E-cad、Snail在垂体腺瘤组织中的表达及其意义

代红伟 杨 扬 李 惺

垂体腺瘤是颅内常见的良性肿瘤，具有较高的发生率，约占颅内肿瘤的12%[1]。E-钙黏蛋白(E-cad)是1种同亲型结合、Ca2+依赖的细胞黏着糖蛋白，E-cad已被证实在肝癌、乳腺癌等恶性肿瘤中表达降低[2]。而Snail蛋白则具有抑制E-cad表达，从而增强肿瘤细胞侵袭能力的作用。本研究主要采用免疫组化方法检测垂体腺瘤中E-cad、Snail蛋白的表达水平，具体内容如下。

1 材料与方法

1.1 临床资料

选取2013月7月至2014年7月于我院行垂体腺瘤切除术患者60例(经蝶手术34例，经开颅手术26例)作为实验组，其中男性31例、女性29例，年龄25～64岁，平均年龄(35.21±2.63)岁。另选癌旁正常组织60例作为对照组，其中男性32例、女性28例，年龄25～64岁，平均年龄(35.41±2.82)岁。该研究已经我院医学伦理委员会审核通过。

纳入标准： 患者均符合《外科学》(第8版)垂体腺瘤诊断标准[3]；垂体腺瘤为单一分泌类型者；年龄在25～65岁；了解本研究并自愿签署知情同意书。

排除标准：垂体腺瘤卒中或囊变者；垂体腺瘤为混合型分泌者；凝血功能严重障碍者；心、肝、肾等重要器官严重障碍者；对研究及随访不能配合者。

1.2 方法

主要试剂： 鼠抗人E-cad单克隆抗体购自北京中衫生物工程公司；兔来源Snail抗体购自北京博奥森生物技术有限公司；二抗试剂:二步法兔/鼠通用免疫组化试剂盒，抗体使用前按说明进行稀释。

病理切片染色： 使用石蜡对病理组织进行包埋，4 μm后连续切片，将切片置于60 ℃的烤箱中30 min，再使用二甲苯脱蜡；将切片放进4 ℃经冷藏后的枸橼酸盐缓冲液中，微波修复后自然冷却；滴入一抗，孵育6 h；滴入二抗，孵育30～60 min；滴加新配的DAB显色剂在切片上，显色越2 min后用自来水冲洗；苏木精复染3 min，脱水后用中性树胶封片；用PBS代替一抗作阴性对照，用已知垂体腺瘤切片作阳性对照。

资料收集：收集所有患者术前临床病理资料，包括年龄、性别、肿瘤大小、KNOSP分期及复发情况，通过门诊复查和电话等方式随访患者术后5年生存情况。

1.3 观察指标

对比两组受试者组织中E-cad、Snail蛋白阳性表达率；分析E-cad、Snail蛋白表达与垂体腺瘤临床病理特征的关系；分析E-cad、Snail表达水平与垂体腺瘤患者存活时间的关系。

1.4 统计学方法

应用SPSS 22.0进行研究资料分析。观测资料中主要为计数资料以例数及率描述。组间比较为卡方检验或校正卡方检验(统计量为χ2)，相关分析为Spearman相关检验。 生存等时间队列资料建立Kaplan-Meier乘积限生存曲线模型，组间生存率比较为Logrank检验。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 两组受试者组织中E-cad、Snail蛋白阳性表达对比

实验组患者组织中E-cad阳性表达率为18.33%，对照组受试者组织中E-cad阳性表达率为86.67%，实验组患者组织中E-cad阳性表达率显著低于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。实验组患者组织中Snail蛋白阳性表达率为51.67%，对照组受试者Snail蛋白阳性表达率为8.33%，实验组患者组织中Snail阳性表达率显著高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)，见表1。

表1 两组受试者组织中E-cad、Snail蛋白阳性表达对比(例，%)

2.2 实验组E-cad、Snail蛋白表达的相关性

由Spearman相关性分析结果显示，E-cad与Snail蛋白表达水平呈负相关(γ=-0.425，P=0.000)。见图1。

图1 E-cad、Snail蛋白阳性表达的相关数据散点图

2.3 E-cad、Snail蛋白表达与垂体腺瘤临床病理特征的关系

在60例垂体腺瘤患者中，E-cad与Snail蛋白表达均与年龄、性别及肿瘤直径无相关性(P>0.05)。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者E-cad阳性率显著高于Ⅲ、Ⅳ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。有复发患者E-cad阳性率显著低于无复发患者，差异有统计学意义(P<0.05)。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者Snail蛋白阳性率显著低于Ⅲ、Ⅳ期患者,差异有统计学意义(P<0.05)。有复发患者E-cad阳性率显著高于无复发患者，差异有统计学意义(P<0.05)，见表2。

