HCMV感染新生儿外周血和脑脊液中TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3水平及临床意义

胡冰 周栩平 时英才 王翔

人巨细胞病毒（human cytomegalovirus，HC⁃MV）是新生儿感染的常见病毒，感染率约为0.5%～2.5%，绝大多数为先天性感染或围产期母婴传播导致［1⁃2］。HCMV 主要侵犯中枢神经、消化道、呼吸系统，造成新生儿脑积水、智力损害、黄疸、肝脾肿大、肺炎、呼吸衰竭等［3⁃4］。近年来研究发现，炎性介质、脂肪因子在HCMV 感染导致的各脏器组织损害中具有重要作用：肿瘤坏死因子⁃α（tu⁃mor necrosis factor⁃α，TNF⁃α）是临床常见的炎症介质，其水平直接反映机体炎症情况［5］；脂肪细胞补体相关蛋白30（adipocyte complement related pro⁃tein of 30，Acrp30）是脂肪细胞分泌的特异性蛋白质，目前发现与中枢神经系统疾病密切相关［6］；基质金属蛋白酶⁃3（matrix metallo proteinases⁃3，MMP⁃3）在神经元凋亡机制中发挥关键作用，与炎症反应也有一定关联［7］。本研究探讨新生儿外周血和脑脊液中TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平与HCMV感染的关联及预测价值，为临床诊治及预后评估提供参考，报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2017年10月至2019年10月收治的196例HCMV 感染新生儿（病例组）。男102 例，女94例；胎龄33+2～40+5周，平均胎龄（37.45±1.26）周；早产儿76 例，足月儿120 例；确诊感染时的新生儿日龄3～25 d，平均日龄（12.55±3.01）d。纳入标准：①HCMV⁃DNA 检测阳性，或血清HCMV⁃IgG 或IgM 抗体阳性，或从尿液、血液、唾液中分离出HC⁃MV［8］；②患儿出生28 d 内。排除标准：①新生儿先天性疾病；②新生儿缺血缺氧性脑病、化脓性脑膜炎、颅内出血、肺炎、败血症、血液病等；③合并肝炎病毒、弓形虫、梅毒、风疹病毒等感染疾病；④手术创伤史。选取同期80 例健康新生儿（对照组），男43 例，女37 例；胎龄34+1～40+3周，平均胎龄（37.80±1.33）周；早产儿25 例，足月儿55 例。病例组、对照组新生儿的性别、胎龄比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。本研究通过医院伦理委员会审核，新生儿父母签署知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 标本采集

所有新生儿于出生次日采集外周静脉血5 mL，3 000 rpm 分离10 min，取上层血清待检。同时行腰椎穿刺，采集脑脊液5 mL，具体步骤：新生儿处于侧卧位弓背，双下肢屈曲。利多卡因常规麻醉后，选择髂嵴水平与L3⁃L4 椎间隙的交点进针，依次刺入皮下组织、韧带、硬脊膜，有突破感提示进入蛛网膜下腔，然后抽出针芯，收集脑脊液5 mL 送检。

1.2.2 检验方法

根据酶联免疫吸附实验（enzyme linked immu⁃nosorbent assay，ELISA）双抗体夹心法的原理检测外周血和脑脊液中TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3。试剂盒购自美国伯腾BioTek 公司，检测仪器为美国伯腾BioTek 800TS 多功能酶标仪。完全按说明书进行操作。

1.3 统计学方法

采用SPSS 22.0 软件进行统计分析，计量资料以（）描述，采用t检验。绘制ROC 曲线并选取最佳截断值对应的灵敏度、特异度、曲线下面积AUC 值。以P＜0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组新生儿外周血TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3水平比较

病例组新生儿外周血TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3水平均高于对照组，差异均具有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 两组新生儿外周血TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平比较（±s）Table 1 Levels of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 in peripheral blood of 2 groups（±s）

表1 两组新生儿外周血TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平比较（±s）Table 1 Levels of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 in peripheral blood of 2 groups（±s）

组别病例组对照组t 值P 值n 196 80 TNF⁃α（ng/L）23.48±5.15 10.22±2.57 21.925＜0.001 Acrp30（ng/L）30.53±6.75 7.89±2.38 29.240＜0.001 MMP⁃3（ng/L）1.12±0.28 0.67±0.15 13.591＜0.001

2.2 两组新生儿脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3水平比较

病例组新生儿脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3水平均高于对照组，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表2。

表2 两组新生儿脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平比较（±s）Table 2 Levels of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 in cerebrospinal fluid of 2 groups（±s）

表2 两组新生儿脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平比较（±s）Table 2 Levels of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 in cerebrospinal fluid of 2 groups（±s）

组别病例组对照组t 值P 值n 196 80 TNF⁃α（ng/L）10.59±3.35 4.86±1.18 14.912＜0.001 Acrp30（ng/L）11.06±2.15 3.39±1.07 30.386＜0.001 MMP⁃3（ng/L）0.62±0.18 0.33±0.10 8.891＜0.001

2.3 外周血和脑脊液中TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3对HCMV 感染的预测价值

外周血和脑脊液指标对HCMV 感染的诊断效能由高到低依次为：Acrp30、TNF⁃α、MMP⁃3，截断值、灵敏度、特异度。见表3、图1。

表3 外周血和脑脊液中TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 对HCMV 感染的预测价值Table 3 The predictive value of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 in peripheral blood and cerebrospinal fluid in HCMV infection

