宫颈炎症感染不同微生物检验方法的效果及其诊断价值

陈旭璇，吴金，蔡晓如，冯萍香，许秀锋

（广东省普宁华侨医院妇产二区，广东 普宁 515300）

0 引言

宫颈炎是女性常见的下生殖道炎症，在正常情况下，宫颈有多种防御功能，包括黏膜免疫、体液免疫和细胞免疫，这是防止病原体进入上生殖道的重要防线[1]。然而，宫颈也容易受到性交、分娩和宫腔手术造成的损伤，宫颈管为柱状上皮，抗感染能力差，易感染[2]。宫颈炎是指子宫颈的炎症，炎症主要影响子宫颈腺体的柱状上皮细胞和鳞状上皮细胞。宫颈炎由于传染性或非传染性病因，分为急性和慢性，急性宫颈炎通常是感染（衣原体，淋球菌）的结果，而慢性宫颈炎具有非感染性来源。宫颈癌在病因学上与高致癌风险人乳头瘤病毒（Human papillomavirus，HPV）感染有关，这种肿瘤具有转移到远处组织和器官的能力，这一事实与宫颈癌治疗失败密切相关。本研究分析探讨宫颈炎症感染不同微生物检验方法的效果及其诊断价值。

1 一般资料

1.1 基本资料

2020 年7 月至2020 年11 月，选80 例宫颈炎症感染患者，18-68 岁，均值（37.56±6.82）岁，签知情同意书，伦理批准，纳入：符合宫颈炎症感的诊断，配合研究。入组标准：所有女性均年龄≥18 岁；前一个月没有接受抗生素治疗或接受过妇科干预；目前没有月经或怀孕；没有宫内避孕器具。排除标准：患有盆腔炎的妇女；处女或怀孕妇女；语言表达障碍患者；严重精神疾病患者。

1.2 研究方法

①标本采集，准备和处理

研究参与者使用结构化问卷进行访谈，以收集社会人口和生殖健康信息。然后收集子宫颈刮片检查和阴道拭子样本，窥镜用于检查外生殖器，阴道和子宫颈是否有任何病变或炎症。使用基于液体的细胞学获得。取样后无菌棉签放到防腐剂小瓶中，涂片染色。在样品采集后4-6 小时内进行载玻片制备和染色。通过巴氏染色技术处理和涂抹子宫颈刮片检查标本，使用宫颈上皮内瘤变报告系统检测念珠菌感染，放线菌和宫颈癌前病变。处理阴道拭子进行湿支架和革兰氏染色检查，以诊断宫颈微生物感染，阴道滴虫感染通过显微镜观察潮湿毛滴中的运动毛滴虫，革兰氏阴性双球菌表示淋病感染和假菌丝或菌丝或酵母芽的存在表示革兰氏染色中的白色念珠菌感染。

②宫颈炎细胞病理学检测

使用X40 物镜，核仁和染色质模式是不同的。炎症过程被分类为急性（＞ 70%的炎症细胞是中性粒细胞）、亚急性或慢性活动（50-70%的炎性细胞是嗜中性粒细胞和30-50%的巨噬细胞）和慢性（＞ 50%的炎症细胞是巨噬细胞）。

③免疫细胞化学染色

液基细胞学(liquid-based cytology，LBC)载玻片用于通过免疫细胞化学分析确定基质金属蛋白酶-9（matrix met alloprotein，MMP-9 ）和RECK 的表达。

④实时定量PCR 技术

使用TRizol 试剂（Invitrogen）从来自对照组和宫颈炎组中的女性宫颈样品中提取总RNA。合成cDNA。使用针对目的基因的TaqMan 特异性引物进行实时定量PCR。使用ABI Prism 7500 序列检测系统设备，在以下条件下进行测定：在50℃下激活2 分钟，95℃下变性10 分钟，40 个循环的在95℃下15 秒以结束变性过程，最后在60℃下退火和延伸1 分钟。使用循环阈值（Ct）方法计算。

1.3 观察指标

分析各种方法病原微生物的检出率，以及检测时间。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 各种方法病原微生物的检出率

