CDX2、SOX2在浆液性卵巢癌组织中的表达及其临床意义

谢双双 张 娟 尚丹丹 康燕华

河北北方学院附属第一医院(张家口，075000)

卵巢癌是妇科常见恶性肿瘤，其中卵巢上皮性肿瘤占卵巢癌比例高达90%，包括浆液性、粘液性、子宫内膜样型等，而卵巢浆液性癌占比又高达80%[1]。临床评估卵巢浆液性腺癌患者预后时多根据病理分级、临床分期等，但对患者治疗后转移、复发情况不能及时准确预估，探寻肿瘤进展中相关生物标志物是提高患者预后评估准确性的关键。尾型同源盒转录因子2(CDX2)在结直肠癌组织中低表达，与肿瘤淋巴结转移、远处转移及生存期短有关[2]。此外，Y染色体性别决定区相关的高迁移率族盒蛋白2(SOX2)在乳腺癌、宫颈癌、胃癌等肿瘤进展中表达水平升高，参与调控肿瘤细胞增殖、分化等，可能作为肿瘤早期诊断及预后标志物[3-5]。有研究证实，SOX2在结直肠癌中可通过诱导CDX2下调促进肿瘤细胞增殖和患者预后不良发生[6]。由于CDX2在卵巢癌中研究较少，且与SOX2表达关系尚不清楚。本研究通过检测二者在卵巢浆液性肿瘤中水平变化，分析其与肿瘤临床病理特征及患者预后关系。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2012年6月-2015年6月本院收治的卵巢浆液性癌患者84例，年龄(52.4±10.3)岁(23～78岁)，卵巢交界性浆液性肿瘤患者52例，年龄(51.9±10.1)岁(22～77岁)，卵巢良性浆液性肿瘤(卵巢浆液性囊腺瘤)患者63例，年龄(52.0±10.6)岁(22～76岁)。纳入标准：①卵巢浆液性癌诊断符合国际妇产科联盟(FIGO)诊断标准[7]，卵巢交界性浆液性肿瘤及卵巢良性浆液性肿瘤诊断符合世界卫生组织诊断标准[8]，且经病理证实；②临床及随访资料完整。排除标准：①合并其他部位肿瘤；②妊娠期、哺乳期；③有严重自身免疫性疾病、精神疾病。卵巢浆液性癌患者根据FIGO分期分为Ⅰ期13例、Ⅱ期22例，Ⅲ期29例、Ⅳ期20例；根据组织学分级分为G1期26例、G2期32例、G3期26例。本研究经本院伦理委员会批准。患者均签署知情同意书

1.2 方法

1.2.1样本采集收集卵巢浆液性癌患者癌组织及癌旁正常组织(距病灶>5 cm)，收集卵巢交界性浆液性肿瘤及卵巢良性浆液性肿瘤组织。10%福尔马林溶液浸泡后制片。

1.2.2组织中CDX2、SOX2蛋白检测采用免疫组织化学染色法检测组织中CDX2、SOX2蛋白表达水平。石蜡切片经二甲苯脱蜡、梯度酒精水化、3%H2O2溶液浸泡后在柠檬酸溶液中加热15min以修复抗原；室温冷却、甩干后滴加5%山羊血清封闭；滴加CDX2、SOX2抗体孵育过夜；滴加二抗孵育15 min，完成后使用PBS缓冲液清洗后用DAB显色、苏木素衬染，酒精脱水后二甲苯固定、风干后封片。切片在400倍光学显微镜下观察并采集图像信息。选取5个视野进行阳性细胞计数，细胞核或细胞质中呈棕黄色或棕褐色细胞为CDX2、SOX2阳性表达细胞。根据阳性细胞百分比和染色强度评分。阳性细胞：<5%、5%～25%、25%～50%、50%～75%、>75%分别计0、1、2、3、4分；染色强度：无色、淡黄色、棕黄色、棕褐色分别计0、1、2、3分。两种记分相乘为最终得分，0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)；5～8分为阳性(++)；9～12分为强阳性(+++)。(-)(+)为低表达，(++)(+++)为高表达。

