如何防止柞蚕蛹虫草培育过程中的感染

李元洪 朱荣才 崔自学

蛹虫草又名北冬虫夏草，俗称北虫草、虫草花，隶属子囊菌亚门（Ascomycotina）麦角菌目（Clavicipitales）麦角菌科（Cordycepps）虫草属（Cordyceps）真菌，是虫草属的模式种。蛹虫草和我们常说的冬虫夏草十分相似，药理作用也基本相同，并且在某些功能成分含量上达到甚至超过天然冬虫夏草。研究发现，蛹虫草富含虫草素、虫草酸、虫草多糖等生物活性物质，具有抗菌、抗肿瘤、抗辐射及调节免疫功能等重要作用。我国已知的100多种虫草，由于寄主不同，又有不同的物名，以冬虫夏草和蛹虫草在中药领域最为著名。冬虫夏草目前还不能完全人工栽培。《全国中草药汇编》记载：“北虫草（蛹虫草）的子实体及虫体也可作为冬虫夏草入药。”由于野生资源有限，远远不能满足市场的需求，故催生出了蟲草人工栽培技术的高科技研发。目前，科研人员利用从野生蛹虫草分离的菌种，栽植在活体的蚕蛹体内，模拟野生蛹虫草的生态环境，已成功大规模培育出柞蚕蛹虫草和桑蚕蛹虫草。但在近年各地大规模生产过程中，往往由于不同环节的蚕蛹被杂菌感染问题，导致大批生产全军覆没，损失惨重，这也是许多想从事蛹虫草栽培的人望而生畏的原因，从某种层面来说，也是阻碍蛹虫草行业发展的原因之一。笔者通过走访调查，结合多年生产经验，总结出以下几点要求，以期对从事蛹虫草生产的人员有所帮助。

一、对菌种的要求

（一）菌种纯净无杂菌、无污染

用于接种蚕蛹的菌种一般都是用蛹虫草母种接种在培养基中，进一步培养而制成的液体菌种。第一，所用的母种必须是纯净的母种，这就需要从正规有资质的科研单位购买母种。如果对所用母种有怀疑，可以挑取一点母种菌丝，在显微镜下观察，看有无杂菌，也可以先用少量蚕蛹试验，即先少制一点培养液接种蚕蛹观察。通过事先少量接种一点蚕蛹，3～5 d后观察所接种的蚕蛹，如果母种纯净无污染，所接蚕蛹体内就会大量繁殖菌丝而使蚕体僵硬。如果所用母种有污染，3～5 d后蛹体就会因被杂菌感染而腐败。第二，所制培养基必须严格灭菌。灭菌时间也要根据所用器皿和所装培养基的多少而定。盛装培养基的器皿大，装的培养基的量也较大，灭菌时间就要适度延长，确保灭菌彻底。第三，一定要在无菌室的超净工作台内严格按照无菌操作接入母种，确保接入菌种后菌液无污染。第四，接入母种后，在培养的过程中要细心观察，看培养基中是否有杂菌在繁殖。如果经过合适的温湿度培养，培养基没有变化，没有菌丝生成，或者有不同颜色的菌物形成，此培养液一定要淘汰。此时也可通过上述方法检验所制菌液是否被杂菌感染，即挑少量菌液在显微镜下观察，看是否有杂菌或者先用少量蚕蛹试验。

（二）菌种新鲜有活力

由于蛹虫草菌种的特异性，非常容易变异和难以保存，在保存不当或保存时间过长时，菌种往往失去活力，致使接种后不能感染蚕蛹，从而使蚕蛹被其他杂菌感染成为败血蛹。

（三）接种室和接种工具要严格消毒

在蛹虫草批量生产过程中，基本不可能在超净工作台内进行，故接种环境非常重要。如果环境内有杂菌，接种所用的菌种、蚕蛹表面和接种工具易被污染，蚕蛹接种后就容易被感染。因此，接种环境必须是能够密闭且易于消毒的场所。这样在接种前先用液体消毒液进行消毒，还要用熏蒸剂进行空气消毒或用紫外灯照射，保证整个接种场所没有杂菌。工作人员进入工作室时必须换上消过毒的工作服，接种人员戴无菌手套或用酒精擦洗手。培育柞蚕蛹虫草一般是用柞蚕蛹的活体，把菌液直接接入活的蛹体内，因此所用的接种工具必须是无菌的，这样才能保证不通过接种工具把杂菌带入蚕蛹体内。