宫颈炎细胞病理学检测、免疫细胞化学染色的检出率没有显著差异（P＞0.05），实时定量PCR 技术检出率高于宫颈炎细胞病理学检测、免疫细胞化学染色（P＜0.05），见表1。

表1 各种方法病原微生物的检出率（n%)

2.2 检测时间分析

各种方法检测时间存在差异（P＜0.05），见表2。

表2 检测时间分析（ ±s）

表2 检测时间分析（ ±s）

组别 n 检测时间（h）宫颈炎细胞病理学检测 80 122.36±20.36实时定量PCR 技术 80 182.62±35.62免疫细胞化学染色 80 154.35±30.04

3 讨论

宫颈炎是指宫颈的炎症，通常包括宫颈阴道和宫颈管粘膜的炎症，它可分为急性宫颈炎和慢性宫颈炎[4]。急性宫颈炎常由特异性细菌感染的宫颈黏膜引起，临床表现可为白带增多、外阴瘙痒或下腹痛等，监测发现宫颈充血、白带多、白细胞多，需使用抗生素进行治疗[5]。慢性宫颈炎是由不完全或未经治疗的急性宫颈炎引起的，通常包括宫颈息肉、宫颈肥大、宫颈囊肿等[6]。宫颈炎症感染常见的微生物有细菌、真菌、支原体、衣原体、病毒、滴虫等。

微生物检测是对病原微生物或其抗原、代谢物、核酸等的直接检测。病原微生物检测方法：生化方法检测病原微生物的生化方法实际上是微生物特异性酶。由于各种微生物的酶系统不同，许多物质的分解能力也不一致。因此，不同底物产生的不同代谢产物可间接检测该微生物中是否存在酶，从而达到检测特定微生物的目的。病原微生物检测方法血清免疫学方法免疫学技术是一种利用特异性抗原抗体反应来观察和研究组织细胞和特异性抗原(抗体)的定性和定量技术。为了显示和观察这种抗原-抗体反应，必须事先将某种标记物绑定到抗体上，并借助标记物的荧光或着色反应、放射性或高电子密度，在光学或电子显微镜下进行定性、定位或定量研究。各种文献数据库提供的数据表明，几乎所有病原体的血清学检测方法已经建立，这表明该方法也已成为实验室常用的一种成熟的检测技术。

对于宫颈炎症感染微生物检验当前临床常用的如分离培养、PCR、生化检测技术等。分离培养: 分离培养是临床诊断病原微生物的“金标准”。分离培养技术通常需要3-5 天或更长的时间才能获得检测结果。然而，由于不同细菌的特性、生长条件的要求以及一些苛刻细菌的存在，大多数病原微生物无法通过分离培养获得阳性检测结果。根据相关数据，通过分离培养社区感染性肺炎的临床样本获得的病原微生物阳性率仅为10%，因此，该技术不适用于急性和严重感染病人的病原体诊断。生化检测: 生化检测技术通常需要建立在分离培养技术的基础上，因此生化检测技术也存在分离培养技术的局限性。此外，由同一种病原菌分泌的蛋白质或酶通常是相同的，因此只能透过这项技术得到定性的检测结果。核酸检测: 基于病原菌传染病的检测技术，解决了传染病分离培养周期长的问题，更适用于已知病原微生物的检测，但不适用于新的和未知病原体的检测。

本次研究中，宫颈炎细胞病理学检测、免疫细胞化学染色的检出率没有显著差异（P＞0.05），实时定量PCR 技术检出率高于宫颈炎细胞病理学检测、免疫细胞化学染色（P＜0.05），各种方法检测时间存在差异（P＜0.05）。说明实时定量PCR技术在临床微生物检验中存在优势，但是目前各指南中，微生物检测仍以培养法为金标准，因此检验将测序与培养结合诊断，可以增加微生物的检出率，具有较大的诊断价值。

综上所述，宫颈炎症感染微生物检验使用实时定量PCR技术的灵敏度更高，检测时间也大大缩短，需要结合培养法金标准进行分析。