1.3 治疗方法

Ⅰ-Ⅱ期患者行全子宫及双附件切除+盆腔、腹主动脉淋巴结清扫术。术后1周行以顺铂或卡铂为主的常规化疗方案，3周1个疗程，共治疗6～8个疗程。Ⅲ-Ⅳ期患者先行新辅助化疗治疗：静脉滴注150 mg/m2紫杉醇3 h/d，1d；静脉滴注200 ml 0.06 g+0.9%卡铂氯化钠注射液，1～3 d，共2～3个疗程。患者在行新辅助化疗后行满意的肿瘤细胞减灭术(减灭术后最大残余肿瘤直径≤1 cm)。

1.4 随访

入组卵巢浆液性癌患者治疗后均以电话或复查形式进行5年随访，时间截止至2020年6月。收集患者随访中生存数据。

1.5 统计学分析

2 结果

2.1 不同组织中CDX2、SOX2蛋白表达

如图1(2488页)所示，CDX2、SOX2蛋白主要表达于细胞核、细胞质或细胞膜中。癌旁正常组织、卵巢良性浆液性肿瘤组织、卵巢交界性浆液性肿瘤组织、卵巢浆液性癌组织中CDX2蛋白高表达率依次降低，SOX2蛋白高表达率依次升高(均P<0.05)。见表1。

表1 不同组织中CDX2、SOX2蛋白表达比较[例(%)]

2.2 卵巢浆液性癌组织中CDX2、SOX2蛋白表达与患者临床病理特征关系

卵巢浆液性癌组织中CDX2、SOX2蛋白高表达率在不同年龄及是否绝经患者间无差异(P>0.05)。与FIGO分期Ⅰ-Ⅱ期、组织学分级G1、无淋巴结转移、无远处转移、未复发患者比较，FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、组织学分级G2-G3、淋巴结转移、远处转移、复发患者癌组织中CDX2蛋白高表达率降低、SOX2蛋白高表达率升高(P<0.05)。见表2。

表2 卵巢浆液性癌组织中CDX2、SOX2蛋白表达与患者临床病理特征关系[例(%)]

临床病理 例数CDX2低表达(n=70) 高表达(n=14) χ2 P SOX2低表达(n=32) 高表达(n=52) χ2 P FIGO分期 Ⅰ Ⅱ3522(62.9)13(37.1)18.1130.00027(77.1)8(22.9)38.7920.000 Ⅲ Ⅳ4948(98.0)1(2.0)5(10.2)44(89.8)组织学分级 G12618(69.2)8(30.8)5.3920.02020(76.9)6(23.1)24.0720.000 G2 G35852(89.7)6(10.3)12(20.7)46(79.3)淋巴结转移4945(91.8)4(8.2)6.1220.0136(12.2)43(87.8)33.3230.000远处转移5653(94.6)3(5.4)15.4710.00015(26.8)41(73.2)13.3520.000复发4138(92.7)3(7.3)5.0410.02511(26.8)30(73.2)4.3110.038

2.3 卵巢浆液性癌组织中CDX2与SOX2蛋白表达相关性

卵巢浆液性癌组织中CDX2低表达70例、高表达12例；与SOX2蛋白低表达32例、高表达52例，CDX2与SOX2蛋白表达呈负相关(r=-0.439，P=0.000)。

2.4 卵巢浆液性癌组织中CDX2、SOX2蛋白表达与患者预后关系

84例卵巢浆液性癌患者5年随访后生存33例，死亡51例，总生存率为39.3%。经Kaplan-Meier生存分析，CDX2低表达患者5年累积生存率(32.9%，23例)低于CDX2高表达患者(71.4%，10例)(χ2=6.815，P=0.009)。SOX2低表达患者5年累积生存率(68.8%，22例)高于SOX2高表达患者(21.2%,11例)(χ2=17.890，P=0.000)。见图2(2488页)。

2.5 卵巢浆液性癌患者不良预后影响因素分析

经Cox单因素回归分析，G2-G3组织学分级、Ⅲ-Ⅳ期FIGO分期、淋巴结转移、远处转移及CDX2低表达、SOX2高表达是影响卵巢浆液性癌患者不良预后发生的危险因素(P<0.05)。经Cox多因素回归分析，Ⅲ-Ⅳ期FIGO分期、淋巴结转移、远处转移及CDX2低表达、SOX2高表达是影响卵巢浆液性癌患者不良预后发生的独立危险因素(P<0.05)。见表3。

