食管鳞癌细胞白细胞介素33表达与化疗药物敏感性的相关性分析

王静珠

（郑州市第七人民医院 检验科，河南 郑州 450000）

食管鳞癌为临床常见的一种食管癌类型，其发病原因可能与遗传、环境、饮食等存在一定关联，发病后患者常伴有吞咽困难、胸骨后疼痛症状［1］。目前，手术是临床治疗食管鳞癌的主要手段，但大部分患者需采用化疗辅助治疗，以延长生存期。但临床发现，大部分肿瘤化疗效果仍不理想，尤其是实体肿瘤，其原因主要为肿瘤内存在多种耐药基因，使化疗药物敏感性降低，降低化疗效果。故对化疗药物敏感性的研究逐渐受到临床关注。白介素33（IL-33）为近年来临床新发现的一种细胞因子，属于促炎症细胞因子，能够与白介素1（IL-1）受体蛋白结合激活核转录因子以及促分裂元活化蛋白激酶，参与机体免疫调节、炎症反应等多种生理过程［2］。相关研究显示，IL-33还可能与肿瘤化疗药物的敏感性存在一定关联［3］。鉴于此，本研究旨在分析食管鳞癌细胞IL-33 表达与化疗药物敏感性的相关性，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择2017 年3 月至2019 年12 月在郑州市第七人民医院接受手术治疗的食管鳞癌患者80 例作为研究对象，其中男43 例，女37 例；年龄42～64岁，平均（50.12±6.41）岁；TNM 分期：Ⅱ期31例，Ⅲ期25 例，Ⅳ期24 例；化疗方案：30 例接受氟尿嘧啶+顺铂（5FU+DDP）治疗，26 例接受紫杉醇+顺铂治疗，24 例接受多西他赛+5FU 治疗。本研究经院医学伦理委员会批准。

1.2 入选标准

纳入标准：①无其他恶性肿瘤者；②预计生存时间＞6 个月；③临床资料与影像学资料完整者；④配合度理想者；⑤自愿签署知情同意书者。排除标准：①妊娠期或哺乳期女性；②凝血功能障碍者；③过敏体质者；④合并肝、肾等器官功能衰竭者；⑤伴有精神疾病或智力障碍者。

1.3 方法

检测化疗药物敏感性：使用湖州海创生物科技有限公司生产的ATP 肿瘤化疗敏感性检测试剂盒检测食管鳞癌细胞对化疗药物的敏感性。主要操作方法：将手术切除所有患者的新鲜肿瘤组织作为标本置入带有Hanks 液的无菌冻存管内，使用灭菌PBS 冲洗标本，随后将标本剪成糊状，使用200 目铜网进行研磨过滤，结束后以300 r/min速度，离心10 min，去除上层清液使用Hanks 液进行二次漂洗，采用台盼蓝染色法进行活细胞计数。把化疗药物加入96 孔培养板，所用药物与100%药物测试浓度（TDC）设定参照药物在体内的 血 浆 浓 度： 5FU 为 25.0 μg/mL、DDP 为3.8 μg/mL、多 西 他 赛 为3.7 μg/mL、紫 杉 醇 为3.6 μg/mL，联合使用药物治疗的各药物浓度与单药浓度一样。各药物均设5 个TDC，分别为200.0%、100.0%、50.0%、25.0%、12.5%，每个TDC 有2 个平行孔，同时设2 排（8 个孔）作为对照，其中一排不加药物作为对照，另一排为空白对照，仅添加200 μL 培养液，无培养细胞；放在温度为37oC、5%CO2环境下培养5 d，加入50 μL荧光素在每个孔中，并依据试剂盒说明书测量荧光值。

化疗药物敏感性检测结果均依据测定的荧光值计算，指标为化疗敏感指数（CSI）、IC90、IC50。CSI 为500 减去每个TDC 的抑制率相加之和，CSI 数值越小，表示此化疗药物对肿瘤细胞抑制率越高；IL90：抑制90%肿瘤细胞生长的TDC；IC50：抑制50%肿瘤细胞生长的TDC。敏感性判断标准：依据化疗药物TDC、CSI、IC90、IC50 进行判断，敏感：IC50≤25%TDC，耐药：IC90＞100%TDC，IC50＞25%TDC，CSI＞300。

