灵芝超微粉对大鼠血液学和血液生化学的影响*

2021-02-02陈明容李晓明

中国药业 2021年2期

陈明容，李晓明，李卿，杨轫

（1.重庆市中医院，重庆400021；2.重庆市中药研究院，重庆400065；3.重庆市大足区妇幼保健计划生育服务中心，重庆402360）

灵芝为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.或紫芝Ganoderma sinense Zhao，Xu et Zhang的干燥子实体［1］，具有丰富的营养和药用价值，素有“仙草”“瑞草”之称。其味甘、性平，归心、肺、肝、肾经，有补气安神、止咳平喘之功，多用于心神不宁、肺虚咳嗽、虚劳短气、不思饮食的治疗。研究表明，灵芝具有抗肿瘤、增强免疫功能、降血糖、保肝、抗衰老等作用［2-5］。超微粉碎是通过机械将物料粉碎至微米级，能有效减小物料颗粒粒度，增加粉体的表面积和孔隙率，使超微粉末具有良好的吸附性、溶解性和分散性；此外，经超微粉生产的药品更易被人体消化吸收，提高了生物利用度，增强了药效［6-8］。但由于超微细胞破壁，人们对其安全性有所顾虑，延缓了新技术进一步推广应用［9］。本研究中通过灵芝超微粉长期喂饲大鼠，考察其血液学及血液生化学指标的波动，以此评价灵芝超微粉服用期间的安全性，为科学合理应用灵芝提供参考。现报道如下。

1 材料与方法

1.1 仪器、试药与动物

仪器：XT-2000i型全自动血液分析仪、CA-1500型全自动凝血分析仪均购自日本Sysmex株式会社；AU480型全自动生化分析仪（美国Beckman Coulter公司）；CLW-1020型纯水机（重庆乾崃仪器有限公司）；BS224S型电子天平（北京赛多利斯仪器系统公司）。

试剂：血常规试剂盒（日本Sysmex株式会社，批号为G7004）；凝血酶原时间（PT）试剂盒（批号为1706002）、活化部分凝血活酶时间（APTT）试剂盒（批号为1607004）均购自上海长岛生物技术有限公司；总蛋白（TP）试剂盒（批号为AUZ3710）、白蛋白（Alb）试剂盒（批号为AUZ3838）、丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒（批号为AUZ4140）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒（批号为AUZ2286）、血液碱性磷酸酶（AKP、ALP）试剂盒（批号为AUZ1433）均购自贝克曼库尔特商贸有限公司；其余试剂均为分析纯，水为纯化水。

药材：灵芝药材（重庆纯芝生物科技有限公司，批号为170401），经重庆市中药研究院肖铭玉副研究员鉴定为多孔菌科真菌赤芝Ganoderma lucidum（Leyss.ex Fr.）Karst.的干燥子实体，超微粉碎（粒径为150～400 nm），灵芝多糖含量4.5%、三萜及甾醇含量0.68%。

动物：SPF级SD大鼠60只，雌性，体质量130.3～192.1 g，周龄6～7周；由重庆市中药研究院实验动物研究所提供［动物生产许可证号SCXK（渝）2012-0006，实验动物合格证号No.0004635；动物使用许可证号SYXK（渝）2012-0003］；饲养温度20.4～24.5℃，相对湿度49%～69%，实验设施（由重庆市实验动物质量检测中心检测）符合GB 14925-2010标准中屏障环境要求。饲料购自北京科澳协力饲料有限公司。实验过程秉承动物实验“3R”原则。

1.2 方法

分组与给药：120只大鼠，按体质量随机分为空白对照组（等体积水，A组）和灵芝超微粉高、中、低剂量组［8.4，4.2，2.1 g生药/（kg·24 h），B组，C组，D组］，各30只，雌雄兼半。灌胃给药，每日2次，连续91 d，停药后观察30 d。

血液学指标检测：开始给药后第91，121天，采用全自动动物血液分析仪检测细胞计数及分类、包括白细胞（WBC）、红细胞（RBC）、血红蛋白（Hb）、血细胞比容（HCT）、血小板（PLT）、平均血小板体积（MPV）、血小板比容（PCT）、红细胞平均体积（MCV）、平均血红蛋白量（MCH）、平均血红蛋白浓度（MCHC）、中性粒细胞（NEUT）、单核细胞（MONO）、嗜酸性粒细胞（EO）、嗜碱性粒细胞（BASO）、红细胞分布宽度（RDW-SD）、血小板分布宽度（PDW）、大型血小板比率（P-LCR）、网织红细胞（RET）；采用全自动凝血分析仪检测PT及APTT。

