 (C-3), 161.2 (C-4), 116.1 (C-5), 132.5 (C-6), 190.9 (1-CHO)。以上数据与文献报道一致[9]，故鉴定化合物2为4-羟基苯甲醛。

化合物3：淡黄色油状物，ESI-MS/: 267 [M＋Na]+（计算值267，C14H16N2O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 4.29 (1H, m, H-2), 2.52, 2.50 (2H, m, H-3), 3.34, 2.33 (2H, m, H-4), 3.59, 3.57 (2H, m, H-5), 4.30 (1H, m, H-2′), 2.82, 2.80 (2H, m, H-3′), 7.35 (1H, m, H-5′), 7.34 (1H, m, H-6′), 7.30 (1H, m, H-7′), 7.29 (1H, m, H-8′), 7.23 (1H, m, H-9′)。13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 169.8 (C-1), 60.3 (C-2), 28.8 (C-3), 22.7 (C-4), 45.6 (C-5), 165.2 (C-1′), 56.4 (C-2′), 37.0 (C-3′), 136.0 (C-4′), 129.4 (C-5′), 129.3 (C-6′), 127.7 (C-7′), 129.4 (C-8′), 129.3 (C-9′)。以上数据与文献报道一致[10]，故鉴定化合物3为环()-脯-()-苯丙。

化合物4：淡黄色油状物，ESI-MS/: 191 [M＋Na]+（计算值191，C8H8O4Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.58 (1H, d,= 1.8 Hz, H-3), 6.98 (1H, d,=1.8 Hz, H-6), 7.72 (1H, dd,=1.8 Hz, 8.4 Hz, H-7), 7.43 (1H, s, COOH), 7.08 (1H, s, 5-OH), 3.49 (3H, s, 4-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 169.7 (C-1), 121.3 (C-2), 114.4 (C-3), 150.8 (C-4), 146.4 (C-5), 112.2 (C-6), 114.4 (C-7), 56.3 (4-OMe)。以上数据与文献报道一致[11]，故鉴定化合物4为香草酸。

化合物5：淡黄色油状物，ESI-MS/: 203 [M＋Na]+（计算值203，C10H12O3Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.31 (1H, m, H-4′), 7.29 (2H, m, H-3′, 5′), 7.21 (2H, m, H-2′, 6′), 4.48 (1H, dd,= 7.2, 5.4 Hz, H-2), 3.20 (1H, dd,= 4.2, 13.8 Hz, H-3α), 3.14 (1H, dd,= 4.2, 13.8 Hz, H-3β), 3.77 (3H, s, 1-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 174 (C-1), 136.6 (C-1′), 129.8 (C-3′), 129.6 (C-5′), 128.6 (C-4′), 127.1 (C-2′, 6′), 71.4 (C-2), 40.7 (C-3), 56.8 (1-OMe)。以上数据与文献报道一致[12]，故鉴定化合物5为2-羟基-3-苯基丙酸甲酯。

化合物6：淡黄色油状物，ESI-MS/: 365 [M＋Na]+（计算值365，C16H22O8Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 6.44 (1H, s, H-3), 6.44 (1H, s, H-5), 7.05 (1H, m, H-7), 5.14, 5.90 (2H, m, H-8), 5.93 (1H, m, H-9), 3.80 (1H, m, H-10), 3.49 (1H, m, H-11), 3.61 (1H, m, H-12), 3.91 (1H, m, H-13), 3.82 (2H, m, H-14), 2.04 (4H, s, 11～14-OH), 3.85 (3H, s, 2-OMe), 3.85 (3H, s, 6-OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 137.8 (C-1), 152.7 (C-2), 106.7 (C-3), 120.1 (C-4), 106.7 (C-5), 152.7 (C-6), 136.9 (C-7), 116.7 (C-8), 105.7 (C-9), 76.8 (C-10), 70.4 (C-11), 74.4 (C-12), 74.4 (C-13), 62.6 (C-14), 56.4 (2-OMe), 56.4 (6-OMe)。以上数据与文献报道一致[13]，故鉴定化合物6为灯盏花苷II。

