可溶性B7-H4对系统性红斑狼疮和疾病活动的诊断价值

俞大亮 傅艳平 李浪 陈飞 李六生 李玉斌

三峡大学人民医院，宜昌市第一人民医院肾内科（湖北宜昌443000）

系统性红斑狼疮（systemic lupus erythematosus，SLE）是一种多发于青年女性、累及多脏器以及抗体形成的自身免疫性炎症性结缔组织病。肾脏受累是SLE 最常见的并发症及死亡原因之一，是影响SLE 预后的重要因素。目前病因未明，研究表明T 细胞免疫耐受机制的破坏参与了SLE 的进展［1-3］。

B7-H4 是一种负向调控T 细胞的共刺激分子，主要抑制CD4+T 细胞的活化、增殖以及TNF 等炎症因子的产生，其主要表达于肾脏、骨骼肌、膀胱等非淋巴样组织中。B7-H4 参与了自身免疫病以及感染性疾病的发生发展。B7-H4 在类风湿关节炎中的表达以及诊断价值已经被发现，可溶性B7-H4（sB7-H4）可作为其疾病活动标志物之一［4］。另外sB7-H4 在病毒性心肌炎患者中表达明显升高［5］。目前B7-H4 在SLE 中的作用研究较少，B7-H4 缺陷的狼疮小鼠出现大量抗dsDNA 抗体产生，并发现其肾脏病变进展明显［6］。近期的研究发现sB7-H4 在SLE 患者血清中表达增加［7］。然而，其在系统性红斑狼疮的诊断价值罕有报道。本研究通过检测sB7-H4 在SLE 患者中的血清水平变化，探讨sB7-H4 在SLE 和疾病活动中的诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料选取2019 年1 月至2020 年6 月宜昌市第一人民医院收治的60 例SLE 患者为研究对象，其中男4 例，女56 例，年龄18～50 岁，中位数32 岁。SLE 患者均符合1997 年美国ACR 关于SLE的分类诊断标准，同时排除合并严重感染和患有肿瘤的患者。健康对照组20 例为我院体检中心招募的健康体检者，其中男2 例，女18 例，年龄20～48 岁，中位数34 岁。两组研究人群性别、年龄比较差异无统计学意义，具有可比性。本研究征得宜昌市第一人民医院医学伦理委员会批准，纳入对象均签署知情同意书。

1.2 疾病活动判定按照SLE 疾病活动指数（systemic lupus erythematosus disease activity index，SLEDAI）进行病情评估，以SLEDAI 积分≥8 分作为判定疾病活动的标准。按SLEDAI 评分分组，活动期SLE（ASLE）患者32 例，＜8 分的稳定期SLE（ISLE）患者28 例。

1.3 治疗措施SLE 患者中15 例单用激素治疗，34 例使用激素+免疫抑制剂治疗，余11 例仅口服羟氯喹。

1.4 sB7-H4 检测空腹留取外周静脉血5 mL，室温下静置1 h，3 000 r/min离心15 min分离血清，保存于-80 ℃冰箱中。采用酶联免疫吸附法（ELISA）检测标本中sB7-H4 浓度，操作严格按照试剂盒说明书，人sB7-H4 检测试剂盒购自美国ebiosience公司。

1.5 统计学方法数据分析使用SPSS 22.0统计软件，符合正态分布的资料用均数±标准差表示，不符合的用M（P25，P75）表示。两组间计量资料比较使用独立样本t检验或Wilcoxon 秩和检验，logistics 回归分析SLE 的危险因素，采用ROC 曲线分析sB7-H4 在SLE 和疾病活动诊断中的敏感性和特异性，P＜0.05 为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 SLE患者和健康对照组的临床资料60例SLE患者中抗核抗体（ANA）均阳性，抗ds-DNA 抗体阳性率70%，SLEDAI评分（12.6±7.8）分，使用激素或/和免疫抑制剂治疗的患者有49 例。SLE 患者和健康对照组ALB 和sB7-H4 比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

2.2 SLE 活动组和稳定组的临床资料两组之间疾病活动判定指标（SLEDAI、C3、C4、dsDNA）、ALB和sB7-H4 比较差异有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表1 SLE 患者和健康对照组的临床资料Tab.1 Clinical events for SLE and normal control subjects±s

表1 SLE 患者和健康对照组的临床资料Tab.1 Clinical events for SLE and normal control subjects±s

性别（女/男）年龄［M（P25，P75），岁］ALB（g/L）肌酐（μmol/L）sB7-H4（ng/mL）SLE 组（n=60）56/4 32（20，46）32.5±7.6 68.4±17.5 65.6±21.0健康组（n=20）18/2 34（22，43）46.7±1.5 55.8±17.0 55.4±11.2 t/Z/χ2值0.240 0.100-2.350 0.797 2.766 P 值0.624 0.726 0.019 0.470 0.007

表2 SLE 活动组和稳定组的临床资料Tab.2 Clinical data of SLE active group and stable group±s

表2 SLE 活动组和稳定组的临床资料Tab.2 Clinical data of SLE active group and stable group±s

注：mTP，24 h 尿蛋白

性别（女/男）年龄［M（P25，P75），岁］ALB（g/L）肌酐（μmol/L）C3（g/L）C4（g/L）dsDNA（+/-）SLEDAI mTP［M（P25，P75），g/d］sB7-H4（ng/mL）活动组（n=32）31/1 32（21，45）31.2±7.4 71.5±19.7 0.52±0.25 0.09±0.08 30/2 14.5±5.0 1.3（0.4，1.6）70.99±19.85稳定组（n=28）25/3 32（20，44）39.5±7.6 62.2±16.4 0.78±0.36 0.16±0.10 12/16 5.5±2.4 0.55（0.15，0.95）59.06±20.89 t/Z/χ2值0.180 0.070-2.140 1.150-2.570-1.920 18.418 5.736 1.637 2.830 P值0.725 0.873 0.035 0.265 0.016 0.039＜0.001＜0.001 0.102 0.027

