臭氧自血疗法对慢性心力衰竭患者心功能及炎症因子的影响

杨伊萍 傅慎文 何建荣 浮苗 施林军

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）发病率、病死率逐年增加，5 年生存率不足50%，严重危及患者生命[1]。CHF 的病理机制较为复杂，一些炎性因子如白细胞介素（interleukin，IL）-6、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）在其发生、发展过程中发挥重要的生物学效应[2]。臭氧自血疗法（ozone autohemotherapy，O3-AHT）是一种新型生物疗法，研究证实臭氧（ozone，O3）可降低体内炎性因子水平，达到潜在的抗炎效应[3]。O3-AHT 目前已应用于脑卒中、缺血性外周血管病、冠心病等疾病治疗[4-5]，但在治疗CHF 方面应用较少。本研究在常规药物治疗的基础上联合O3-AHT 治疗CHF 患者，分析其对患者心功能及炎症因子的影响，现将结果报道如下。

1 对象和方法

1.1 对象 选择2018 年5 月至2019 年6 月浙江大学医学院附属金华医院收住入院的CHF 患者64例，采用随机数字表法分为O3-AHT 组和对照组，每组32 例。纳入标准：（1）CHF 参照中华医学会心血管病学分会制定的《慢性心力衰竭诊断治疗指南》中的诊断标准；（2）左心室射血分数（left ventricular ejection fraction，LVEF）＜50%；（3） 纽约心脏协会（New York Heart Disease Assocation，NYHA）心功能分级Ⅱ～Ⅲ级。排除标准：（1）急性心肌梗死患者；（2）急性感染、肝肾功能严重不全、甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退者；（3）恶性肿瘤、免疫系统、神经系统或消化系统严重疾病者；（4）出血性疾病、凝血功能障碍、血小板减少者；（5）妊娠患者。本研究经医院医学伦理委员会审批通过（批准文号：2018-170-001），所有患者均签署知情同意书。两组患者性别、年龄等一般资料比较，差异均无统计学意义（均P＞0.05），见表1。

1.2 方法

1.2.1 治疗方法 对照组患者采用常规药物治疗，包括血管紧张素转化酶抑制剂（angiotensin converting enzyme inhibitor，ACEI）、血管紧张素Ⅱ受体拮抗剂（angiotensin Ⅱreceptor blocker，ARB）、β 受体阻滞剂、利尿剂等。O3-AHT 组患者在常规药物治疗的基础上联合O3-AHT 治疗，采用德国赫尔曼公司生产的医用臭氧发生设备（型号：1661510116），依据O3-AHT 规范进行操作。取专用血袋（内含枸橼酸钠抗凝剂）与采血回输器连接；在专用血袋内抽取患者外周血100 mL；将其与100 mL 的O3、O2混合气体（其中O3的浓度从20 mg/L 开始，每次增加5 mg/L直至35 mg/L）充分混合5 min 后；将含有O3的自体血回输。治疗过程中严格遵守无菌操作，同时严格监测患者生命体征及不良反应，O3-AHT 1 次/2 d，10次/疗程，共1 个疗程。

1.2.2 观察指标 （1）用药情况：两组患者治疗后定期随访6 个月，记录患者治疗前及治疗后随访期间药物使用情况。（2）脑钠肽（brain natriuretic peptide，BNP）及炎症因子C 反应蛋白（c-reactive protein，CRP）、IL-6、TNF-α 测定：于治疗前、治疗1 个疗程后采集患者空腹静脉血，采用上海奥森多医疗器械贸易有限公司试剂盒（批号：2400）以纯态氧介导化学发光法测定BNP。采用由深圳普门科技股份有限公司试剂盒（批号：8819124）以免疫荧光干式定量法检测CRP。采用上海碧迪医疗器械有限公司试剂盒（批号：190603，规格：21.25 mL/盒）以流式细胞仪法测定IL-6、TNF-α。均严格按照操作流程及说明书进行。（3）两组患者生活质量评价：于治疗前、治疗1个疗程后使用明尼苏达心力衰竭生活质量量表（Minnesota heart failure quality of life scale，MLHFQ）评价两组患者的生活质量，MLHFQ 评分共21 个问题，分值区间为0～5 分，总分共计105 分，分值越高，表明患者生活质量越差。（4）超声心动图：治疗前及治疗后6 个月分别进行超声心动图检查，采用荷兰飞利浦公司IE-33 心脏超声仪，检测患者左心室舒张末期内径（left ventricular end diastolic diameter，LVEDd），左心室收缩末期内径（left ventricular end systolic diameter，LVESd），以Simpson 法测定LVEF。安全性观察：O3-AHT 治疗过程中及治疗后15 min内监测生命体征，观察患者有无畏寒发热、胸闷气急、恶心呕吐等不适，同时观察患者穿刺处有无出血、血肿，有无过敏反应、感染以及是否耐受多次治疗。

表1 两组患者一般资料的比较

1.3 统计学处理 采用SPSS 22.0 统计软件，计量资料以表示，两组比较采用两独立样本t 检验，治疗前后比较采用配对t 检验；计数资料以百分率表示，比较采用χ2检验。P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组患者治疗前后用药情况比较 见表2。

由表2 可见，治疗前及治疗后两组患者ACEI、ARB、β 受体阻滞剂、利尿剂及阿司匹林使用情况比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。

2.2 两组患者治疗前后BNP、炎症因子水平及MLHFQ 评分比较 见表3。

由表3 可见，治疗前两组BNP、CRP、IL-6、TNF-α 水平及MLHFQ 评分差异均无统计学意义（均P＞0.05）。治疗后O3-AHT 组上述指标均低于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。治疗后两组BNP、CRP、IL-6、TNF-α 水平及MLHFQ 评分均较治疗前降低，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。

