鸭源新城疫病毒的分离与鉴定

赵忠平

（甘肃省定西市漳县畜牧兽医服务中心石川镇畜牧兽医站，甘肃 定西 748300）

新城疫病毒为副粘病毒科腮腺炎病毒属成员，病毒核酸为单股、负链、不分节段的RNA，新城疫病毒可以感染各种年龄的鸡、鸭、鹅等家禽，新城疫病毒感染后根据临床表现可以分为最急性型、急性型和慢性型。2019 年4 月，某养鸭场出现疑似感染新城疫病毒情况，通过对病死鸭剖检和实验室诊断确定疫情并成功分离鉴定到新城疫病毒，下面介绍如下。

1 发病情况

发病鸭精神沉郁，采食量下降，排稀便，水样，暗红色或绿色，病鸭呈张口呼吸，有甩头动作，出现咳嗽等呼吸道症状，发病鸭发病后3d 死亡。曾在饲料中添加青霉素等抗生素进行治疗，无效果。

2 病理剖检

取病死鸭剖检可见消化道出血，盲肠扁桃体出血，肝脏出血，气管内有粘稠分泌物，取病死鸭的肝脏、胰腺等组织病料送实验室诊断。

3 实验室诊断

3.1 PCR 检测

取病死鸭的送检组织病料研磨处理，按照1:3 的比例加入灭菌生理盐水，研磨器研磨成组织匀浆，12000r/min 离心15min，小心吸取上清液。提取上清液病毒基因组RNA，按照参考文献[2]进行鸭源新城疫病毒、鸭瘟病毒和鸭圆环病毒三重PCR 检测，PCR 扩增产物跑核酸电泳，根据扩增片段大小进行结果判定。PCR 核酸电泳显示扩增片段为823 bp 左右，与新城疫病毒的预期扩增片段大小一致，说明发病鸭经PCR为鸭源新城疫病毒阳性。

3.2 鸡胚接种

将上面研磨处理的病毒上清液用0.45μm 滤器过滤除菌，接种10 日龄SPF 鸡胚，观察鸡胚接种后的发病死亡情况。鸡胚在接种后48～72h 全部死亡，胚体出血，剖检胚体可见肝脏出血严重，头部及肾脏都有明显出血，收集死亡鸡胚尿囊液，连续接种两代10 日龄SPF 鸡胚，收集尿囊液作进一步鉴定。

3.3 血凝试验

收集的第三代鸡胚尿囊液对1%鸡胚红细胞的血凝效价达9log2，且该血凝特性可以被NDV 阳性血清所抑制，初步鉴定分离毒为鸭源新城疫病毒。

3.4 毒价测定

将收集的第三代鸡胚尿囊液做10 倍系列稀释，取10-5、10-6、10-7三个稀释度接种10 日龄SPF 鸡胚，每个稀释度接种5 枚10 日龄SPF 鸡胚，每天照蛋观察鸡胚的死亡情况，120h 后收集尿囊液做血凝试验，血凝效价在7log2 及以上判定为感染，计算分离毒的EID50。结果显示，10-5稀释度感染鸡胚5 枚，10-6稀释度感染鸡胚3 枚，10-7稀释度感染鸡胚3枚，根据Reed-Muench 方法计算分离毒的鸡胚半数感染量为10-5.78/0.1mL。

4 防控措施

发生疫情后，对发病鸭及时隔离饲养，未发病鸭群及时接种新城疫疫苗，鸭舍严格消毒，内外环境都要消毒处理，经过积极防控，发病鸭一部分死亡，一部分康复，没有出现新发病例，疫情得到有效控制。

5 讨 论

鸭源新城疫是一种高度接触性病毒性传染病，虽然新城疫病毒主要感染鸡，鸭也可感染。根据发病家禽的临床表现可以做出初步诊断，确诊需要借助实验室检测方法，当前新城疫的实验室检测方法主要包括病毒分离鉴定、分子生物学和血清学检测方法，病毒分离鉴定是病毒判定最可靠的方法，分子生物学主要包括PCR 方法和荧光定量PCR 检测方法，血清学检测方法包括酶联免疫吸附试验（ELISA）和胶体金试纸条检测方法，临床可采用分子生物学方法进行早期诊断，通过血清学检测方法进行鸡群的血清流行病学调查。