化合物7：淡黄色油状物，ESI-MS/: 185 [M＋Na]+（计算值185，C10H10O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.7 (1H, d,= 15.6 Hz, H-7), 7.57 (1H, dd,= 1.2, 2.4 Hz, H-4), 7.56 (1H, d,= 2.4 Hz, H-3, 5), 7.42 (2H, d,= 1.2 Hz, H-2, 6), 6.46 (1H, d,= 16.2 Hz, H-8), 3.81 (3H, s, H-10)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 167.6 (C-9), 145.1 (C-7), 134.5 (C-1), 130.4 (C-2, 6), 129.1 (C-4), 128.2 (C-3, 5), 117.9 (C-8), 51.9 (C-10)。以上数据与文献描述一致[14]，故鉴定化合物7为反式肉桂酸甲酯。

化合物8：白色粉末，ESI-MS/: 452 [M＋Na]+（计算值452，C27H43NO3Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 1.47 (2H, m, H-1), 1.76 (2H, m, H-2), 3.46 (2H, s, H-3), 2.01 (2H, m, H-4), 2.38 (1H, m, H-5), 2.38 (2H, m, H-7), 1.74 (1H, m, H-8), 1.47 (1H, m, H-9), 1.55 (2H, m, H-11), 1.40 (1H, m, H-12), 1.61 (1H, m, H-13), 1.40 (1H, m, H-14), 1.53 (4H, m, H-15, 16), 1.48 (1H, m, H-17), 2.38 (4H, m, H-18, 26), 1.15 (3H, m, H-19), 1.47 (1H, m, H-20), 1.33 (3H, m, H-21), 2.38 (1H, m, H-22), 1.59 (4H, m, H-23, 24), 1.61 (1H, m, H-25), 1.09 (3H, m, H-27), 2.02 (1H, m, 3-OH), 2.01 (1H, m, 20-OH)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 30.6 (C-1), 30.4 (C-2), 70.6 (C-3), 30.4 (C-4), 56.7 (C-5), 211.1 (C-6), 46.6 (C-7), 39.1 (C-8), 56.5 (C-9), 38.3 (C-10), 30.6 (C-11), 40.3 (C-12), 39.1 (C-13), 46.6 (C-14), 26.9 (C-15), 19.6 (C-16), 49.0 (C-17), 59.8 (C-18), 22.4 (C-19), 72.1 (C-20), 22.4 (C-21), 70.8 (C-22), 19.8 (C-23), 37.6 (C-24), 27.8 (C-25), 61.4 (C-26), 17.3 (C-27)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物8为西贝母碱。

化合物9：淡黄色油状物，ESI-MS/: 245 [M＋Na]+（计算值245，C12H14O4Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.63 (1H, d,= 15.6 Hz, H-7), 7.08 (1H, dd,= 2.4, 8.4 Hz, H-6), 7.04 (1H, d,= 2.4 Hz, H-2), 6.93 (1H, d,= 8.4 Hz, H-5), 6.30 (1H,= 15.6 Hz, H-8), 4.27 (2H, q,= 7.2 Hz, H-10), 3.93 (3H, s, 3-OMe), 1.35 (3H, t,= 7.2 Hz, 10-Me)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 167.5 (C-9), 148.0 (C-4), 147.8 (C-3), 144.9 (C-7), 127.6 (C-1), 123.2 (C-2), 115.8 (C-5), 114.8 (C-6), 109.4 (C-8), 60.6 (C-10), 56.1 (3-OMe), 14.6 (10-Me)。以上数据与文献报道一致[16]，故鉴定化合物9为阿魏酸乙酯。

化合物10：白色粉末，ESI-MS/: 450 [M＋Na]+（计算值450，C27H41NO3Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 1.47 (2H, m, H-1), 1.73 (2H, m, H-2), 3.17 (1H, m, H-3), 1.74 (2H, m, H-4), 2.30 (2H, m, H-7), 1.75 (1H, m, H-8), 1.76 (1H, m, H-9), 1.16 (1H, m, H-10), 2.09 (2H, m, H-11), 1.73 (1H, m, H-13), 2.09 (1H, m, H-14), 1.74 (2H, m, H-15), 1.75 (2H, m, H-16), 1.63 (3H, m, H-18), 1.16 (3H, m, H-19), 2.28 (1H, m, H-20), 1.09 (3H, s, H-21), 2.81 (1H, t,= 7.2 Hz, H-22), 3.79 (1H, t,= 7.2 Hz, H-23), 1.72 (2H, m, H-24), 1.47 (1H, m, H-25), 2.64 (2H, m, H-26), 1.03 (3H, d,= 7.2 Hz, H-27)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 39.1 (C-1), 31.7 (C-2), 70.5 (C-3), 37.1 (C-4), 56.7 (C-5), 210.6 (C-6), 45.8 (C-7), 46.0 (C-8), 54.5 (C-9), 38.5 (C-10), 28.5 (C-11), 128.5 (C-12), 141.0 (C-13), 48.6 (C-14), 24.2 (C-15), 30.0 (C-16), 85.1 (C-17), 13.1 (C-18), 12.5 (C-19), 39.7 (C-20), 10.7 (C-21), 66.3 (C-22), 75.6 (C-23), 30.4 (C-24), 31.6 (C-25), 54.7 (C-26), 18.9 (C-27)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物10为贝母辛。

