参芍养胃膏制备工艺优选及初步药效学研究

2021-03-06陈雪婷徐文杰李洁环冯健英

广东药科大学学报 2021年1期

陈雪婷，徐文杰，李洁环，冯健英

（广东省第二中医院/广东省中医药工程技术研究院，广东广州510095）

功能性消化不良是由胃、十二指肠功能紊乱引起的一系列功能性胃病，以食欲不振、腹部胀痛、大便异常等为主要表现，临床上主要使用促胃肠动力药如甲氧氯普胺、多潘立酮、莫沙必利等进行治疗，由于目前功能性消化不良的病因与发病机制尚未完全阐明，以上药物治愈后易反复发作。参芍养胃方是由党参、白芍、茯苓等18味药材组成，具有益气健脾、消食滞、和气血的功效。该处方来源于广东省第二中医院的临床验方，主治脾胃虚弱证，症见疲劳乏力、食欲不振、胃脘腹部饱胀不适、大便不成形或便秘、舌淡、脉弱，尤其适用于老年虚弱人群。初步的临床数据显示，该方有效率达92.56%，具有良好的治疗效果及群众口碑。考虑功效及沿用临床长期的服用方式，本研究拟将其制备为煎膏剂，煎膏剂以滋补作用为主，同时兼有缓和的治疗作用，药性滋润，多用于慢性疾病的治疗，更是具有药物浓度大、体积小、易保存、服用方便等优势，通过对制备工艺参数的优化，并对该方的药理作用进行初步评价，为将参芍养胃膏开发为医疗机构制剂及中药6类新药奠定坚实的基础。

1 仪器与材料

1.1 仪器

Waters 2695型高效液相色谱仪，Xbridge C18（250 mm×4.6 mm，5μm）色谱柱；Mettler-Toledo XS205DU电子分析天平（梅特勒-托利多国际贸易有限公司）；JJ3000动物电子秤（常熟市双杰测试仪器厂）。

1.2 药品与试剂

党参、白芍、茯苓等饮片均购自广东省康美药业有限公司，经广东省中医药工程技术研究院李智勇主任中药师鉴定，均符合《中国药典》2020年版一部药材项下有关规定；芍药苷对照品（批号：110736-201741）购于中国药品生物制品检定所；参芍养胃膏为广东省第二中医院制剂室自制（每毫升煎膏相当于5.75 g饮片，1日1次，1次20 mL）；枸橼酸莫沙必利分散片（成都康弘药业集团股份有限公司，5 mg/片，1次1片，1日3次，批号9H009）；乙腈为色谱纯试剂（默克），水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

1.3 动物

SPF级SD大鼠，雌雄各半，体质量180～220 g，购于广东省医学实验动物中心，生产许可证号：SCXK（粤）2013-0002。

2 制备工艺

2.1 提取工艺

采用正交试验法，以君药芍药苷的质量浓度和固形物质量为评价指标，对煎煮次数、煎煮时间、加水量进行优选。因素水平设计见表1。

2.1.1 正交试验样品溶液的制备

按处方比列，称取党参、茯苓、白术等17味饮片9份，每份230 g，按表2正交试验安排的方法提取，滤过，减压浓缩并定容至250 mL。

2.1.2 芍药苷质量浓度的测定方法[1]

2.1.2.1 色谱条件色谱柱：Kcromacil C18（4.6 mm×250 mm，5μm）；流动相：乙腈⁃0.04%磷酸溶液（体积比14∶86）；柱温：25℃；流速：1 mL/min；检测波长：230 nm。

2.1.2.2 对照品溶液的制备精密称取芍药苷对照品（批号：110736⁃201741）10.49 mg，至25 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得每1 mL含419.6μg的芍药苷对照品溶液。

2.1.2.3 供试品溶液的制备按处方比列，称取党参、白芍、鸡内金等17味饮片230 g，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩并定容250 mL，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.1.2.4 阴性样品溶液的制备按处方比例，称取除白芍外的饮片，加10倍量水，煎煮2次，每次1.5 h，滤过，合并滤液，浓缩并定容至250 mL，摇匀，滤过，取续滤液即得。

2.1.2.5 专属性考察分别吸取对照品、供试品及阴性对照溶液，注入液相色谱仪，记录色谱图，见图1。结果显示，阴性对照图谱与对照品、供试品图谱中芍药苷相应的保留时间无其他峰干扰，表明专属性良好。

图1 芍药苷质量浓度测定的HPLC图谱Figure 1 HPLC chromatograms of paeoniflorin

2.1.3 固形物质量的测定

精密吸取各样品浓缩液25 mL至已恒重的蒸发皿中，水浴蒸干，照干燥失重测定法（《中国药典》2020年版四部0831）测定，计算固形物质量。

2.1.4 结果分析

由直观分析可知，影响提取效果的因素顺序为煎煮次数＞煎煮时间＞加水倍量，得出的最佳工艺组合为A3B3C3，因煎煮次数水平之间差异不显著，考虑到节能降耗问题，最终优选的工艺为A2B3C1，即提取2次，加水量为6倍，每次提取1 h，结果见表2、表3。