血液生化学指标检测：开始给药后第91天、121天，采用AU480型全自动生化分析仪（美国Beckman Coulter公司）检测TP及ALB、总胆红素（TBiL）、ALT、AST、ALP、总胆固醇（TC）、三酰甘油（TG）、尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、血糖（Glu）、肌酸磷酸激酶（CK）水平；采用电解质分析仪检测K＋、Na＋、Cl-。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 对雄性大鼠血液学指标的影响

与A组比较，B组雄性大鼠d91的NEUT%，RDWSD及RET%，C组雄性大鼠d91的WBC和d121的WBC及LYMPH均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；B组雄性大鼠d91的MCHC及LYMPH%均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。详见表1。

表1 灵芝超微粉对雄性SD大鼠血液学指标的影响（±s，n＝15）Tab.1 Effect of Ganoderma lucidum ultra-fine powder on hematological indexes of male SD rats（±s，n＝15）

注：与A组比较，*P＜0.05，**P＜0.01。下表同。Note：Compared with those in group A，*P＜0.05，*P＜0.01，as well as the following tables.

指标WBC（×109/L）RBC（×1012/L）Hb（g/L）HCT（%）PLT（×109/L）MPV（fL）PCT（L/L）MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）NEUT%时间A组B组C组D组时间d91指标BASO%d91 d121 d121 A组 0 0 B组 0 0 C组 0 0 D组 0 0 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 0.563±0.220 0.710±0.197 2.03±0.46 1.74±0.31 0.096±0.035 0.146±0.040 0.054±0.024 0.054±0.021 1.191±0.702 0.660±0.056 1.50±0.43 2.01±0.17 0.115±0.067 0.132±0.056 0.042±0.027 0.060±0.014 1.007±0.534 1.664±2.095 2.46±0.67 2.45±0.31**0.150±0.065 0.326±0.353 0.050±0.021 0.052±0.011 1.233±1.527 0.598±0.111 2.73±1.11 2.09±0.38 0.141±0.131 0.154±0.051 0.078±0.054 0.054±0.009 d91 d91 d121 d121 0 0 0 0 0 0 0 0 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 NEUT＃（×109/L）LYMPH＃（×109/L）MONO＃（×109/L）EO＃（×109/L）BASO＃（×109/L）RDW-SD（%）PDW（fL）P-LCR（%）RET＃（×1012/L）RET%d91 d121 d121 LYMPH%d91 d91 d121 d121 MONO%d91 d91 d121 PT（s）APTT（s）d121 28.33±1.24 27.22±1.26 7.09±0.36 7.90±0.24 4.16±1.15 6.04±0.70 0.251±0.027 0.258±0.039 3.01±0.38 3.05±0.50 15.69±1.28 16.84±1.50 18.48±1.71 19.16±1.03 31.13±2.37**26.20±2.01 7.17±0.28 7.58±0.30 4.35±0.91 5.54±0.75 0.299±0.058 0.251±0.067 3.82±0.87*3.17±1.00 16.14±1.49 16.80±0.62 18.21±1.52 18.38±1.01 29.18±1.81 26.98±0.92 6.87±0.12 7.98±0.46 3.62±0.46 6.62±1.65 0.277±0.048 0.244±0.065 3.46±0.64 3.02±0.84 16.14±0.87 16.52±0.94 18.06±1.01 18.04±1.10 28.52±1.58 27.04±1.10 6.99±0.36 7.92±0.38 4.26±0.81 6.24±1.21 0.242±0.040 0.257±0.041 3.01±0.40 3.11±0.54 16.00±1.56 16.54±1.21 17.83±1.27 18.26±1.26 EO%d91 d121 2.74±0.48 2.65±0.40 8.39±0.42 8.48±0.26 141.3±4.6 142.0±3.7 39.94±1.30 39.44±0.70 918.8±118.2 940.0±72.4 6.55±0.25 7.08±0.13 0.600±0.069 0.668±0.048 47.69±2.13 46.56±1.90 16.84±0.71 16.78±0.82 353.7±3.4 360.2±5.9 20.86±7.84 26.70±5.29 73.71±8.41 65.70±6.72 3.47±1.00 5.46±1.07 1.96±0.81 2.14±1.14 2.84±0.93 2.87±0.19 7.91±0.46 8.00±0.39 135.3±7.0 140.2±4.8 39.09±1.94 39.46±1.23 931.7±134.3 934.8±86.3 6.62±0.23 6.94±0.15 0.614±0.072 0.648±0.061 49.51±1.98 49.34±1.26 17.12±0.53 17.54±0.47 346.2±5.2**355.2±1.8 40.07±14.47**23.14±2.71 54.53±14.32**70.22±2.78 3.93±1.44 4.50±1.69 1.47±0.69 2.14±0.59 3.67±1.04*3.33±0.47*8.03±0.25 8.10±0.35 137.3±4.1 138.4±7.7 39.07±0.91 38.42±2.47 957.0±98.7 959.4±75.0 6.45±0.11 7.16±0.34 0.619±0.057 0.686±0.051 48.69±0.75 47.46±2.87 17.11±0.17 17.10±0.89 351.3±3.4 360.4±7.3 26.65±9.87 29.24±16.94 67.93±10.32 63.34±19.01 3.99±0.93 6.08±2.75 1.43±0.59 1.34±0.51 3.37±0.89 2.89±0.44 8.05±0.65 8.28±0.37 136.4±9.3 142.0±7.2 38.81±2.33 39.60±1.95 876.2±69.7 922.6±33.8 6.57±0.19 7.10±0.24 0.578±0.049 0.654±0.027 48.31±1.48 47.86±1.74 16.98±0.36 17.16±0.59 351.2±5.6 358.8±4.6 24.89±8.78 20.64±1.82 70.06±9.21 71.96±3.62 3.18±0.86 5.48±2.06 1.87±0.53 1.92±0.44

