提升蛋品质的乳杆菌筛选及其作用机制研究

张 青 陈 聪 林 仙

（1.南平市延平区赤门畜牧兽医站 福建南平 353000；2.南平市延平区农业农村局 福建南平 353000）

受非洲猪瘟疫情影响， 近年来养禽业在我国畜牧业的地位逐渐凸显。 在养殖过程中， 通过添加抗生素或抗菌药物来保障畜禽生产性能是长期以来的惯用方法，由此也带来畜禽产品药物残留、食品安全等一系列问题。随着“无抗养殖”概念的提出，探索抗生素替代品及无抗养殖技术成为当前业内关注的热点。益生菌由于其成本低廉、无毒无害的特点使得其成为重要的抗生素替代品， 在养禽业中的应用逐渐受到重视。最近，对肉鸡的研究显示，给Cobb 500 商品肉鸡饲喂粪肠球菌可提高其日增重[1]。 对蛋鸡的研究显示， 在日粮中添加嗜酸乳杆菌可提升20～49 周龄海兰褐蛋鸡的蛋壳厚度、蛋壳百分比和哈夫单位[2]。 日粮添加丁酸梭菌及其复合菌剂（丁酸梭菌+凝结芽孢杆菌） 能有效缓解夏季高温对产蛋鸡生产性能和蛋品质造成的负面影响， 并延长鸡蛋存放时间，改善血清生化指标[3]。 另外，日粮中添加乳酸菌和枯草芽孢杆菌还可降低蛋鸡血清胆固醇和甘油三酯含量，提高新城疫抗体滴度[4]。 但关于可有效提升蛋品质的更多乳杆菌类型及其作用机理还有待深入研究。

肠黏膜位于动物胃肠道内表面的单层柱状上皮，是营养物质吸收的主要场所，同时也是抵御病原生物入侵的第一道屏障。 由于肠黏膜柱状上皮细胞是养分吸收的主要功能细胞， 其吸收效率在很大程度上将影响动物的生产性能。相关研究显示，益生菌可调节肠黏膜生理功能。 Neija 等研究证实，枯草芽孢杆菌可增强Shaver 白鸡肠黏膜的吸收功能[5]；Salehizadeh 等研究发现，饲喂唾液乳杆菌、嗜酸乳杆菌、 干酪乳杆菌可增加罗斯肉鸡回肠绒毛的相对高度并提高其生长性能[6]。此外，Forte 等发现饲喂嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌可显著降低海兰褐蛋鸡十二指肠黏膜的炎症反应[7]。 综上所述，肠黏膜形态与功能是研究肠道微生物调节蛋鸡产蛋性能及蛋品质的重要对象。

1 材料与方法

1.1 试验材料 所使用的乳杆菌为前期从蛋鸡肠内容物中筛选出的三株优势乳杆菌（Lactobacillus A株、Lactobacillus B 株、Lactobacillus C 株）。三株乳杆菌来源于福建省南平市延平区圣鑫蛋鸡养殖专业合作社的500 羽处于产蛋高峰中后期的海兰褐蛋鸡（40～45 周龄）， 由浙江大学动物科学学院李剑副教授课题组分离、鉴定、保存并馈赠。

1.2 试验分组 随机选取500 羽产蛋高峰后期的海兰褐蛋鸡，分为5 组，每组100 羽，按如下分组进行为期1 个月的乳酸菌拌料饲喂， 剂量为1010CFU/(羽·d）：（1）对照组，饲喂常规饲料；（2）在饲料中添加乳杆菌A；（3） 在饲料中添加乳杆菌B；（4）在饲料中添加乳杆菌C；（5）在饲料中添加乳杆菌A+B+C。

1.3 产蛋性能及蛋品质分析 在饲喂试验期间，每日记录各组的产蛋量和单枚蛋重， 并统计分析日产蛋率的变化趋势。 同时，根据公式：日均蛋重（g）×日均产蛋率（%）× 30（d）× 30（羽）分析总蛋重的变化趋势。 试验结束时，从各组随机挑选30 枚鸡蛋用高精度数码测蛋仪进行蛋品质分析， 检测指标包括蛋壳强度、蛋壳厚度、蛋白高度、哈氏单位等。 另外，采用罗氏比色盘对蛋黄颜色进行1～15 之间的打分。

