高迁移率族蛋白B1对细菌性脓毒血症患者生存状况评价的临床意义

付 晶，凃 星

（1.武汉市职业病防治院检验科，湖北 武汉 430000；2.武汉市第三医院检验科，湖北 武汉 430060）

脓毒血症为全身性炎症综合征，患者主要病理特征为炎性因子大量产生、免疫功能高度异常，最后发生休克、多器官功能紊乱及死亡[1-2]。有研究结果表明，全球每年至少新增180万例脓毒血症患者，并且每年增长量呈上升趋势[3]。脓毒血症对患者器官功能的损害非常严重，患者病死率较高，全球每天约有1.4万例患者死于脓毒血症并发症[4]。高迁移率族蛋白B1（high mobility group box 1 protein，HMGB1）是近年报道的一种炎性因子，其在脓毒血症“延迟性”死亡效应中起关键作用[5]。近年来有研究发现，HMGB1在细菌性感染中也起重要作用[6-7]。因此，本研究分析了HMGB1对细菌性脓毒血症患者生存状况的预测作用，以期为临床治疗和判断预后提供依据。

1 材料和方法

1.1 研究对象

选取2015年6月—2017年6月武汉市职业病防治院临床确诊为细菌性脓毒血症的患者110例，其中男64例、女46例，年龄（49.86±6.85）岁。根据患者生存情况分为生存组（84例）和死亡组（26例）。纳入标准：满足脓毒血症的诊断标准，患者意识清晰、无交流障碍，签订知情同意书。排除儿童、妊娠期及短时间出院患者。

1.2 方法

1.2.1 样本采集 所有患者入院时均接受常规检查，收集患者的各项检查结果。分别于入院第1天、第3天、第5天、第7天清晨抽取患者空腹静脉血2 mL于乙二胺四乙酸抗凝管中，低温环境3 000×g离心5 min后保留血浆，用于HMGB1检测。

1.2.2 HMGB1检测 采用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay，ELISA）检测血浆HMGB1水平，试剂盒购自杭州华美生物科技有限公司。采用MB-602型酶标仪（上海众磊技术有限公司）测定吸光度（A）值。依据24 h内的临床资料对患者进行急性生理与慢性健康评分Ⅱ（acute physiology and chronic health evaluation Ⅱ，APACHEⅡ）。APACHEⅡ评分包括急性生理学评分（直肠温度、平均动血压、心率、呼吸频率、氧合作用、动脉血pH值或HCO3-、血清钠、血清钾、血清肌酐、白细胞比容、白细胞计数、格拉斯哥昏迷评分）、年龄评分和慢性健康评分（心血管、呼吸、肝脏、肾脏、免疫抑制）。

1.2.3 血培养及细菌鉴定 抽取患者使用抗菌药物治疗前外周血8～10 mL，采用Versa TREK型血培养系统及配套血培养瓶（成都瑞琦科技公司）进行培养，报阳后转种血平板（深圳海滨仪器公司）进行培养，形成单个菌落后，采用日本岛津公司JMS-S3000型基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱（matrix-assisted laser desorption/ ionization time-of-flight mass spectrometry，MALDI-TOF MS）仪对菌种进行鉴定。

1.3 数据分析

2 结果

2.1 细菌性脓毒血症患者病原菌分布

研究结果显示，从110例细菌性脓毒血症患者中共检测出100株细菌，其中革兰阳性菌44株（44%），以金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主，分别为21株（21%）和14株（14%）；革兰阴性菌56株（56%），以大肠埃希菌为主（26%）。见表1。

表1 细菌性脓毒血症患者病原菌种类及构成比

2.2 革兰阳性菌与革兰阴性菌感染脓毒血症患者HMGB1水平比较

HMGB1水平分组标准参照文献[8]。细菌性感染脓毒血症患者HMGB1水平均＞4.10 pg/mL；HMGB1水平在4.10～25.60 pg/mL时，革兰阳性菌感染患者和革兰阴性菌感染患者例数比较无统计学差异（P＞0.05）；HMGB1水平在25.60～34.50 pg/mL时，革兰阳性菌感染患者例数多于革兰阴性菌感染患者，差异有统计学意义（P＜0.001），HMGB1水平＞34.50 pg/mL时，革兰阳性菌感染患者例数少于革兰阴性菌感染患者，差异有统计学意义（P＜0.001）。见表2。