化合物11：淡黄色油状物，ESI-MS/: 177 [M＋Na]+（计算值177，C7H10N2O2Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 3.61 (2H, s, H-3), 2.09 (2H, m, H-4), 2.35 (2H, m, H-5), 4.68 (1H, m, H-6), 8.11 (1H, m, NH-8), 4.05 (2H, m, H-9)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 159.1 (C-1, C=O), 153.6 (C-2, C=O), 45.5 (C-3), 25.3 (C-4), 29.8 (C-5), 63.1 (C-6), 46.7 (C-9)。以上数据与文献报道一致[17]，故鉴定化合物11为环(脯氨酸-甘氨酸)。

化合物12：白色粉末，ESI-MS/: 614 [M＋Na]+（计算值614，C33H53NO8Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 1.47 (2H, m, H-1), 1.76 (2H, m, H-2), 2.53 (1H, m, H-3), 2.01 (2H, m, H-4), 2.38 (1H, m, H-5), 2.39 (2H, m, H-7), 1.74 (1H, m, H-8), 1.47 (1H, m, H-9), 1.55 (2H, m, H-11), 1.40 (2H, m, H-12), 1.61 (1H, m, H-13), 1.40 (1H, m, H-14), 1.53 (4H, m, H-15, 16), 1.48 (1H, m, H-17), 2.38 (4H, m, H-18, 26), 1.15 (3H, m, H-19), 1.47 (1H, m, H-20), 1.33 (3H, m, H-21), 2.38 (1H, m, H-22), 1.59 (4H, m, H-23, 24), 1.61 (1H, m, H-25), 1.09 (3H, m, H-27), 3.76 (1H, m, H-2′), 3.47 (1H, m, H-3′), 3.49 (1H, m, H-4′), 3.56 (1H, m, H-5′), 4.40 (1H, m, H-6′), 3.51 (2H, m, H-7′), 2.05 (4H, m, 3′,4′,5′,7′-OH)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 30.6 (C-1), 29.7 (C-2), 72.2 (C-3), 28.7 (C-4), 56.7 (C-5), 211.1 (C-6), 46.6 (C-7), 39.1 (C-8), 56.5 (C-9), 38.3 (C-10), 30.6 (C-11), 40.3 (C-12), 39.1 (C-13), 46.6 (C-14), 26.9 (C-15), 19.6 (C-16), 49.0 (C-17), 59.8 (C-18), 22.4 (C-19), 72.1 (C-20), 22.4 (C-21), 70.8 (C-22), 19.8 (C-23), 37.6 (C-24), 27.8 (C-25), 61.4 (C-26), 17.3 (C-27), 78.2 (C-2′), 69.7 (C-3′), 73.4 (C-4′), 75.7 (C-5′), 101.1 (C-6′), 61.7 (C-7′)。以上数据与文献报道一致[15]，故鉴定化合物12为西贝母碱苷。

化合物13：淡黄色油状物，ESI-MS/: 255 [M＋Na]+（计算值255，C13H12O4Na [M＋Na]+）。1H-NMR (600 MHz, CDCl3): 7.54 (1H, s, H-8)，6.94 (1H, s, H-1), 6.96 (1H, d,= 6.8 Hz, H-3), 6.80 (1H, d,= 6.8 Hz, H-4), 5.88 (1H, brs, -OH), 3.75 (6H, s, -OMe)；13C-NMR (150 MHz, CDCl3): 165.8 (-COOH), 148.4 (C-6), 146.2 (C-7), 144.4 (C-1), 131.2 (C-10), 126.1 (C-9), 122.6 (C-8), 115.8 (C-4), 114.5 (C-3), 114.3 (C-2), 109.7 (C-5), 55.7 (-OMe), 51.2 (-OMe)。以上数据与文献报道一致[18]，故鉴定化合物13为6,7-二甲氧基-2-萘乙酸。