表3 卵巢浆液性癌患者不良预后影响因素的Cox回归分析

3 讨论

浆液性卵巢癌是卵巢癌的主要病理类型之一，患者早期多无明显症状，随肿瘤进展患者易出现腹胀、腹痛、体重下降等症状，若肿瘤转移至其它器官则会引起全身性病变，严重威胁患者生存[1]。研究报道，中晚期卵巢癌患者5年生存率仅为30%，探究影响卵巢癌预后相关标志物有助于及时判断患者病情进展、有效改善患者预后[9]。

CDX2与胚胎细胞分化、发育及成人细胞增殖、分化过程密切相关。结肠、宫颈部位的腹膜粘液性肿瘤组织中CDX2被证实为低表达[10]。CDX2在乳腺癌细胞中表达下调，与肿瘤细胞增殖、侵袭、迁移能力增加有关[11]。卵巢粘液性癌组织中CDX2表达水平明显降低，体外过表达CDX2诱导细胞凋亡，增强化疗敏感性[12]。本研究结果显示，癌旁正常组织、卵巢良性浆液性肿瘤组织、卵巢交界性浆液性肿瘤组织、卵巢浆液性癌组织中CDX2蛋白高表达率依次降低，与Koh等[12]研究结果相似。表明CDX2蛋白表达下降可能与卵巢浆液性肿瘤恶性程度相关。且随FIGO分期、组织学分级升高及淋巴结转移、远处转移的发生，患者癌组织中CDX2蛋白高表达率呈降低趋势，表明CDX2蛋白低表达可能通过影响肿瘤细胞生长、增殖、迁移等促进肿瘤进展，导致患者病情恶化。Ma等[13]研究表明，结直肠癌患者中CDX2阴性表达者复发率及死亡率高于CDX2阳性表达者，可能作为患者预后生物标志物。本研究中，CDX2低表达患者复发率高于CDX2高表达患者、5年累积生存率低于CDX2高表达患者，与Ma等[13]研究结果一致。提示CDX2可能与卵巢浆液性肿瘤患者不良预后有关。CDX2表达下调可能通过促进Wnt/β-catenin信号通路激活，促进卵巢癌浆液性肿瘤细胞增殖和肿瘤形成[14]，导致患者复发及死亡。

SOX2在细胞增殖、干细胞分化、胚胎发育等进展中有重要调控作用。SOX2在非小细胞肺癌、结直肠癌、乳腺癌等癌症中高表达，与肿瘤干细胞形成及肿瘤细胞增殖、迁移等密切相关[3, 15-16]。Dorsett等[17]研究报道，卵巢癌组织和细胞中SOX2表达上调。本研究显示，与癌旁正常组织、卵巢良性浆液性肿瘤组织及交界性浆液性肿瘤组织相比，卵巢浆液性癌组织中SOX2蛋白高表达率最高，与Dorsett等[17]研究结果相似；且肿瘤恶性程度越高，SOX2蛋白表达水平越高，提示SOX2蛋白表达可能与肿瘤恶性进展有关。本研究还发现，FIGO分期Ⅲ-Ⅳ期、组织学分级G2-G3、淋巴结转移、远处转移患者癌组织中SOX2蛋白高表达率升高，与韩呈武等[18]在胰腺癌中研究结果相似。表明SOX2可能通过促进肿瘤干细胞生长和肿瘤细胞增殖等影响肿瘤病理分期、分级升高和淋巴结转移、远处转移等。此外，SOX2高表达患者复发率高于低表达患者、5年累积生存率低于SOX2低表达患者，表明SOX2高表达可能预示卵巢浆液性肿瘤的恶性程度加重，提示患者预后不良，该过程可能与SOX2调控PI3K/AKT通路激活有关[19]。

由于CDX2与SOX2在结直肠癌中被证实存在调控关系[6]。本研究分析发现，卵巢浆液性癌组织中CDX2与SOX2蛋白表达呈负相关，表明卵巢浆液性癌进展中CDX2与SOX2表达间也可能存在一定相关性，但具体机制还需进一步探究。此外，本研究经Cox回归分析，CDX2低表达、SOX2高表达是影响卵巢浆液性癌患者不良预后发生的独立危险因素，进一步提示CDX2低表达、SOX2高表达与患者不良预后密切相关。

综上所述，卵巢浆液性癌组织中CDX2蛋白低表达、SOX2蛋白高表达，二者可能在肿瘤进展中存在相互作用；并与患者FIGO分期、组织学分级升高及复发、死亡等预后不良发生密切相关。但由于本研究纳入样本较少，也仅从表达、临床特征等方面分析了与患者预后关系，机制方面还需深入研究。