表2 E-cad、Snail蛋白表达与垂体腺瘤临床病理特征的关系/例

2.4 E-cad、Snail表达水平与垂体腺瘤患者存活时间的关系

由Kaplan-Meier生存分析结果显示，E-cad阳性和阴性患者5年内生存率分别为86.15%和49.01%，差异有统计学意义(Log-Rank：χ2=21.631，P<0.001)。Snail蛋白阳性和阴性患者5年内生存率分别为40.67%和83.36%，差异有统计学意义(Log-Rank：χ2=19.154，P<0.001)，见图2。

图2 E-cad和Snail蛋白表达与垂体腺瘤患者总生存率的关系

3 讨论

垂体腺瘤是发病率较高的颅内肿瘤之一，好发年龄为20～35岁[4]。该病主要表现为垂体激素异常分泌导致代谢紊乱和器官损害，肿瘤压迫垂体导致应周围靶腺体的萎缩，肿瘤压迫视神经等导致视力降低等，严重影响患者的生活质量[5]。垂体腺瘤可分为非侵袭性和侵袭性垂体腺瘤，以及垂体腺癌[6]。其中，非侵袭性垂体腺瘤病灶体积小，无典型表现，临床隐匿性较强，因此早期较难发现[7]。侵袭性垂体腺瘤能够入侵周围的硬膜、骨质、海绵窦等结构。侵袭性垂体腺瘤具有增殖能力强，侵袭能力强，术后复发率高，治愈率低等特点[8]。有文献指出，侵袭性垂体腺瘤即使通过手术做到镜下全切，其复发率仍高达20%[9]。因此，早期诊断出垂体腺瘤并进行有效的治疗，有利于患者的生命安全。本研究主要采用免疫组化方法检测垂体腺瘤中E-cad、Snail蛋白的表达水平，探讨这两者在垂体腺瘤病情诊断及预后评估的临床价值。

有研究报道证实，在侵袭性垂体腺瘤中发现E-cad表达水平降低，E-cad低表达可能作为垂体腺瘤患者预后的评估指标[10]。同时，也有研究指出，在肿瘤恶性进展中，随着肿瘤恶化程度的加重，E-cad表达水平降低，而E-cad的表达异常则会造成细胞连接出现障碍，起到肿瘤细胞浸润、转移的作用，这将促进肿瘤的发生及进展[11]。上皮细胞-间充质转化(EMT)，是指上皮细胞通过特定程序转化为具有间质表型细胞的生物学过程。ETM在肿瘤细胞转移中具有重要作用，E-cad表达减少是其主要特征之一。E-cad广泛存在与表皮组织中，是一种细胞跨膜糖蛋白，也是调节细胞黏附反应的重要因子，E-cad在维持组织细胞正常分化、增殖中起着重要作用[12]。当E-cad表达降低时组织内细胞黏附强度下降，导致细胞活动能力增加，这增强了肿瘤细胞的侵袭能力[13]。有研究显示，在恶性肿瘤中，Snail蛋白高表达，E-cad低表达，发生EMT而促进了肿瘤细胞的侵袭和转移[14]。Snail蛋白是间质细胞表达的标志物，也可调控EMT，主要机制是抑制E-cad的表达在促进EMT进程，增强肿瘤细胞的侵袭能力[15]。本研究结果表明，实验组E-cad阳性表达率显著低于对照组，Snail阳性表达率显著高于对照组。垂体腺瘤中E-cad低表达，Snail蛋白高表达，这与上述言论具有一致性，提示E-cad、Snail蛋白可能作为垂体腺瘤诊断的指标。KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者E-cad的阳性率显著高于Ⅲ、Ⅳ期患者,有复发患者E-cad的阳性率显著低于无复发患者，KNOSP分期Ⅰ、Ⅱ期患者Snail蛋白的阳性率显著低于Ⅲ、Ⅳ期患者,有复发患者E-cad的阳性率显著高于无复发患者，这提示E-cad、Snail蛋白与垂体腺瘤的发生、发展具有相关性，原因在于E-cad、Snail均可调控EMT，对于肿瘤的进展有密切联系。由Kaplan-Meier生存分析结果显示，E-cad阳性患者5年内平均存活时间显著高于阴性患者，Snail阳性患者5年内平均存活时间显著低于阴性患者，提示E-cad、Snail蛋白均是可影响患者生存的危险因素，对于患者预后具有重要的评估作用。

综上所述，垂体腺瘤中E-cad阳性表达率较低，Snail蛋白阳性表达率较高，两者在垂体腺瘤的发生、进展中表达异常，E-cad阴性、Snail蛋白阳性时垂体腺瘤病理分期更高、更易发生复发，且与患者存活时间相关，E-cad与Snail蛋白可能垂体腺瘤病情诊断及预后评估的指标。