2.3 两组患者治疗前后LVEDd、LVESd、LVEF 比较见表4。

由表4 可见，治疗前两组LVEDd、LVESd 及LVEF 比较差异均无统计学意义（均P＞0.05）。治疗后O3-AHT 组LVEDd 和LVESd 低于对照组，LVEF高于对照组，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。治疗后两组LVEDd 和LVESd 较治疗前降低，LVEF 较治疗前升高，差异均有统计学意义（均P＜0.01）。

2.4 两组患者不良反应发生情况比较 O3-AHT 组1 例穿刺处出血，采用指压止血方法止血后好转。两组患者无一例出现畏寒发热、胸闷气急、恶心呕吐、过敏反应及感染。两组不良反应发生率比较差异无统计学意义（P＞0.05）。

表2 两组患者治疗前后用药情况比较[例（%）]

表3 两组患者治疗前后BNP、炎症因子水平及MLHFQ 评分比较

表4 两组患者治疗前后LVEDd、LVESd 及LVEF 比较

3 讨论

CHF 是各种心脏疾病终末阶段，住院期间病死率为5%～8%，1 年病死率在20%～40%，CHF 的预防和治疗已成为我国主要的公共卫生问题[6]。CHF病理机制复杂。已有研究表明CHF 是一类炎症性疾病，某些炎症因子在其发病机制中起着重要作用[2]。炎性因子的释放可导致CHF 患者神经内分泌功能紊乱，加快心室重构，促进心肌细胞凋亡及心功能损伤，而心室重构又可进一步激活炎性因子，形成恶性循环。研究显示IL-6、TNF-α 等炎症因子在CHF 患者中明显升高，并且与NYHA 心功能分级呈正相关[7]。

O3是一种无色、有特殊气味的气体。研究证实O3可以降低TNF-α、IL-1β 和IL-6 等炎性因子水平，达到潜在的抗炎效应[8]，而且O3一旦溶于血浆中，能与多种底物发生反应，生成活性氧、脂质氧化产物和还原型谷胱甘肽，参与调节体内多种细胞的代谢功能，改善氧化应激，提高血氧饱和度，改善机体内环境[9]。O3-AHT 正是在此基础上应用的一种补充性的新型生物疗法，目前已广泛应用于冠心病、脑卒中、自身免疫性疾病、缺血性外周血管病等多种疾病的治疗[4，9]，并取得了良好的临床效果。但其在辅助治疗CHF 方面研究甚少，Buyuklu 等[10]研究了40例NYHA 心功能Ⅱ～Ⅲ级LVEF＜35%的CHF 患者，给予5 周的O3-AHT 治疗，发现O3-AHT 可以使患者LVEDd 和LVESd 显著降低，6 min 步行距离增加，提示O3-AHT 治疗对CHF 患者心功能的改善有一定帮助。

本研究发现，治疗后O3-AHT 组LVEDd 和LVESd 小于治疗前且O3-AHT 治疗不良反应少，这与Buyuklu 等[10]的研究结果一致。此外O3-AHT 组治疗后BNP 水平及MLHFQ 评分低于对照组，LVEF高于对照组，且两组治疗前后药物使用情况比较差异无统计学意义，提示在常规药物治疗的基础上，辅助O3-AHT 治疗可改善患者生活质量、心功能及心室重构，而且安全性高。分析其机制可能有：（1）O3-AHT 治疗改善氧化应激：Buyuklu 等[10]发现O3-AHT 可以显著减少CHF 患者一氧化氮和丙二醛，增加超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、还原型谷胱甘肽和谷胱甘肽过氧化物酶，提示O3-AHT 可能通过提高机体抗氧化状态，改善氧化应激，进一步改善CHF 患者心功能。（2）O3为一种强氧化剂，可激活红细胞代谢，增加血液携氧，降低氧合血红蛋白的结合程度，使氧离曲线右移，促进红细胞对氧气的释放，增强组织供氧量及储备氧气的能力[11]。（3）O3-AHT可增加纤维蛋白溶解度，改善脂质代谢，缓解动脉粥样硬化，使血浆黏稠度降低[9，12]。

炎症因子在CHF 的发生、发展中起着重要作用。在心血管事件中CRP 水平升高可活化炎症细胞因子，损伤血管内皮[13]。IL-6 会降低心肌收缩力，促进组织纤维化，调节心肌肥厚。TNF-α 由心肌细胞分泌，通过多种途径，促进心肌细胞凋亡，抑制心肌收缩力[7]。研究证实O3可以通过Toll 样受体-核转录因子kappa B 通路降低TNF-α、IL-1β 和IL-6及细胞间黏附分子-1 微小RNA 表达水平，从而降低体内炎性因子水平，达到潜在的抗炎效应[14]。本研究发现治疗后O3-AHT 组炎症因子CRP、IL-6、TNF-α 水平低于对照组，提示在常规药物的基础上，辅助O3-AHT 治疗可降低炎症因子、改善炎症反应，其可能为O3-AHT 辅助治疗慢性心力衰竭的又一机制。

综上所述，相较于单纯药物治疗，O3-AHT 辅助治疗CHF 能更有效降低BNP 及炎症因子水平，提高生活质量、改善心室重塑和心功能且安全性高，有望成为CHF 治疗的新选择，具有较好的临床应用价值。但本课题为单中心、小样本研究，还需多中心、大样本研究进一步证实。