2.4 HCMV 感染新生儿治疗前后外周血和脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平变化

治疗后，HCMV 感染新生儿的外周血和脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平均低于治疗前，差异具有统计学意义（P＜0.05），见表4。

3 讨论

图1 外周血和脑脊液中TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 对HCMV 感染的预测价值Figure 1 The predictive value of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 in peripheral blood and cerebrospinal fluid in HCMV infection

表4 HCMV 感染新生儿治疗前后外周血和脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平变化（±s）Table 4 Changes of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 levels in peripheral blood and cerebrospinal fluid of neonates with HCMV infection before and after treatment（±s）

表4 HCMV 感染新生儿治疗前后外周血和脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3 水平变化（±s）Table 4 Changes of TNF⁃α，Acrp30 and MMP⁃3 levels in peripheral blood and cerebrospinal fluid of neonates with HCMV infection before and after treatment（±s）

指标外周血TNF⁃α Acrp30 MMP⁃3脑脊液TNF⁃α Acrp30 MMP⁃3治疗前23.48±5.15 30.53±6.75 1.12±0.28 10.59±3.35 11.06±2.15 0.62±0.18治疗后13.18±3.01 13.22±3.86 0.75±0.19 5.63±1.86 5.02±1.43 0.40±0.12 t 值35.343 45.681 22.043 26.656 47.240 20.533 P 值＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001＜0.001

新生儿HCMV 感染又称为巨细胞包涵体病，这是因为HCMV 病毒侵入寄主细胞生成大量重组蛋白，聚集在细胞核或细胞质中，表达量越高越容易形成，主要病理学特征为细胞变大，核内和胞浆内出现包涵体［9⁃10］。HCMV 感染对优生优育影响极大，先天性感染的胎儿极易发生流产、死胎、早产，在存活的胎儿中表现为多器官损害。围生期感染的新生儿易发生肺炎、呼吸衰竭，是新生儿致死的主要原因之一［11］。HCMV 感染相关疾病的机制较为复杂，目前仍未研究透彻，有研究表示这可能与炎症介质、脂肪因子的免疫防御有关［12］。

TNF⁃α 是常见的炎症介质，参与机体细胞免疫和杀伤肿瘤细胞。有研究报道在新生儿HCMV感染中可见血清TNF⁃α、IFN⁃γ、IL⁃10 等细胞因子表达水平上升［13］。本研究结果与Wang 等［14］的报道相符，表示HCMV 感染新生儿的外周血和脑脊液TNF⁃α 水平显著上升，这说明HCMV 感染会刺激机体发生炎症反应，引起外周血和脑脊液TNF⁃α水平上升，当患儿得到有效治疗后外周血和脑脊液TNF⁃α 水平又逐渐下降，提示治疗有效，机体炎症反应减轻。TNF⁃α 抗HCMV 病毒的机制尚不清楚，有研究分析可能与抑制病毒RNA 复制、蛋白翻译，减弱病毒颗粒的致病性有关［15］。在中枢神经系统中，TNF⁃α 可调节中枢刺激巨噬细胞分泌白细胞介素，共同介导炎症反应。

Acrp30 最早被发现为调节机体糖脂代谢的特异性激素，与心脑血管疾病有着密切关系［16］。近年来发现Acrp30 也是影响中枢神经系统的细胞因子之一，与神经系统损害和大脑认知功能异常有关。本研究发现HCMV 感染新生儿的外周血和脑脊液Acrp30 水平均高于健康新生儿。邹飞［17］的研究也表示新生儿HCMV 感染致脑发育异常的患儿脑脊液Acrp30 水平显著升高，这与本研究结果相似。分析Acrp30 在HCMV 感染中的机制：Acrp30 与炎症具有一定关联，有文献报道Acrp30 抑制单核巨噬细胞的吞噬功能，抑制血管内皮细胞黏附分子的表达，Acrp30 还可以上调TNF⁃α 水平，促进炎症反应［18］。

MMP⁃3 是基质金属蛋白酶家族中的一员，主要作用是降解细胞外基质中的各种蛋白成分，同时也充当病毒感染引起炎性反应的介质。本研究发现HCMV 感染新生儿的外周血和脑脊液MMP⁃3水平均高于健康新生儿，Wang 等［19］分析HCMV 感染新生儿血清和脑脊液中细胞因子的变化，同样发现患儿MMP⁃3 水平呈上升趋势，本研究结论与之相似。该研究还进一步表示HCMV 感染新生儿脑脊液MMP⁃3 水平变化可以作为评估HCMV 感染患儿神经损伤程度预后判断的参考指标，协助临床治疗。上述均提示MMP⁃3 水平升高在HCMV 感染过程中起到重要作用。

综上所述，本研究评价外周血和脑脊液TNF⁃α、Acrp30、MMP⁃3对HCMV感染的预测价值，灵敏度分别为75.51%、88.27%、83.16%、75.51%、82.14%、64.29%，特异度分别为81.15%、88.75%、80.00%、70.00%、87.50%、76.25%，可为新生儿HCMV 感染以及预后评估提供参考，具有一定的临床辅助诊断价值。