4 抗肿瘤活性筛选

采用MTT比色法测定化合物1～13的体外抑制人宫颈癌HeLa细胞[19]、结肠癌Ht-29细胞以及人恶性黑色素瘤A375细胞的活性[20]。以化合物1～13为实验组，顺铂为阳性对照组，同时设对照组。分别称取2 mg待测样品，用DMSO溶液充分溶解后，配制成为40 mg/mL的母液，过滤除菌后避光保存于−20 ℃冰箱中。实验前采用倍半稀释法，用完全培养基将母液稀释为实验浓度。取对数生长期的HeLa细胞、Ht-29细胞、A375细胞，并用0.25%胰蛋白酶消化成单细胞悬液后，细胞计数，以6×104/mL的密度接种于96孔板中，并在CO2培养箱中培养24 h后给药。对照组给予等体积的PBS。实验组中分别加入培养基配制的不同质量浓度（0、200、400、600、800 μg/mL）待测样品；在阳性对照组中加入不同浓度的顺铂，每个浓度设3个复孔，继续培养48 h，在避光条件下，加入5 mg/mL的MTT溶液（10 μL/孔），在培养箱中再培养4 h，弃上清后加入DMSO溶液100 μL/孔。放置于摇床上震荡5～10 min，使结晶充分溶解后，并于酶联免疫检测仪570 nm波长处检测吸光度（），根据值计算半数抑制浓度（IC50），见表1。结果显示化合物3和11对HeLa、A375细胞具有一定的体外抑制作用，化合物8对HeLa细胞的抑制作用较弱，但对A375细胞的抑制作用较强，化合物12对HeLa、Ht-29细胞的抑制作用较弱，化合物10对HeLa、Ht-29和A375细胞的具有一定抑制作用。

5 讨论

多项研究表明伊犁贝母具有抗肿瘤活性，Shen等[21]运用色谱技术结合波谱技术从伊犁贝母中分离鉴定出了对HeLa细胞具有良好抑制作用的活性成分，其IC50值为5.1～75.8 μmol/L。本实验从伊犁贝母中分离鉴定出了13个化合物，根据已有对贝母属中抗肿瘤活性物质的研究，对13个化合物进行了体外抗肿瘤活性实验。结果表明，化合物10对HeLa细胞、Ht-29细胞以及A375细胞均具有良好的抑制活性，说明伊犁贝母的抗肿瘤活性具有巨大的开发潜力[22]，对进一步研究抗肿瘤新药提供了一定的帮助。

表1 化合物3、8、10～12分别对HeLa、Ht-29、A375细胞的抑制作用

利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

[1] 张亚山, 宫喜臣. 伊犁贝母的栽培技术 [J]. 特种经济动植物, 2002, 5(6): 26-27.

[2] 陈梅花, 王慧春, 朱艳媚, 等. 贝母的药理研究 [J]. 安徽农学通报, 2007, 13(1): 103-105.

[3] 中国药典 [S]. 一部. 2015: 141-142.

[4] Li S L, Li P, Lin G,. Simultaneous determination of seven major isosteroidal alkaloids in bulbs ofby gas chromatography [J]., 2000, 873(2): 221-228.

[5] 伊江兰, 麦迪尼亚提. 伊贝母总生物碱的研究概述 [J]. 新疆中医药, 2002, 20(4): 77-79.

[6] 徐惠波, 孙晓波, 温富春. 伊犁贝母和梭砂贝母生理活性的初步比较 [J]. 中国中药杂志, 2000, 25(7): 391.

[7] Wu Y B, Su J, Guo R X,. Two new non-taxoids from leaves of[J]., 2014, 50(4): 603-605.

[8] 王萍, 许静, 王琪, 等. 黑刺菝葜根茎中苯丙素和二苯乙烯类化学成分的研究 [J]. 中国中药杂志, 2013, 38(10): 1531-1535.

[9] 李浩华, 周燕燕, 陈玉婵, 等. 紫玉盘内生真菌节菱孢中1个新的异香豆素类化合物[J]. 中草药, 2016, 47(3): 369-373.

[10] 刘海滨, 高昊, 王乃利, 等. 红树林真菌草酸青霉(092007)的环二肽类成分 [J]. 沈阳药科大学学报, 2007, 24(8): 474-478.

[11] 沈小玲, 曾惠芳, 陈珍, 等. 山橘的化学成分研究 [J]. 中国药学杂志, 2002, 37(1): 14-17.

