核转录因子NF-kB与肺癌骨转移的相关性研究

刘 哲 吴芳庚 邹俊韬 邹平安 钟 赟

肺癌是常见的恶性肿瘤之一，很多肺癌患者来院就诊时已伴有远处转移的情况，其中以骨骼为靶器官转移的病灶越来越多，且以多发为主。骨转移中最常见的转移部位为肋骨，其次为胸椎和腰椎及骨盆；也易在含有红骨髓的躯干骨定殖，研究发现其较少在含黄骨髓的四肢长骨生长[1-2]。

核转录因子通路在恶性肿瘤的发生、发展过程中占有重要的地位，目前己经证实的多条与恶性肿瘤的生长和生存至关重要通路中NF-kB均起着重要的作用，特别是在血液系统疾病中的恶性肿瘤，其组成性的激活是许多疾病的发生、进展的共同性特征标志[3]。

本研究通过研究肺癌细胞中的NF-kB表达情况，明确NF-kB在肺癌细胞中的表达及其与发生骨转移风险的相关性，为临床治疗提供依据，及早对有转移风险的患者进行预防性的判断与治疗。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选取2017年1月1日至2020年6月1日江西省肿瘤医院病理科系统中诊断为肺癌及发生了骨转移的42例患者经福尔马林固定石蜡包埋的骨转移组织的病理标本。入选标准：①已确诊病例，②有足够的标本用于诊断和染色，③病案资料及联系方式完整；排除原发性骨源性疾病。以42例肺癌骨转移疾病患者病理组织作为研究对象。收集肺癌骨转移患者在初次确诊时的相关临床资料，包括性别、年龄、病理类型(常规病理及免疫组化)、病灶的大小、受累区域、肺癌肿瘤标志物。所有病例的病理诊断均由我院病理科明确。病例入组后，由至少一名以上的具有高级职称的病理医师负责对所有病例标本的病理切片按照肺癌国际诊断及分类标准进行复核，并根据相关的基线资料，由临床主治医师及以上的医生进行分期。随机选取42例未发生骨转移即早期肺癌患者标本作为对照组。

1.2 试剂与方法

兔抗人NF-kB p65单克隆抗体购自美国cell signaling公司，实验中抗原修复采用的是柠檬酸钠缓冲液热抗原修复，即S-P免疫组织化学法，并以PBS代替一抗作为阴性对照组，使用已知阳性病理切片作为阳性对照使用。

1.3 结果判断

NF-ΚB染色阳性定位于细胞核之中，染色表现为棕褐色或黄色颗粒状。每例患者随机观察5个高倍视野(×200)的切片，并对每例切片采用半定量积分法判断是否为阳性的结果。积分标准为：阳性细胞数≤5%为0分；>5%～25%为1分；>25%～50%为2分；>50%～75%为3分；>75%为4分；阳性染色黄色为1分；棕黄色为2分；棕褐色为3分。两者积分相乘，0分为阴性(-)，1～4分为弱阳性(+)，5～8分为中度阳性(++)，9～12分为强阳性(+++)。

1.4 统计学方法

采用SPSS22统计软件包比较2组的差别，采用卡方检验，以P值<0.05判断其差异存在统计学意义。

2 结果

2.1 NF-kB表达在肺癌骨转移中的表达

42例肺癌骨转移患者中31例NF-kB阳性，阳性率为73.8%；42例对照组中19例NF-kB阳性，阳性率为42.2%，2组比较差异有统计学意义(χ2=8.868，P=0.003)。

2.2 NF-kB表达与肺癌骨转移患者临床病理特征的关系

NF-kB的表达与肿瘤患者的性别、年龄无相关性，与肿块大小、淋巴结转移病理类型相关(P<0.05)。见表1。

表1 NF-kB表达与肺癌骨转移患者临床病理特征的关系(例，%)

3 讨论

NF-kB这一信号分子是1986年由Sen等[4]在成熟的B淋巴细胞中所提取出的一种对细胞信号通路起到调控的重要核转录因子。研究发现NF-kB广泛存在于真核生物中，NF-kB可以对免疫应答、炎症反应起到调控作用，还参与了炎症的急性反应阶段、细胞分化、细胞周期调控、细胞凋亡及对病毒感染的反应等。近来的研究还发现，在人类乳腺癌[5]、膀胱癌[6]、胃癌[7]等多种恶性肿瘤中均发现有NF-kB持续活化的现象[8-10]，而NF-kB的持续活化能紊乱微血管的纤溶系统从而引起其生理机制的改变，为肿瘤血行转移提供了血液动力学的基础[11]。NF-kB能够参与免疫细胞的分化，增殖和活化[12-14]。NF-kB还能促进IL-2受体，T细胞受体α、β链的表达，从而介导了IL-2的毒性损害以及T细胞与内皮细胞粘附，导致内皮细胞受损从而为肿瘤的转移提供了条件[15-17]。NF-kB通过上调凋亡抑制蛋白(inhibitor of apoptosis，IAP)而抑制瘤细胞等的凋亡，从而加速了疾病的发生，这可能与Rel家族中不同成分及不同信号通路的刺激、传递有关[18-19]。

有研究表明核转录因子NF-kB 是重要的转录因子，通常以非活性形式存在几乎所有细胞的细胞质中，只有被激活后，才能从细胞质转位于细胞核发挥重要的作用，活化的NF-kB 与肿瘤的发生发展、抗凋亡及促进肿瘤细胞生长等相关。肺腺癌晚期患者易远处转移，转移部位以胸腰椎、骨盆转移及四肢长骨骨干最为常见，其转移的主要因素可能与腺癌病灶多位于肺组织的周边，因此容易直接侵犯而累及肋骨、胸椎。

本研究发现，肺癌骨转移组NF-kB 阳性表达明显高于对照组，且有统计学差异，提示NF-kB 与肺癌骨转移有一定的相关性。NF-kB 的表达与患者的年龄及性别分组无关，但与肿瘤病灶的大小、淋巴结转移情况及病理类型相关。小细胞肺癌的肿瘤中 NF-kB 的表达高于腺癌和鳞状细胞癌。目前国内外未见报道，具体机制尚有待探讨。NF-kB 被活化后进一步促进了肿瘤的恶性进展，并且发现存在淋巴结转移的肿瘤组织较无淋巴结转移的表达增高，这说明NF-kB 有可能参与了肿瘤的浸润转移。在以后的临床中，NF-kB水平变化在骨转移风险较高的患者的筛查中可能起到预警的作用。