以手术方式获取所有患者的肿瘤组织，采用石蜡标本进行连续切片，切片厚度为4 μm，采用Axio Scan.Z1 全自动数字玻片扫描系统对切片进行扫描，结果则以细胞核内棕褐色染色作为IL-33 的阳性表达。于400 倍显微镜视野下，选择5 个随机区域在确保每个视野内有＞200 细胞时对切片进行分析，对切片进行统计并计算得分。采用200倍显微镜进行观察，对切片进行评分。①将染色颜色不显色记0 分，淡黄色记1 分，棕黄色记2 分；②对阳性细胞计数进行计算，数量＜5% 记0 分，数量为5%～25%记1 分；数量25%～50%记2 分，数量为50%～75% 记3 分，数量＞75% 则记4 分。将两项结果得分相乘，结果分数0 或1 的为阴性，分数≥4 分则为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 23.0 统计分析软件。全部计量资料均经正态性检验，符合正态分布以均数±标准差（）表示，组间比较采用独立样本t检验；采用多因素Logistic 回归分析IL-33 表达对化疗药物敏感性的影响；绘制受试者工作曲线（ROC），得到曲线下面积（AUC），分析IL-33 表达在化疗药物敏感性中预测价值：AUC＜0.5 无价值，0.5～0.7诊断价值较低，0.7～0.9 诊断价值中等，＞0.9 诊断价值高。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 敏感性检测结果

本研究80 例患者对化疗药物敏感28 例，占比为35.00% （28/80）；耐药52 例，占比为65.00%（52/80）。

2.2 敏感组与耐药组IL-33 阳性检出率比较

敏感组IL-33 阳性检出率低于耐药组，差异有统计学意义（χ2=20.479,P=0.000）。见表1。

表1 敏感组与耐药组IL-33 阳性检出率比较

2.3 食管鳞癌细胞IL-33 表达对化疗药物敏感性影响的回归分析

经Logistic 回归分析结果显示，IL-33 阳性检出率可能是影响化疗药物敏感性的影响因素。见表2。

表2 食管鳞癌细胞IL-33 表达对化疗药物敏感性影响的回归分析

2.4 食管鳞癌细胞IL-33 阳性表达在化疗药物敏感性中的预测价值

将化疗药物是否敏感作为状态变量（0=敏感，1=耐药），将IL-33 阳性表达作为检验变量，绘制ROC 曲线（见图1），结果显示，IL-33 阳性表达与化疗药物敏感性为耐药的AUC 为0.765，具有一定预测价值，具体参数见表3。

图1 IL-33 阳性表达的ROC 曲线

表3 食管鳞癌细胞IL-33 阳性表达在化疗药物敏感性中的预测价值

3 讨论

食管鳞癌在临床中具有较高的发病率，属于消化道恶性肿瘤，约占食管癌发病率的90%。由于该疾病发病初期多无明显临床症状，导致大部分患者在确诊时病情已发展至中晚期，错过最佳治疗时机［4-5］。化疗是临床治疗食管鳞癌常用辅助手段，可有效延长患者生存期［6］。但采用化疗治疗的临床效果与患者对化疗药物的敏感性具有一定关联。

IL-33 作为一种细胞因子，在正常人体内呈低表达，但当机体在疾病状态下会快速释放，增加机体炎症反应，进一步加重病情［7］。相关研究指出，IL-33 在恶性肿瘤发生与发展中起到重要作用，如胃癌、乳腺癌、肝癌等，且认为IL-33 表达对化疗药物敏感性可能具有一定影响［8］。免疫、细胞因子以及炎性细胞等均为适合肿瘤生存的微环境，而IL-33 属于其中的细胞因子，参与机体的免疫调节及炎症反应，故当食管鳞癌细胞中IL-33呈阳性呈高表达时，不仅扰乱机体免疫调节功能，且加重机体炎症反应，为肿瘤生长提供良好的环境，导致肿瘤对化疗药物产生耐药性，降低临床抗肿瘤效果［9-10］。本研究结果显示，敏感组IL-33阳性检出率低于耐药组，提示食管鳞癌细胞IL-33在敏感性患者中呈高表达。进一步经Logistic 回归分析结果显示，IL-33 阳性高表达可能是影响化疗药物敏感性的影响因素。提示IL-33 高表达可能参与化疗药物敏感性降低过程。且进一步经ROC 曲线发现，IL-33 阳性表达预测化疗药物敏感性为耐药的AUC 为0.765，提示IL-33 阳性表达在临床食管癌患者化疗敏感性的预测中具有较高应用价值。

综上所述，IL-33 在食管鳞癌化疗药物耐药患者中呈高表达，可能是诱发化疗药物敏感性降低的影响因素，临床可考虑通过检测IL-33 表达情况，以评估化疗药物敏感性。