表2 不同病原菌感染脓毒血症患者HMGB1水平比较

2.3 生存组与死亡组脓毒血症患者HMGB1水平与APACHEII评分比较

对生存组和死亡组患者HMGB1水平与APACHEII评分进行比较，发现2组患者APACHEII评分差异有统计学意义（P＜0.05）；入院第1天2组患者HMGB1水平比较有统计学差异（P＜0.05）；对患者入院7 d内HMGB1水平变化进行比较，生存组HMGB1水平随入院时间延长而明显降低，死亡组HMGB1水平没有发生明显改变。见表3。

表3 2组脓毒血症患者HMGB1水平与APACHEII评分比较 ±s

组别 HMGB1水平/（pg/mL） APACHEII评分第1天 第3天 第5天 第7天生存组 36.26±23.57 32.27±14.85 21.42±13.28 10.87±3.74 16.52±6.35死亡组 42.67±24.86 39.60±21.34 36.57±18.95 43.87±19.28 26.37±6.74 t值 2.024 2.214 2.527 2.985 2.351 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.01 ＜0.01 ＜0.05

3 讨论

脓毒血症发病机制较为复杂，会导致机体多器官功能障碍，目前研究报道的主要是全身炎性反应、免疫功能紊乱、遗传突变及机体对病原菌敏感等。细菌感染引起的脓毒血症会引起机体血液毒素含量升高，进一步诱发机体炎性级联反应[9]。脓毒血症主要的危害是发病率和致死率高，探索敏感性和特异性强的预后指标、改善治疗及预后效果是目前研究的难点[10]。HMGB1是分布于真核细胞中的一种高度保守的非组蛋白，其作用机制主要是与DNA结合为核蛋白复合体，从而调控基因表达过程[11]。当病原菌感染机体时，炎性细胞核内HMGB1会主动运动到胞外，与膜上Toll受体等多种受体作用，将炎性信号传导至细胞内，从而发挥相关生物学作用[12]。有研究发现，HMGB1在脓毒血症的发生、发展中起重要作用，并且在由病原菌引起的脓毒血症中也发挥着关键的作用[6-7]。

本研究分析了生存组和死亡组患者入院7 d内血浆HMGB1水平、APACHEⅡ评分，以及患者感染病原菌的种类、构成；通过血培养鉴定出100株细菌，其中革兰阳性菌44株，以金黄色葡萄球菌和表皮葡萄球菌为主；革兰阴性菌56株，以大肠埃希菌为主。除此之外，本研究还发现革兰阴性菌感染引起的脓毒血症患者血浆HMGB1水平更高。近期也有学者提出，细菌性脂多糖可以诱导小鼠骨细胞系释放HMGB1[13]，由此推测脓毒血症患者感染革兰阴性菌会引起HMGB1水平升高。本研究发现，入院第1天死亡组患者HMGB1表达及APACHEII评分均显著高于生存组患者，差异有显著统计学意义（P＜0.001）；但随着治疗时间的延长，生存组患者HMGB1水平呈下降趋势，而死亡组患者却没有明显变化，与杨婉等[14]的研究结果类似。杨婉等[14]发现休克脓毒血症患者治疗7 d后，HMGB1水平变化不明显，而非休克脓毒血症患者治疗7 d后HMGB1水平明显降低。APACHEII评分简便可靠、设计合理、预测准确，主要用于危重病患者的病情分类和预后预测，是评价患者生理状态的标准，生理状态越好，得分越低，表示病情缓解，预后较好，病死率较低。此外，也有研究发现脓毒血症患者HMGB1水平与APACHEII评分之间存在相关性，说明HMGB1与脓毒血症的发生、发展及患者身体情况关系密切[15]。HMGB1是脓毒血症下游炎性反应中的一个重要的炎症因子，在炎性反应的维持中起重要作用[16]，其水平与脓毒血症病情的严重程度密切相关[17]。采用HMGB1抑制剂治疗脓毒血症可以降低患者全身炎性反应程度，改善病情。

综上所述，血浆HMGB1水平对细菌性感染脓毒血症有较好的预测价值，可作为预测细菌性脓毒血症患者病情进展的指标。