1.4 肠黏膜形态学观察 试验结束时，从各组随机选取3 羽蛋鸡，经颈总动脉放血处死，之后立即分离十二指肠并固定于4%甲醛溶液中， 按常规方法制作石蜡切片并进行HE 染色。 测量十二指肠的肠绒毛高度和隐窝深度， 并对绒毛高度/隐窝深度（V/C比值）进行统计学分析。

2 结 果

2.1 产蛋率 在饲喂乳杆菌期间，每天收集各组产蛋数据，并对综合产蛋率进行分析。结果显示，A 组、B 组、C 组以及A+B+C 组的综合产蛋率分别比对照组提升了2.48%、4.51%、0.53%和7.37%（见图1A）。对饲喂期间总蛋重的分析结果显示，A 组、B 组、C组和A+B+C 组的总蛋重分别比对照组升高了3.12%、6.36%、1.97%和6.63%（见图1B）。

2.2 蛋品质分析 试验第30 d， 从各组随机选取30 枚鸡蛋， 对其蛋白高度与蛋黄颜色进行分析。 B组、A+B+C 组的蛋白高度分别比对照组高11.83%和11.15%（见图2A）。 各组的蛋黄颜色均优于对照组，A 组、B 组、C 组和A+B+C 组 分别比对照组高2.92%、9.16%、2.92%和10.07%（见图2B）。

图1 饲喂乳杆菌对产蛋性能的影响

图2 饲喂乳杆菌对蛋品质的影响

2.3 肠黏膜形态学观察 为进一步分析肠黏膜结构在乳杆菌调节产蛋性能中的作用， 对十二指肠进行组织切片制作及HE 染色， 同时对十二指肠的绒毛高/隐窝深度比值（V/C 比值）进行统计。 结果显示， 各乳杆菌饲喂组的V/C 比值均高于对照组，A组、B 组、C 组、A+B+C 组分别比对照组高10.78%、17.58%、10.78%、23.58%（见图3 A-图3 B）。

3 讨 论

研究表明，饲喂芽孢杆菌可促进60 周龄海兰褐蛋鸡的产蛋率、蛋重以及蛋壳强度[8]；饲喂含有枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、植物乳杆菌等多种益生菌的微生态制剂可提升50 周龄罗曼褐蛋鸡的产蛋率、平均蛋重、蛋白高度以及蛋黄颜色[9]。 但是，嗜酸乳杆菌和枯草芽孢杆菌对16 周龄海兰褐蛋鸡的蛋品质无显著影响[7]。 本研究结果显示，饲喂乳杆菌B 以及乳杆菌A+B+C 可有效提升海兰蛋鸡的综合产蛋率与总蛋重。 同时，对蛋品质的分析结果表明，乳杆菌B 以及乳杆菌A+B+C 对蛋白高度和蛋黄颜色有较好的提升效果。上述结论差异可能与蛋鸡日龄、品种及所用益生菌种类及其浓度不同有关。综上所述，本试验所用的乳杆菌B 以及乳杆菌A+B+C 混合饲喂对产蛋性能与蛋品质有提升作用。

试验结果显示， 各乳杆菌组的十二指肠段V/C比值均高于对照组， 表明所用的乳杆菌可提高肠黏膜的相对吸收面积。 相似地，Arbor Acre 肉雏鸡饲喂枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌后， 其十二脂肠和回肠段的V/C 比值显著升高[10]。 Ross 308 肉鸡饲喂商品化益生菌后，其回肠中的V/C 比值也显著升高[11]。上述结果表明，饲喂益生菌可有效提高肠绒毛的V/C 比值，提示可促进肠黏膜的吸收面积，进而提高养分吸收效率，最终提升产蛋性能与蛋品质。

综上所述，本试验所使用的乳杆菌B 以及乳杆菌A+B+C 混合饲喂可有效提高海兰蛋鸡的产蛋率与总蛋重。 同时，乳杆菌B 以及乳杆菌A+B+C 混合饲喂可有效提高肠黏膜的吸收面积， 提高养分吸收效率，从而提升海兰蛋鸡的产蛋性能与蛋品质。

图3 饲喂乳酸菌对十二指肠绒毛的影响