2.2 对雌性大鼠血液学指标的影响

与A组比较，B组雌性大鼠d91的PLT，PCT，NEUT，C组雌性大鼠d91的PLT，D组雌性大鼠d91的NEUT%和d121的PLT及PCT均显著升高（P＜0.05或P＜0.01）；B组和D组雌性大鼠d91的LYMPH%均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。详见表2。

2.3 对雄性大鼠血液生化学指标的影响

与A组比较，B组雄性大鼠d91的BUN及Cr，C组雄性大鼠d91的TC，D组雄性大鼠d91的TC及Cr均显著降低（P＜0.05或P＜0.01）。详见表3。

2.4 对雌性大鼠血液生化学指标的影响

各组间雌性大鼠血液生化指标（除D组大鼠d121的AST与A组比较外）均无显著差异（P＞0.05）。详见表4。

3 讨论

本试验旨在观察最大限度地暴露高剂量时动物出现的明显毒性反应，SD大鼠连续91 d灌胃给予灵芝超微粉8.4，4.2，2.1g生药/（kg·24 h），停药后恢复30 d。结果灵芝超微粉各剂量组雄、雌大鼠血液学、血液生化学指标检测均未见与药物相关的异常改变，表明灵芝超微粉长期喂饲对大鼠未见明显毒性反应，为灵芝超微粉临床使用安全性提供了依据。

表2 灵芝超微粉对雌性SD大鼠血液学指标的影响（±s，n＝15）Tab.2 Effect of Ganoderma lucidum ultra-fine powder on hematological indexes of female SD rats（±s，n＝15）