二、培育柞蚕蛹虫草对柞蚕蛹的要求

（一）选蚕蛹

培育柞蚕蛹虫草首先选用健康无病的蚕蛹，一个不健康或带病的蚕蛹体内有无数的细菌或病毒。蛹虫草接种是一个连续接种的过程，因此，如果接种工具一旦接触一个带病的蚕蛹，在连续接种过程中可能会污染无数个健康的蚕蛹。为避免出现此类问题，削茧时和削茧后要严格认真挑选，做到绝不用一个带病蚕蛹，这样可以避免在接种时把不健康蚕蛹体内的杂菌带入其他健康蚕蛹体内而造成蚕蛹感染。

（二）蛹体消毒

所用的活体蚕蛹也要严格消毒。柞蚕茧在存储过程中，会有一部分蚕蛹因各种原因死去。这部分死去的蛹体会污染很多蚕茧，导致从蚕茧剥出的鲜活蚕蛹，蛹体表面也会有各种杂菌污染。因此，蚕蛹在接入菌液之前一定要对蛹体表面彻底消毒。原则上所用的消毒药品是对人体无害和易于挥发的药物，如75%的酒精等。

（三）在接种过程中尽量减少蛹体创伤

从削茧到接种，都有可能对蛹体造成创伤，这也是造成蛹后期感染的主要因素之一。在这一系列操作过程中，动作不能简单粗暴，要轻拿轻放，不使蛹体因人为因素受到创伤。受伤的蚕蛹即使不接种菌种，也会变成败血蛹，因此在接种前的各个环节都要及时剔除创伤蛹。接种时所使用的工具要尽量精细，动作要轻、准、稳，尽可能减小蛹体创伤，以便接种后的蚕蛹伤口快速愈合，减少杂菌感染的机会。

（四）接种后严格控制培养室的温湿度

培养室要求在使用前3～5 d进行严格洗刷消毒，确保干净卫生无污染源，以免造成对蛹体的再次污染和感染。接种后的蚕蛹要放在消毒后的培养室保护，培养室的温湿度要严格控制在合理范围内。温度过高或过低都会增加蚕蛹感染的概率。温度过高不利于虫草菌的生长，还会加快杂菌繁殖速度。温度过低，会影响虫草菌的生长，也会增加蚕蛹感染杂菌的机会。蛹虫草菌喜中低温度环境。接种后的蚕蛹在菌丝培养阶段即培养前期，温度最好控制在18～19 ℃，这样既可抑制杂菌繁殖生长，也有利于蛹虫草菌丝的快速生长。待蛹虫草菌丝长满蛹体，蛹体硬化后将培养室温度调整到20～22 ℃继续培养。发菌培养阶段相对湿度可控制在60%左右，可降低杂菌感染机会。

三、讨论

用柞蚕蛹培育蛹虫草是一个系统工程，过程是用活体蚕蛹直接接入蛹虫草菌种，工序多，每个环节都是基础，每个环节都是整个过程中的关键链接，都必须严格执行技术操作规程。每个环节都要严格要求，做到环环相扣，每个环节都不出漏洞，做到接种时没有杂菌进入蛹体，接种后也没有杂菌通过伤口进入蛹体，加上合理的温湿度保护，才能保证菌丝在蛹体快速生长，从而保证蛹虫草培育的高产稳产。

〔资助项目：现代农业产业技术体系建设专项（No.CARS-18）〕