miR-34c-3p与M2型肿瘤相关巨噬细胞在鼻咽癌中的表达及意义

邹弯弯 罗庆丰 曾 平 李金高

鼻咽癌是肿瘤科常见的恶性肿瘤之一[1]，临床表现为鼻塞、涕中带血、耳闷堵感、听力下降、复视及头痛[2]。鼻咽癌患者肿瘤是由肿瘤细胞、间质细胞及其他细胞外基质等构成[3]。肿瘤微环境浸润的巨噬细胞被称作肿瘤相关巨噬细胞[4]，能够促进分泌多种细胞因子，促进肿瘤的发展进程[5]。肿瘤相关巨噬细胞可分为M1和M2两种亚型，M2型主要作用是促进肿瘤细胞的生长和免疫抑制。IL-10是肿瘤相关巨噬细胞的重要指标。非编码的肿瘤抑制分子分为3p和5p两个亚型，在鼻咽癌等多种肿瘤中表达均下调，是重要的抑癌分子。目前，针对miR-34c-3p与鼻咽癌中M2型肿瘤相关巨噬细胞的研究尚缺乏。本研究探讨miR-34c-3p与M2型TAM在鼻咽癌患者中的表达及意义，现报告如下。

1 材料与方法

1.1 一般资料

选择2018年12月至2020年12月我院收治的50例鼻咽癌患者作为观察组，50例鼻炎患者为对照组。观察组男性29例，女性21例，平均年龄(53.04±3.69)岁；对照组男性27例，女性23例，平均年龄(52.85±3.50)岁。两组患者一般资料具有可比性(P<0.05)。

1.2 纳入及排除标准

纳入标准：(1)病理检查确诊为鼻咽癌；(2)自愿接受并配合本研究者。

排除标准：(1)合并其他心脑血管疾患；(2)合并肿瘤转移者；(3)非首次确诊及诊治的患者。

1.3 方法

1.3.1 标本采集 观察组采集术后新鲜肿瘤组织标本，对照组采取鼻咽部正常腺体组织。将采集好的组织分成两份，一份经液氮迅速冷冻保存；另一份用于流式细胞检测。采集两组患者外周血标本， 检测ELISA。

1.3.2 miR-34c-3p表达的检测 采用PCR法检测。预变性95℃、10 min，变性95℃、15 s，退火60℃、1 min，进行40个循环。

1.3.3 M2型TAM表达的检测 将组织标本研磨成匀浆后加入生理盐水混匀过滤制作单细胞悬液，1500 r/min离心5 min，去除上清，然后加1ml PBS缓冲液，然后进行第二次离心，重复3次后将重悬细胞用锡箔纸包住在流式细胞仪上分析。

1.3.4 血清IL-10检测 采用ELISA法进行检测，将分离好的血清标本800 r/min，5 min离心后覆盖铝箔纸，置于37℃环境中孵育2 h，然后移出上清液，加100 μl检测试剂A，覆盖铝箔纸置于37℃环境中孵育1 h，再次移出上清液，重复该步骤，逐次缩短孵育时间(每次缩短为前一次的1/2 h)直至终止溶液反应，应用酶标仪检测。

1.3.5 两组患者5年后生存率比较 通过为期5年的随访，比较两组患者生存情况。

1.4 统计学方法

2 结果

2.1 两组鼻咽组织中miR-34c-3p的表达

两组鼻咽组织标本中均有miR-34c-3p的表达，观察组miR-34c-3p的平均相对表达量为(110.15±10.64)、对照组miR-34c-3p的平均相对表达量为(99.83±10.06)，观察组高于对照组(P<0.05)，见表1。

2.2 两组患者血清中IL-10水平

两组患者血清中IL-10均有表达，观察组血清IL-10平均水平为(19.30±4.85)pg/ml，对照组血清IL-10平均水平为(16.48±3.42)pg/ml，两组比较P<0.05，见表1。

表1 两组患者miR-34c-3p、M2型肿瘤相关巨噬细胞、IL-10水平比较

2.3 两组患者5年后生存情况比较(表2)

表2 两组患者5年后生存情况比较(例，%)

3 讨论

关于鼻咽癌的研究已经较多了，但是其发病机制还尚未阐明，鼻咽癌的发病机制也一直是肿瘤科的研究热点。既往关于肿瘤的研究显示miR-34c-3p在消化道肿瘤、乳腺癌、肺癌等恶性肿瘤中均呈下调表达[6]，miR-34c-3p是人体十分重要的癌症抑制因子[7]，能够有效Hep-2细胞的生长与浸润，具有明显的抑制肿瘤增长和延缓细胞衰亡的作用[8]。现有的研究显示miR-34c-3p抑制肿瘤的发生于进展可能与Notch2通路有关，而且已有的研究显示miR-34c-3p在鼻咽癌中的表达均降低，对鼻咽癌肿瘤因子抑制作用明显[9]。本研究结果显示miR-34c-3p的在鼻咽癌的表达降低，表明miR-34c-3p确实能够抑制鼻咽癌细胞分化。肿瘤相关巨噬细胞相比起肿瘤细胞，基因表达更稳定。M2型肿瘤相关巨噬细胞细胞表面具有CD68及CD206等特征性蛋白分子，能高分泌白细胞介素-10 (IL-10)，加快免疫抑制，M2型肿瘤相关巨噬细胞在鼻咽癌中扮演着加快肿瘤增殖、促进肿瘤转移的作用[10]，本究结果显示，与正常对照组相比较，观察组患者的M2型肿瘤相关巨噬细胞比例高于对照组(P<0.05)，也证实了M2型肿瘤相关巨噬细胞在鼻咽癌中的作用。通过分析miR-34c-3p与M2型肿瘤相关巨噬细胞及IL-10水平的关系发现miR-34c-3p与M2型肿瘤相关巨噬细胞、miR-34c-3p与IL-10水平均呈现负相关，表明miR-34c-3p在鼻咽癌的发病与进展中起着抑制作用。两组患者5年后的生存率比较差异明显(P<0.05)，表明随着M2型的细胞数目的增多，患者的生存年限下降。

综上，miR-34c-3p能够抑制鼻咽癌的进展，是治疗的新靶点，但是其具体作用方式与作用机制还有待研究。