实时PCR 检验在高危型人乳头瘤病毒中的诊断价值分析

唐昕

广安市人民医院检验科 四川广安 638000

人乳头病毒（HPV）是一种常见、多发疾病，根据一项调查数据显示，在已经确诊的宫颈癌患者中，大部分患者均有HPV 感染情况，此外CIN（宫颈上皮内瘤样病变）也有着HPV 感染现象，对生命造成了极大威胁[1]。HPV 种类并不是单一的，现已知的高危型HPV 种类已经达到15 种，在我国常见的高危型毒种族以16、18、58 为主。现临床检验HPV 常用法为HC Ⅱ（第二代杂交式捕获法），然而随着医疗技术不断提升，实时荧光PCR 检验技术逐渐成熟、规范，因其有着快捷简便、价格低等独特优势，所以在临床被广泛应用。本次研究中主要分析时PCR 检验在高危型人乳头瘤病毒中的诊断价值，以下为具体数据报告。

1 研究资料与方法

1.1 研究资料

选择2019年5月～2020年5月我院收治109例高危型人乳头瘤病毒患者作为本次研究对象。年龄最小者23岁，年龄最大者66岁，中位数年龄为（44.5±6.6）岁；21例为高度上皮内鳞状病变，46例为不典型鳞状细胞特征，42例为低度上皮内鳞状病变；38例年龄≤30岁、16例年龄在31～45岁间、25例年46～60岁、30例年龄≥61岁。入选患者均为已婚女性，且同意参加此次研究。

1.2 方法

取样：在进行检验之前，利用窥阴器暴露出宫颈，取棉拭子擦拭宫颈口分泌物，然后使用专用HPV 宫颈刷收集宫颈口处标本，轻轻的转动4～5 圈以取得充足上皮细胞样本，然后取出宫颈刷，将其折断之后浸泡到保存液内，做好标记。

A 组：按照每分钟13000 转的速度对标本进行处理，时间约1min，然后将50uL 裂解液放入沉淀物中，通过水浴加热10min，然后再进行离心处理，取上层清野视为PCR 模板。严格按照试剂盒内说明书实施检测。

B 组：取HPV-DNA 试剂盒、子宫颈微采样器、HC Ⅱ杂交信号扩大系统。采集检验标本之后经RNA探针实施杂交，然后将生成的杂交体与特异性抗体结合在一起，同时发出信号，经发光强度大小实施定量测定，并将含量计算出来。当HPV 负荷量＞1.0pg/ml时为阳性。

1.3 观察指标

比较实时PCR 检验法、HC Ⅱ检验法检验不同程度宫颈病变HPV 结果与HPV 阳性检出率。

1.4 统计学应用

将数据建立的EXCEL 数据库导入SPSS19.0 软件，对各种变量中的计数资料以%表示，使用X2检验，P＜0.05 认定为差异存在显著性。

2 结果

2.1 两种检验不同程度宫颈病变HPV 结果 见表1

表1 两种检验不同程度宫颈病变HPV 结果[n(%)]

2.2 两种检验方法的HPV 阳性检出率对比 见表2

表2 两种检验方法的HPV 阳性检出率对比[n(%)]

3 讨论

高危型HPV 是引起宫颈病变主要因素，在全球中宫颈癌的发病率是极高的，每年因宫颈癌死亡病例＞50万，对生命安全造成了极大威胁，影响着女性生存质量。一旦机体感染HPV 后免疫系统会发生变化，随之产生大量炎症因子与细胞因袭，机体表现出炎症反应与组织损伤，导致人体自黏膜增生发展成为恶性肿瘤，因而早诊断、早治疗意义重大[2]。随着医疗技术的提升，就HPV 基因型来说被发现的就已经达到百种，其中大约40%的基因型与生殖系统感染有着密切关系、大约20%的基因型与肿瘤有着密切关系，按照与癌疾病发生关系将HPV 分为两种，一种为低危型、一种为高危型[3]。病毒引起疾病的方式有所不同，43、11 型等低危型病毒会导致宫颈低度病变，68、58、39、18 等高危型病毒致病力极强，导致癌疾病几率极高。通过多年的研究发现，我国常见的高危病毒有HPV58、16、18。

HPV 并不能做体外培养，也就不能通过血清血检测进行诊断，HPV 的检测需依靠细胞形态学检测等技术，传统巴氏涂片为细胞学检测法，但是因感染HPV 后形态学会发生变化，所以敏感性并不高，且极易漏诊，组织学检测与细胞学检测相同，不仅检验准确率高，受检患者所承受疼痛较大，分子生物学检测技术的灵敏性较高，也可以对HPV 进行分型[4]。HPV 感染初期症状不是很显著，潜伏期时间更比较长，在早期检验诊断中分子生物学检测技术发挥了重要意义。HC Ⅱ检验法是检验HPV常用方式，检验效果较好。当医学技术不断提升之后，多种检验方法应运而生，且在多方面发挥着独特优势。PCR 检验技术有着敏感性高、特异性高的特点，在遗传学检测等多领域中均有着重要价值，特别是在普通PCR基础上发展的实时PCR 技术，在PCR 反应体系内加荧光基团之后再通过荧光信号积累对整个PCR 进程进行实时监测，荧光染料在渗入DNA 双链后，会发出荧光引号，确保荧光信号与PCR 产物处于同步增加状[5]。HC Ⅱ检验法在检验因方法学、检验系统与实时PCR 检验法有着很大不同，所以检验结果会出现偏差，而实时PCR 检验的检验结果较好，有效实现了早发现、早治疗。

在本次研究中，高危型HPV 患者年龄在23～66岁，其中38例年龄≤30岁、16例年龄在31～45岁间、25例年46～60岁、30例年龄≥61岁，由此可见高危型HPV呈U 形，30岁以下人群感染率比较高，分析其原因这个年龄段的性生活较为频繁，自我保护意识也较为缺乏，所以宫颈抵抗力比较差，31～45岁间发病利率有所降低，分析其原因为这个年龄段有着固定的性伴侣，性生活有所减少，身体机能稳定，但是在46岁后，感染率渐渐增加，且随着年龄增加感染率也随之增加，分析其原因为老年人免疫能力差、雌激素水平低，也就是说＜30岁、＞60岁人群是重点检查对象；分别采用实时PCR 检验法与HC Ⅱ检验法分别对高危型HPV 患者实施检验，通过比较检验结果发现：①在统计学方面两种检验方法的宫颈病变分级检出率并无差异P ＞0.05，而在鳞状上皮病变急慢性宫颈炎方面，实时PCR 检验法检出率较高，统计学意义差异明显P ＜0.05；②HC Ⅱ检验法的HPV阳性检出率为62.4%，实时PCR 检验法的HPV 阳性检出率为71.6%，在统计学方面有意义P ＜0.05。由此可见实时PCR检验效果较好。总结实时PCR检验的优势如下：①PCR 产物不需要进行特别处理，因此扩增产物感染几率比较小；②有效弥补了常规PCR 的不足（假阳性率高、不能定量）；③操作简单、快速[6]。实时PCR 检验是在全封闭环境中进行检验，避免了受污染现象，所以检出率较好。

总而言之，实时PCR 检验在高危型人乳头病毒检验中，检出率较高，具有推广价值。