2.3 sB7-H4对SLE患者中的诊断价值调整白蛋白混杂因素后，采用logistics 回归分析发现，sB7-H4 是SLE 的危险因素（OR= 3.023，95%CI：1.009～9.050）。sB7-H4 对SLE 的诊断敏感性为56%，特异性为85%，ROC 曲线下面积为0.65，截断值浓度为57.56 ng/mL，见图1。以＞57.56 ng/mL 为sB7-H4 阳性，SLE 患者和健康对照组sB7-H4阳性率分别为66.7%和40.0%，两者比较差异有统计学意义（χ2=4.38，P=0.036）。

2.4 sB7-H4在活动性SLE患者中的诊断价值调整白蛋白混杂因素后，logistics 回归分析发现，sB7-H4是活动性SLE患者的危险因素（OR=4.733，95%CI：1.386 ～16.442）。sB7-H4 判断活动性SLE 的敏感性为82% 特异性为56%，ROC 曲线下面积为0.687，见图2。

3 讨论

图1 sB7-H4 对SLE 患者诊断的ROC 曲线Fig.1 The ROC curve of SB7-H4 in the diagnosis of SLE patients

图2 sB7-H4 对SLE 患者疾病活动诊断的ROC 曲线Fig.2 The ROC curve of SB7-H4 in the diagnosis of disease activity in SLE patients

系统性红斑性狼疮是一种多脏器、多系统的自身免疫性疾病，肾脏受累较为常见，肾活检发现几乎所有的SLE 患者均有肾损害，肾小管-间质改变在其中的作用不容忽视，表现为肾小管-间质炎症、细胞浸润、小管萎缩和间质纤维化等。目前SLE 发病机制不明。B7/CD28 途径调节人免疫反应，目前包括SLE、RA、pSS 在内的多种自身免疫性疾病的实验表明B7/CD28 途径的调节异常导致T 细胞的免疫紊乱均可导致其疾病进展［4，8-12］。这一信号途径需要2 个信号通路，其中之一是共刺激分子。

B7-H4是共刺激分子家族的最新成员。B7-H4可负向调控T 细胞活化、增殖、细胞周期进程以及细胞因子的产生。B7-H4 mRNA 广泛表达于胎盘、肝、骨骼肌、肾、前列腺、睾丸、卵巢等非淋巴样组织中，在树突状细胞、单核细胞以及T、B 细胞表面高诱导表达［6，13］。B7-H4 在自身免疫性疾病中发挥了重要作用，最新研究发现狼疮鼠敲除B7-H4基因或使用抗B7-H4 抗体封闭内源性B7-H4 表达后出现大量抗dsDNA 抗体产生、肾脏病变进展，然而使用B7-H4Ig 可以减轻狼疮样症状［14］。这提示B7-H4 参与SLE 的疾病进展。

sB7-H4 是SIMON 等［15］利用ELISA 法首次在卵巢癌患者发现，同时在健康人以及良性妇科病患者的血清标本中均可检出。同样淋巴瘤、肺癌、肾癌等肿瘤患者中均发现了高水平表达的sB7-H4，并协助肿瘤细胞免疫逃逸［16-20］。sB7-H4 的来源可能是由其缺失跨膜区的剪切体分泌到血清中或在基质蛋白酶的作用下由膜蛋白脱落到血清中。国内外众多研究发现sB7-H4 在类风湿关节炎患者的血清中表达明显升高，并且和其疾病活动明显正相关［4，21］。本研究结果显示：SLE 患者和健康对照组血清中均有sB7-H4，SLE 患者中其含量明显高于健康对照组，进一步分析：sB7-H4 在SLE 诊断的ROC 曲线下面积为0.65，敏感性56%，特异性85%，提示其在SLE 中具有诊断价值。同时活动期SLE 患者sB7-H4 含量明显高于稳定期患者；sB7-H4 在SLE 判断活动期的ROC 曲线下面积为0.687，敏感性82%，特异性56%，这提示sB7-H4 在预测SLE 疾病活动的重要意义。前期研究发现B7-H4在SLE 的肾脏组织中表达减少［22］，而血清中sB7-H4 的表达增加，这提示sB7-H4 可与某一未被探明的受体结合抑制肾脏等组织表达的B7-H4 负向调控T 细胞的作用，从而促进疾病进展。本研究证实了sB7-H4 在SLE 患者中表达升高，并可能参与了疾病进展。同时活动期SLE 患者sB7-H4 含量明显高于稳定期患者；sB7-H4 在SLE 判断活动期的ROC 曲线下面积为0.687，敏感性82%，特异性56%，这提示sB7-H4 在预测SLE 疾病活动的重要意义。

本研究不足之处在于没有探究SLE 患者中sB7-H4 的来源，没有分析sB7-H4 与抗SM 抗体、抗dsDNA 等标志物联合诊断的价值，这需要加大样本量来进一步分析。若sB7-H4 可作为新的SLE 标志物，且在SLE 发病早期即可检测，对于SLE 的早期诊断和疾病活动可能提供了新的思考方向。

总之，sB7-H4 在系统性红斑狼疮患者中表达增加，提示其抑制T 细胞活化功能可能降低，从而参与系统性红斑狼疮的疾病进展，但精确的机制有待进一步深入研究。对于sB7-H4 浓度测定，有助于SLE 的诊断，可以为SLE 疾病活动提供可靠依据。