溴氯海因对罗氏沼虾幼体的急性毒性研究

彭 菲 徐宾朋 施伟达 徐 洋 陈雪峰

(浙江省淡水水产研究所，浙江 湖州 313001)

随着罗氏沼虾养殖规模的不断扩大，高密度、集约化养殖已十分普遍，全国对苗种的需求量剧增，2019 年全国罗氏沼虾苗的需求量达到400亿尾。近年各地苗种企业育苗的成功率波动巨大，优质的种虾和育苗技术的优势逐渐显现。而在育苗过程中的各个阶段，罗氏沼虾幼体会出现一些病害，影响罗氏沼虾苗的出成率，从而影响罗氏沼虾苗对各地养殖户的供给，进而影响着整个罗氏沼虾产业的发展。为了减少病害的发生，一般会在育苗过程中选择一些消毒剂进行使用，以起到预防病害发生的效果。正确、安全地使用消毒剂显得尤为重要，不仅可以预防病害，提高成活率，同时还可以避免抗生素的滥用情况。本试验选取新型消毒剂15%溴氯海因颗粒剂，对罗氏沼虾育种过程中7 天和13 天的幼体进行处理，研究溴氯海因对罗氏沼虾两个阶段幼体的急性毒性，据此确定其安全浓度，为罗氏沼虾育苗过程中的疾病防治提供参考数据。

一、材料和方法

1.样本收集 罗氏沼虾幼体来自湖州市长兴县和平镇国家级罗氏沼虾遗传育种中心种质库，分别选取离体7 天和13 天的幼体。试验用幼体均在正常育苗过程中捕捞。

2.试验药品 溴氯海因颗粒剂购于北京荣鼎生物科技有限公司，为纯度15%、直径≤0.05 厘米的小颗粒。

3.试验条件 试验在规格为1升的玻璃烧杯中进行，试验用水为中心育苗过程中配置的人工海水，盐度为10～12，pH 7.4～7.6。试验场地为中心育苗车间的育苗池，同步中心育苗车间正常育苗。水温为28～31℃，每个玻璃烧杯中投放罗氏沼虾幼体60 尾，并放置1 个充气头，试验前曝气30分钟。

4.试验方法 采用半静态急性毒性试验法，试验前通过预试验确定用药浓度范围。试验按照等对数间距设置7 个浓度梯度和1 个对照(表1)，同时设3个平行组(对照组为不含药人工海水)。试验药物先配成高浓度母液，再按所需浓度进行泼洒添加，药液现配现用。用药后6小时内连续观察试验虾的中毒症状和死亡情况，24、48、96 小时记录试验幼体死亡数量，及时用吸管吸出死亡个体(以丧失游泳能力，触碰无反应为准)。试验期间投喂少量卤虫无节幼体，两个阶段罗氏沼虾幼体同步进行试验。

表1 试验用药浓度 毫克/升

5.半致死浓度和安全浓度 根据24、48 小时不同药物、不同浓度条件下受试虾的死亡率数据，采用改进寇氏法计算24、48 小时的半致死浓度(LC50)。安全浓度(SC)根据24 小时和48 小时的半致死浓度求得，SC＝48 小时LC50×0.3/(24 小时LC50/48小时LC50)2。

二、结果

试验开始30 分钟内，低浓度试验组的幼体活动状态与对照组基本相似，体色正常，有打堆现象。高浓度试验组的幼体，在加入试验溶液后即显得很活跃，上下窜动，打圈；13天的幼体比7天的幼体应激反应更加明显。随着时间的推移，幼体中毒程度逐渐加重，相继出现死亡，死亡率随着试验浓度的提高和时间的推移而增加。对照组的幼体与药物浓度为0.5 毫克/升烧杯内的幼体活动基本相似，1、2毫克/升烧杯内幼体活动状态相对前两组稍有减弱。4 毫克/升以上的试验组幼体基本失去平衡、游动无力，直至死亡。镜检幼体可发现身体多处充血、活动能力丧失。同步对比13 天幼体应激反应更加强烈，同期的游泳能力强于7天幼体的试验组，对药物抵抗力略高。

13 天幼体死亡数量见图1，死亡率见表2。用改进寇氏法计算结果为：7天幼体的24小时LC50为2.97～5.52 毫克/升，48 小时 LC50为 2.76～5.31 毫克/升；13 天幼体的 24 小时 LC50为 2.81～5.28 毫克/升，48 小时 LC50为 2.65～5.31 毫克/升。SC 为0.53毫克/升。

图1 13天幼体死亡数量

表2 两个阶段幼体的死亡率 %

三、讨论

溴氯海因是一种新型的消毒剂，溴氯海因可以治疗由弧菌、真菌、嗜水气单胞菌、爱德华氏菌等细菌引起的出血、烂鳃、腐皮、肠炎(李彩苋等，2006)。在实际育苗生产中，溴氯海因常用于预防细菌性疾病。使用后不破坏水色，可维护水体浮游生物优良种群。与常规含氯消毒剂相比，溴氯海因受pH 影响不大，并能够有效阻止有机物对于卤素的消耗，同时，溴氯海因能够降低表面张力破坏有机物保护膜，并促进卤素与病菌蛋白分子的亲和，提高消毒剂的作用效果(龚珞军等，2007)。

15%溴氯海因对罗氏沼虾幼体的毒性常用半致死浓度(LC50)来衡量，从试验结果看，15%溴氯海因对罗氏沼虾13天的幼体的LC50比7天的高，说明离体时间越短的溞状幼体对消毒剂的敏感程度越高，同时，对消毒剂的耐受力也是随着幼体的发育而增加。15%溴氯海因颗粒剂可以作为育苗过程的安全消毒剂来使用，前后两个阶段的安全浓度为0.53 毫克/升。在实际生产中，常用0.03～0.04 毫克/升全池遍洒，远小于本试验的安全浓度，但由于溴氯海因对于不同发育阶段罗氏沼虾幼体的敏感度差异，在使用时应根据幼体的发育程度给出相应的给药方案。

溴氯海因的毒性作用研究主要集中于鱼上，包括泥鳅安全浓度为4.006 毫克/升(何国森等，2014)，瓯江唇■鱼苗安全浓度为0.023 毫克/升(姚子亮等，2008)，麦瑞加拉鲮鱼幼鱼安全浓度为1.697 毫克/升(王志铮等，2007)，草鱼鱼苗安全浓度为4.676 毫克/升(温茹淑等，2006)，鲇鱼安全浓度为0.56毫克/升(宋文华等，2003)，从中可以得出，鱼对溴氯海因敏感度存在着品种差异，安全浓度高的可以达到4.476 毫克/升，低的至0.023 毫克/升。有关溴氯海因对于虾的毒性作用研究，仅有尹文林等(2013)在青虾上开展了代谢动力学研究，本试验因此填补了溴氯海因对虾的毒性作用研究的空白，具有实际应用价值。