血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体行ELISA法和化学发光法检测的对比研究

曾茜茜，宋胜伟

随着社会不断发展以及人们生活方式的改变，艾滋病、梅毒、丙型肝炎等传染性疾病发生率越来越高，主要通过母婴传播、血液传播和性传播3种途径进行传播，严重影响患者的身心健康[1-3]。早期诊断并给予治疗是控制疾病发展的有效手段，临床常见检测以上病毒的方法包括酶联免疫吸附法(ELISA)、化学发光法及胶体金免疫检测法。本文主要比较血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体行ELISA和化学发光法检测的结果，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2017年3月-2019年4月万载县人民医院住院患者986例的血液标本，其中男565例，女421例，年龄22～55(37.65±8.21)岁。

1.2 仪器和试剂 仪器：MK3酶标仪，郑州安图A2000化学发光仪；试剂：ELISA法HIV-1/HIV-2抗体试剂、梅毒抗体试剂、丙肝抗体试剂购自北京万泰生物药业有限公司、上海科华生物工程股份有限公司，化学发光法HIV-1/HIV-2抗体试剂、梅毒抗体试剂、丙肝抗体试剂均购自郑州安图股份有限公司。

1.3 方法 患者均于清晨采集静脉血3 ml，采集完成进行离心后取上清液直接检测，分别利用ELISA法和化学发光法进行检测，所有检测遵循试剂盒说明书进行。

2 结 果

2.1 ELISA法阳性检出结果 ELISA法HIV-1/HIV-2抗体阳性检出率为0.51%(5/986)，梅毒抗体阳性检出率为0.81%(8/986)，丙肝抗体阳性检出率为1.01%(10/986)。

2.2 化学发光法阳性检出结果 化学发光法HIV-1/HIV-2抗体阳性检出率为0.81%(8/986)，梅毒抗体阳性检出率为0.91%(9/986)，丙肝抗体阳性检出率为1.32%(13/986)。

2.3 ELISA法检测不都为阳性标本，化学发光法检测均为阳性 ELISA法检测结果为阳性标本在化学发光法检测中也为阳性，标准抗体品梯度稀释后化学发光法检测HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体均为阳性，ELISA法中仅梅毒抗体近阳性。见表1。

表1 ELISA法检测部分为阳性标本，化学发光法检测均为阳性

方法丙肝抗体12345678910111213化学发光法测定值6.894.597.8315.4220.9214.063.354.7612.282.8613.2116.395.73ELISA法结果--++++-++++++

3 讨 论

艾滋病、梅毒、丙型肝炎是临床常见传染病，主要通过检测血清病毒抗体确诊以采取针对性治疗措施。多数艾滋病病毒(HIV)感染为终身携带，体内HIV难以清除，患者感染HIV后机体免疫力下降，易发生感染，主要症状为长期低热、头晕头痛、慢性腹泻、体重减轻、全身淋巴结肿大等[4-5]。通过检测HIV抗体能有效帮助临床诊断患者是否感染HIV，对确诊患者及时给予干预，控制传播。梅毒主要是由梅毒螺旋体引起的全身性、慢性性传播疾病，由于感染时间不同可分为Ⅰ期、Ⅱ期、Ⅲ期梅毒[6]。Ⅰ期梅毒临床特征为硬下疳，表现为不痛不痒溃疡，形态为圆形或椭圆形且边界清晰，一般持续4～6周后自愈[7]；Ⅱ期梅毒患者表现为梅毒疹，出现时间在硬下疳消退后，主要特点为不痛不痒、广泛对称、疹型多样且反复发生，愈后多数无瘢痕残留[8]；Ⅲ期梅毒分为良性晚期梅毒和严重晚期梅毒，主要为四肢、肩胛、头皮及背部的皮肤黏膜损害、梅毒性皮下纤维结节、梅毒性心脏病、梅毒性脑膜炎等[9]。因其唯一宿主为人体，且该病毒生存温度为37 ℃不能在人体外进行繁殖，离开人体就会凋亡，如检测梅毒抗体为阳性则说明患者已感染[10]。丙型肝炎由丙型肝炎病毒引起，其潜伏期为2周～6个月，临床症状为食欲不佳、腹胀、易感疲劳等肝炎常见轻微症状，是导致肝硬化、肝功能衰竭、肝癌的主要原因，由于慢性丙肝病毒感染患者临床症状不明显甚至在感染后几十年内仍然无症状表现，易被忽视直至肝脏有严重损害表现才确诊[11]。如丙肝抗体呈阳性，则患者转阴性极低，但早期诊断并给予治疗可有效控制病情进而防止向肝硬化、肝衰竭、肝癌发展。除上述并发症以外，丙型肝炎还可增加糖尿病、肾脏病、免疫系统细胞肿瘤等发生率，早期确诊可缓解疾病症状或预防以上疾病。

ELISA法检测病毒的工作原理主要是在抗原或抗体和某种特异酶结合形成酶标抗原或抗体后仍保留抗体免疫活性，同时还体现酶的生物活性[12]。化学发光法检测原理是将免疫反应与发光系统结合检测抗体或抗原，属于发光免疫技术，临床应用广泛。本研究结果显示，化学发光法HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体阳性检出率分别为0.81%、0.91%、1.32%，高于ELISA病毒阳性检出率，且在标准抗体品梯度稀释后检测中ELISA法中只有梅毒近阳性，而以上3种病毒通过化学发光法检测仍然为阳性，提示化学发光法检测血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体其阳性检出率更高，灵敏性更高，结果更准确，有利于临床快速开展治疗。在金晶[13]的研究中也指出化学发光法检测HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体其敏感性更高，阳性检出率明显高于ELISA法。分析其原因：ELISA法检测时需分离游离态或结合态的抗体，并需进行重复加样和洗板操作，因是人工操作其重复性较差且误差性较大、花费时间长易影响假阳性率变化，对操作者要求较高。另外还可能是在加样过程中微孔板条未放平而影响洗板机进行操作，加样时未校正微量移液器以规定的量垂直加入孔底，没有利用加样枪尖去除容器壁上已形成的液体滴再加入底孔，吸头触碰到酶标板孔已经被包被的抗原发生交叉污染影响测定值。化学发光法检测主要判断依据为通过某一时间点发光强度、反应总量确定体系相应组成量，其发光信号强度还可在增强剂使用下提高从而使发光时间延长而提高灵敏度，排除黄疸、溶血及脂血影响，且具有安全无毒、重复性好、灵活简便、价格低廉、反应快速、线性范围宽等优势，是临床优先选择的原因。

综上所述，化学发光法检测血清中HIV-1/HIV-2抗体、梅毒抗体和丙肝抗体其灵敏性高于ELISA法，检测结果更准确，值得临床推广应用。