2.1.5 验证试验

按处方比例，称取饮片3份，每份230 g，按照优化工艺提取，测定芍药苷总质量分数和固形物质量，综合评分值分别为90.12、93.26、93.59，表明正交试验优选的工艺条件合理、稳定可行。

表2 正交试验设计及结果Table 2 Orthogonal design and results

表3 方差分析结果表Table 3 Analysis of variance results

2.2 浓缩工艺

采用减压浓缩（置旋转蒸发仪中减压浓缩，压力约为-0.08 mPa），平行3次试验，结果表明浓缩液减压浓缩至相对密度约为1.15（60℃）时，稠膏流动性减弱，已较难从收集器中倾倒出，此时芍药苷的平均保留率为90.34%；因此，本试验以浓缩至相对密度约为1.15～1.16为终点。

2.3 成型工艺[2-6]

为了增强滋补调理的功效及改善口感，本制剂选择麦芽糖作为赋形剂。按处方比例称取饮片4份，照前述优选的提取方法提取，滤过，滤液分别置旋转蒸发仪中减压浓缩，浓缩至相对密度为1.15～1.16（60℃）的稠膏，称取处方量阿胶及麦芽糖（20、30、40、50 g）加入稠膏中，分别加热使溶化，混匀，常压浓缩至玻璃棒趁热取样挑起，出现“挂旗现象”，调整体积至200 mL，测定相对密度1，放冷，照《中国药典》2020年版四部通则0601“相对密度测定法”测定相对密度2，并观察煎膏性状、品尝口感，结果见表4。

表4 赋形剂用量考察结果Table 4 Results of excipient dosage

可见，当麦芽糖的加入量为制成量的20%时，煎膏呈黑褐色稠厚的半流体，流动性及甜度均适中，故确定麦芽糖的用量为制成量的20%，同时常压浓缩至相对密度约为1.35（60℃）时，煎膏外观及相对密度均较为适宜，故确定收膏至相对密度1.33～1.37（60℃）。

3 参芍养胃膏对功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响[7-11]

3.1 动物分组及给药方法

20只SPF级大鼠，适应性喂养1周，随机分为4组，每组5只，分别为空白组、模型组、莫沙必利组、参芍养胃膏组，除空白组外，采用夹尾刺激+不规则喂养复合法复制功能性消化不良大鼠模型。造模4周后开始给药，莫沙必利组1.35 mg/kg，参芍养胃膏组10.35 g/kg，每次2 mL，空白组、模型组给予同体积生理盐水，每日1次，连续给药14 d。

3.2 胃残留率及肠推进率的测定

末次给药后，禁食不禁水24 h后，每只大鼠灌胃给予半固体营养糊2 mL，30 min后处死动物，打开腹腔，结扎贲门和幽门，取胃，用滤纸拭干后称全重，沿胃大湾剪开胃体，洗去内容物后滤纸拭干称胃净重，计算胃残留率（%）=（胃全重-胃净重）/半固体营养糊质量；剪取幽门至回盲部肠管，测定小肠全长及墨汁在肠内推进长度，小肠推进率（100%）=墨汁推进长度/小肠全长。

3.3 统计学方法

3.4 结果

从表5可见，与空白组比较，模型组大鼠胃排空率、小肠推进率明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05），说明造模成功；与模型组比较，莫沙必利组、参芍养胃膏组大鼠胃排空率及小肠推进率均明显升高，差异具有统计学意义（P＜0.05）；与空白组比较，参芍养胃膏组小肠推进率差异不具统计学意义。

4 讨论

功能性消化不良（functional dyspepsia，FD）是临床常见的功能性胃肠疾病，目前发病机制尚未完全阐明，可能与胃肠动力障碍、内脏高敏感性、胃肠道内环境及社会心理因素均有关[12]。参芍养胃膏由18味中药组成，党参甘温扶脾养胃、补中益气，白芍酸甘以养营阴、缓急止痛共为君药，全方兼顾健脾、消食、和胃、补血、改善睡眠质量等诸多方面功效，煎膏剂作为温补的良好剂型，病人顺应性高，多年的临床应用说明该方疗效明确。

芍药苷是君药白芍的主要有效成分，现代药理研究也显示，芍药苷具有抗肿瘤、抗氧化、抗抑郁、免疫调节及补血等多方面的功效[13]，故本试验选取芍药苷含量作为优选制备工艺的考察指标，全方采用水提取，正交试验优选结果为提取2次，加水量为6倍，每次提取1 h，再通过控制常压、减压浓缩的相对密度，保证参芍养胃膏的成品质量。通过观察参芍养胃膏对功能性消化不良大鼠胃肠动力的影响，初步证实该方对胃排空率及小肠推进率有一定的升高作用，但由于功能性消化不良的病因复杂，单一的动物模型具有一定的局限性，后续将尝试更多的动物模型对参芍养胃膏的药理作用进行更全面的研究。

表5 大鼠胃排空率与小肠推进率结果Table 5 Results of gastric emptying rate and intestinal propul⁃sion rate in rats（±s，n=5）