HPLC 法同时测定清心莲子饮中黄芩苷及甘草酸铵两种成分的含量*

陈忠新，苟鑫宇，李 强，解 颖，田 明

（1.黑龙江中医药大学，黑龙江 哈尔滨150040; 2.哈尔滨维科生物技术开发公司，黑龙江 哈尔滨 150069）

清心莲子饮出自《太平惠民和剂局方》。此方在历代医籍中多有记载，临床应用广泛，功效显著[1]。全方由莲子、车前子、黄芩、地骨皮、人参、茯苓、麦冬、炙黄芪、炙甘草9 味中药组成，方中黄芩为臣药，奏清肺而退虚热之效，炙甘草补脾和胃并调合诸药为使药。全方共奏清心火，益气阴，止淋浊之功[2-5]。黄芩苷和甘草酸铵分别为黄芩和炙甘草的有效成分[6,7]，本研究采用高效液相色谱法对两种成分进行测定，为清心莲子饮的质量评价以及质量控制提供依据。

1 仪器及试药

ThermoU3000 型高效液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）; KQ-500D 超声波清洗机（昆山市超声仪器有限公司）; XJ220A 电子分析天平（上海天美天平仪器有限公司）；GLZY-0.5B 真空冷冻干燥机（上海浦东冷冻干燥设备有限公司）。

色谱甲醇、乙腈（迪马科技有限公司）；其他分析纯试剂为天津天大试剂有限公司生产。黄芩及炙甘草均为内蒙古赤峰市道地药材；标准品均采购自中国药品生物制品检定所，批号为黄芩苷（110715-201720）、甘草酸铵（110731-200615）。

2 黄芩苷含量测定

2.1 色谱条件

选用大连Elite ODS 色谱柱，流动相为甲醇-水-磷酸（47∶53∶0.2），将检测波长定为280nm，柱温设置为25℃，将流速设置为1.0mL·min-1。

2.2 供试品溶液的制备

称取处方量药材饮片，煎取滤液，制备成冻干粉，精密称取0.07g，于具塞锥形瓶中加入20mL 甲醇，超声提取20min，滤过，蒸干，残渣用甲醇定容至10mL，即得。

2.3 对照品溶液的制备

黄芩苷对照品12.25mg，精密称取，甲醇溶解并定容至25mL，所制得标准品溶液的浓度为0.49mg·mL-1。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性及相关系数 用ThermoU3000 型高效液相色谱仪，自动进样量分别为2、4、6、8、10μL，按上述色谱条件测定。回归方程为Y=53.946X－0.191，R2=1。结果表明在0.196～0.98μg 范围内黄芩苷线性关系良好，见图1。

图1 黄芩苷标准曲线图Fig.1 Standard curve of Baicalin

2.4.2 精密度试验 取2.2 项下供试品溶液，每次进样量10μL，于高效液相色谱仪中连续重复测定6 次，得黄芩苷峰面积的RSD 值为0.76%（RSD＜3%），表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性试验 按2.2 项下方法平行制备6 份清心莲子饮供试品溶液，各进样10μL，测得黄芩苷平均含量为33.7934mg·剂-1，RSD 值为4.56%（RSD＜5%），表明方法重复性良好。

2.4.4 稳定性试验 取配制好的同一供试品溶液，连续12h 每隔1h 进样10μL，得黄芩苷峰面积RSD值为1.12%，表明样品12h 内基本稳定。

2.4.5 加样回收试验 精密称取上述6 份冻干粉各0.035g，分别加入0.49mg·mL-1的黄芩苷对照品溶液各1mL，制备成供试品溶液，测定，计算回收率，结果6 批供试品回收率均在95%～105%之间，符合加样回收率要求。

2.5 样品含量测定

分别精密称取3 批次清心莲子饮冻干粉各0.07g，按确定的方法制备供试品溶液。每批进样10μL，计算含量，结果见表1。

3 甘草酸铵含量测定

3.1 色谱条件

同上色谱柱，以乙腈- 0.05%磷酸（体积比19→50∶81→50）为流动相进行梯度洗脱，检测波长为237nm，流速1.0mL·min-1。

3.2 供试品溶液的制备

精密量取上述水煎液50mL，用水饱和正丁醇每次50mL 萃取3 次，蒸干，定容至5mL 即得。

3.3 对照品溶液的制备

精取甘草酸铵对照品4.2mg，甲醇定容至10mL容量瓶中，制成浓度为0.42mg·mL-1的甘草酸铵标准品溶液。

3.4 方法学考察

3.4.1 线性及相关系数 甘草酸铵对照品溶液进行高效液相色谱测定，进样量分别为2、4、6、8、10μL，得回归方程为∶Y=8.605X-0.0224，R2=0.9992。结果表明甘草酸铵含量在0.84～4.2μg 范围内呈良好的线性关系，见图2。

图2 甘草酸铵标准曲线Fig.2 Standard curve of ammonium glycyrrhizinate

3.4.2 重复性试验 同2.4.3 方法测定，得甘草酸铵平均含量为4.5484mg·剂-1，RSD 值为4.05%，表明方法重复性良好。

3.4.3 稳定性试验 同2.4.4 方法测定，得甘草酸铵峰面积RSD 值为2.32%，表明在12h 内测定该供试品溶液均是稳定可行的。

3.4.4 加样回收试验 精密称取上述6 份冻干粉各0.38g，分别加入0.42mg 2mL-1的甘草酸铵对照品溶液各1mL，制备成供试品溶液，测定，计算回收率，结果6 批供试品加样回收率均在95%～105%之间，且RSD 值均小于3%，符合要求。

3.5 样品含量测定

同2.5，结果见表1。

表1 含量测定结果Tab.1 Content determination results

4 结论

通过建立高效液相色谱法，对清心莲子饮中黄芩苷以及甘草酸铵两种成分的含量进行测定，结果两种有效成分标准曲线线性关系良好，精密度、重复性、稳定性以及加样回收率RSD 值均小于5，表明该实验方法灵敏度高，重现性好，可以用于检测两种成分的含量，且样品12h 内稳定可靠。本研究推动了该制剂的质量控制，可以更加科学合理的指导清心莲子饮的临床合理应用。