蓝浆果离体叶片愈伤组织分化研究

摘 要：以南方高丛蓝浆果品种“南月”优选系离体叶片诱导出的愈伤组织为材料，开展了激素、培养基及光照强度对愈伤组织分化影响的研究。结果表明：不同激素处理对蓝浆果叶片愈伤组织分化的效果不同，其中以4mg/L的ZT诱导分化效果最好;经MWPM培养基培养的愈伤组织转绿率最高;光照强度对蓝浆果叶片愈伤组织分化具有一定的影响，强光下诱导出的愈伤组织分化率较高。

关键词：蓝浆果叶片;愈伤组织分化;激素;培养基;光照

中图分类号 Q813.1;Q949.772.3 文献标识码 A文章编号 1007-7731（2021）03-0015-02

愈伤组织在除去生长素或降低生长素浓度的培养基上即能发生器官的再分化，形成不定芽。笔者以南方高丛蓝浆果品种“南月”优选系A18愈伤组织为材料，研究激素、培养基、光照强度对蓝浆果叶片愈伤组织分化的影响，以期为建立高效的蓝浆果再生体系提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 植物材料 南方高丛蓝浆果品种“南月”优选系A18诱导出并培养30d的愈伤组织。

1.1.2 培养基 基本培养基为WPM（不同培养基处理除外），在培养基中加入蔗糖25g/L（不同蔗糖浓度处理除外）、琼脂5g/L、TDZ 0.5mg/L（不同激素处理除外），pH调至5.3。配制好的培养基经常规灭菌后备用。

1.2 方法 取培养30d的愈伤组织接种于培养基上， 每个处理接种30块愈伤组织，于温度（25±2）℃、光照1800～2000lx（不同光照处理除外）、光照时间16h/d的条件下培养。每天观察愈伤组织转化情况，60d后统计转绿率及出芽情况。

转绿率（%）=（转绿芽块数/接种芽块数）×100

1.2.1 细胞分裂素对蓝浆果愈伤组织分化的影响 激素处理设置为：ZT 4mg/L、TDZ 0.5mg/L、CPPU 2mg/L，对照（不添加任何细胞分裂素）。

1.2.2 培养基对蓝浆果愈伤组织分化的影响 取培养30d的愈伤组织接种于培养基上，培养基分别设置为WPM、MWPM、1/2WPM（大量元素减半，微量不变）、1/2MS（大量元素减半，微量不变）。

1.2.3 光照强度对愈伤组织分化的影响 光照强度处理设置为：全暗（0）、弱光（0～500lx）、正常光（1000～1500lx）、强光（2000～2500lx）。

1.3 数据处理 利用Excel2003软件对数据进行统计分析。

2 结果与分析

2.1 激素对蓝浆果愈伤组织分化的影响 将生长较好的愈伤组织接种到分化培养基上，愈伤组织继续膨大增殖，虽然增殖较慢，但20d后能够看到愈伤组织的表面有白色透明突起，标志着分化的开始。继续培养，可以得到绿色的小芽苗。由表1可知，不同激素处理对蓝浆果叶片愈伤组织分化的效果不同。4mg/L ZT和 0.5mg/L TDZ所处理的愈伤组织分化率一致，但芽点数量及质量以ZT效果较好;经2mg/L CPPU处理的愈伤组织转绿率低且大部分枯死;对照组愈伤组织分化效果居中。由此可见，4mg/L ZT诱导分化效果最好。

2.2 培养基对蓝浆果愈伤组织分化的影响 由表2可知，培养基对愈伤组织转化具有一定影响。其中，经MWPM培养的愈伤组织转绿率最高，其他几种培养基转绿率相差不大，但经不同培养基培养的愈伤组织在转绿后均呈枯萎状。

2.3 光照强度對蓝浆果愈伤组织分化的影响 由表3可知，光照强度对愈伤组织分化影响较大。全暗条件下，愈伤组织转绿率为0，愈伤呈黄褐色;弱光下，愈伤组织转绿率为36.67%，芽点量中等，色泽绿但部分呈枯萎状;正常光下，转绿率为86.67%，芽点质量与弱光下诱导出的不定芽相同;强光下，愈伤组织转绿率为90%，但芽点数量较少，色泽绿但部分呈枯萎状。由此可见，光照强度对蓝浆果叶片愈伤组织分化具有一定的影响，强光下诱导出的愈伤组织分化率较高。

3 结论与讨论

影响愈伤组织分化为不定芽的因素有很多[1-2]，如激素、培养基及光照条件、愈伤组织转接时间、愈伤组织转接方式等。低浓度的生长素和细胞分裂素配比有利于愈伤组织的分化[3-4]，若细胞分裂素在培养基中添加较少，则不能促进分化，但添加过多也会使愈伤组织变硬，失去光泽，颜色由绿变成褐色，因此选择适当的细胞分裂素浓度有利于蓝浆果愈伤组织分化出芽。本研究中选取较常用的几个诱导不定芽再生的激素进行对比，结果显示适宜浓度的ZT与TDZ较适宜诱导愈伤组织分化为不定芽。任何一种植物的组织培养中，培养基的筛选是必不可少的过程。张爱香等[5]对春石斛兰愈伤组织组织进行分化时对培养基进行了筛选，发现愈伤组织分化率最高的培养基为MS+NAA 1.2mg/L+KT1.5mg/L。本试验中，较利于愈伤组织分化的基本培养基为MW PM。光照条件是叶片愈伤组织诱导和分化的一个重要因素。通常情况下，在离体培养过程中，不同的物种、同一物种的不同外植体甚至同一外植体的不同诱导阶段对光照的反应都有可能不同。本研究中，强光照较利于愈伤组织分化，说明在进行愈伤组织分化试验时有必要进行一定的光照。

愈伤组织的质量是影响其分化的主要因素。愈伤组织块较干燥、色泽内部淡黄外表白色、结构紧实、表面有白色颗粒状凸起的愈伤组织容易分化成苗。一般在白色凸起部位先呈现绿色，最后发育成芽。表面湿润、松软的愈伤组织块不易分化出芽。颜色暗黄的愈伤组织块在光照下极易褐化，不具有分化能力。在进行转基因研究时需对愈伤组织状况进行筛选，把握好最佳愈伤组织分化时间。

参考文献

[1]SKOKUT T A，MANCHESTER J，SCtfAEFER J.Re Dmeration in Alfalfa Tissue Culture[J].Plant Physiol，1985，79（3）：579-583.

[2]Pelletier G，Pelletier A.White clover（Tri foliamrepens）tissue culture，invitro，variability of regenerated plants from callus tissue，invitro，variability of regenerated plants[J].Plant Cell，1971，21：221-233.

[3]罗源，陈耀锋，李春莲，等.马铃薯茎段愈伤组织培养体系的优化[J].西北农林科技大学学报（自然科学版），2007，35（10）：160-162.

[4]张二芹，马强，王云，等.不同品种紫花苜蓿愈伤组织及分化体系的建立[J].安徽农业科学，2012，40（29）：14172-14173.

[5]张爱香，左利兵，刘会清，等.春石斛兰愈伤组织的诱导及分化培养基的筛选[J].河北北方学院学报（自然科学版），2011，27（1）：36-37.

（责编：徐世红）

作者简介：张祝丽（1985—），女，安徽安庆人，从事园林园艺方面工作。  收稿日期：2021-01-07