[12] 杨新洲, 吕静南, 郝吉, 等. 昆虫共生真菌BM2的代谢产物及其抗肝癌活性研究 [J]. 中南民族大学学报: 自然科学版, 2016, 35(3): 42-47.

[13] Zhang W, Chen W, Wang Y,. Studies on the structure of two new glycosides from. [J]., 2000, 9(3): 122-124.

[14] 尹田鹏, 陈阳, 舒燕, 等. 玉龙乌头的化学成分研究 [J]. 云南大学学报: 自然科学版, 2018, 40(1): 148-153.

[15] 曹新伟. 川贝母的化学成分研究与贝母属药用植物质量评价[D]. 北京: 中国协和医科大学, 2008.

[16] 柳庆龙, 陈阿虹, 唐进英, 等. 胆木枝叶的化学成分研究[J]. 中草药, 2017, 48(1): 52-57.

[17] 于洋, 王建华, 方圣涛, 等. 污损生物膜细菌YT1305-1的鉴定及其代谢物化学成分分析 [J]. 微生物学通报, 2014, 41(7): 1278-1286.

[18] 沈岚, 蒋思萍, 朱华结. 藏波罗花化学成分的研究 [J]. 天然产物研究与开发, 2012, 24(9): 1210-1213.

[19] 王晓娟, 谢谦, 刘杨, 等. 土家族药物扣子七中三萜皂苷成分及抗肿瘤活性研究 [J]. 中草药, 2020, 51(7): 1831-1838.

[20] 彭文文, 刘欣媛, 曾广智, 等. 小叶臭黄皮咔唑生物碱化学成分及其抗肿瘤活性研究 [J]. 中草药, 2016, 47(6): 886-890.

[21] Shen S, Li G, Huang J,. Steroidal saponins fromSchrenk [J]., 2012, 83(4): 785-794.

[22] 于立坚, 马润娣, 于廷曦. 土贝母苷甲和苷乙的抗肿瘤作用 [J]. 中国新药杂志, 2002, 11(9): 692-694.

Chemical constituents fromand their antitumor activities

JIN Yue-xian1, 2, WEI Hong-yan2, Ma Xiao-ling2, CHEN Gang2, SHI Lei-ling2, ZHANG Jing1

1. College of Chinese Medicinal Materials, Jilin Agricultural University, Changchun 130118, China 2. Xinjiang Institute of Chinese and Ethnic Medicine, Urumqi 830002, China

To study the chemical constituents fromand their antitumor activities.Separation and purification of 95% ethanol extract ofwere carried out by using silica gel column, gel column and pre-HPLC and other chromatographic techniques, using NMR, MS, and other spectral techniques combined with physical and chemical properties were used for structural identification;tumor cell inhibitory activities of constituents to cervical cancer cells (HeLa), colon cancer cells (Ht-29) and human malignant melanoma cells (A375) were evaluated.Thirteen chemical constituents, including 1--feruloylglycerol (1), 4-hydroxybenzaldehyde (2), cyclo()-pro-()-phe (3), vanillic acid (4), 2-hydroxy-3-phenylpropanoic acid methyl ester (5), erigeside II (6), methyl cinnamate (7), imperialine (8), ethyl 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)acrylate (9), peimisine (10), cyclo(pro-gly) (11), sipeimine-3β--glucoside (12), and 6,7-dimethoxynaphthalene-2-carboxylic acid (13) were isolated from.Compounds 1—7, 9, 11, and 13 are isolated fromfor the first time. And compounds 3, 8, 10—12 exhibit inhibitory activity against the tested cell lines. The IC50of compound 10 to the tested cell lines were 22.07, 52.47, and 48.27 μmoL/L, respectively.

Schrenk; alkaloids; antitumor activity; erigeside II; imperialine; peimisine; sipeimine-3β--glucoside

R284.1

A

0253 - 2670(2021)06 - 1562 - 06

10.7501/j.issn.0253-2670.2021.06.003

2020-07-12

2018年中医药公共卫生服务补助专项“全国中药资源普查项目”（财社［2018］43号）；国家中医药管理局全国中药资源普查项目（GZY-KJS-2018-004）

金悦仙，硕士研究生，从事天然产物化学研究。E-mail: jyx0107@126.com

石磊岭，副研究员，从事天然产物化学研究。E-mail: shileiling@sina.com

张 晶，博士生导师，教授，从事天然产物化学研究。E-mail: zhjing0701@163.com

[责任编辑 王文倩]