指标WBC（×109/L）RBC（×1012/L）Hb（g/L）HCT（%）PLT（×109/L）MPV（fL）PCT（L/L）MCV（fL）MCH（pg）MCHC（g/L）NEUT%时间A组B组C组D组时间d91指标BASO%d91 C组 0 d121 d121 A组 0 0 B组 0 0 D组 0 0 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 0.373±0.111 0.320±0.140 1.87±0.53 1.17±0.37 0.084±0.038 0.054±0.030 0.026±0.008 0.036±0.009 0.533±0.127*0.462±0.272 1.74±0.35 1.24±0.34 0.098±0.051 0.062±0.019 0.035±0.014 0.034±0.011 0.478±0.160 0.316±0.033 1.37±0.37 1.22±0.11 0.069±0.031 0.086±0.030 0.025±0.010 0.048±0.016 d91 d91 d121 d121 0 0 0 0 0 0 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 d91 d121 d121 d91 NEUT＃（×109/L）LYMPH＃（×109/L）MONO＃（×109/L）EO＃（×109/L）BASO＃（×109/L）RDW-SD（%）PDW（fL）P-LCR（%）RET＃（×1012/L）RET%d91 d121 d121 LYMPH%d91 d91 d121 d121 MONO%d91 d91 d121 PT（s）APTT（s）d121 25.52±0.60 24.48±1.19 7.33±0.60 7.92±0.26 5.10±1.75 6.58±0.78 0.230±0.037 0.249±0.040 3.26±0.87 3.30±0.58 13.39±0.97 14.08±0.61 16.64±0.55 17.02±1.74 26.59±1.36 25.02±2.18 7.20±0.25 8.04±0.43 4.75±0.91 7.32±1.41 0.245±0.072 0.255±0.069 3.36±1.08 3.39±0.98 13.60±0.66 13.68±0.72 16.85±0.85 16.88±2.12 80.00±178.89 0.420±0.078 0.372±0.096 1.86±0.55 1.39±0.52 0.089±0.019 0.080±0.047 0.039±0.017 0.040±0.016 0 0.200±0.447 26.70±1.53 24.94±0.69 7.12±0.41 8.02±0.24 4.39±1.09 6.96±1.15 0.228±0.044 0.217±0.038 3.03±0.53 2.79±0.51 13.45±0.63 13.64±0.66 16.79±1.09 17.08±2.88 25.97±0.85 24.54±0.63 7.05±0.63 8.28±0.24 4.46±1.37 7.68±1.21 0.218±0.020 0.245±0.041 3.08±0.47 3.19±0.50 13.56±1.13 13.62±1.03 16.44±0.78 17.56±1.52 EO%d91 d121 2.35±0.54 1.58±0.53 7.22±0.73 7.57±0.27 130.2±12.4 135.6±3.9 37.03±3.31 38.26±1.10 765.0±25.6 819.8±23.9 6.79±0.37 7.18±0.19 0.520±0.034 0.586±0.023 51.38±1.38 50.54±1.11 18.06±0.47 17.92±0.43 351.5±6.7 354.6±1.9 16.53±6.02 19.78±3.22 78.82±5.90 74.50±3.25 3.54±1.45 3.34±1.07 1.11±0.33 2.38±0.56 2.41±0.41 1.80±0.42 7.35±0.39 7.56±0.22 134.3±6.9 136.6±3.6 38.14±1.76 38.74±0.44 868.3±59.5**886.6±80.8 6.77±0.21 7.34±0.25 0.587±0.037**0.646±0.051 51.96±1.96 51.30±1.30 18.29±0.68 18.10±0.35 352.1±3.3 352.4±5.8 22.38±5.46 25.00±13.06 72.13±5.15*69.52±13.53 4.04±2.03 3.60±1.44 1.45±0.50 1.88±0.37 2.41±0.59 1.88±0.64 7.51±0.40 7.79±0.33 135.2±4.9 141.2±5.0 38.48±1.42 39.78±2.15 854.2±65.2*882.0±62.7 6.66±0.29 7.24±0.19 0.568±0.034 0.640±0.049 51.28±1.69 51.06±1.35 18.01±0.54 18.12±0.31 351.4±4.2 355.4±6.9 18.09±4.64 20.82±6.02 76.52±4.78 72.90±5.76 3.77±0.69 4.10±1.30 1.62±0.72 2.10±0.21 1.94±0.46 1.67±0.09 7.15±0.64 7.65±0.27 130.1±9.5 136.2±3.4 36.85±2.48 38.26±0.98 828.8±94.2 947.2±54.1**6.66±0.36 7.40±0.20 0.551±0.076 0.700±0.044**51.68±1.84 50.08±0.85 18.24±0.49 17.82±0.26 352.8±4.2 356.2±1.3 24.84±6.49**19.06±2.64 70.14±7.21**72.92±3.94 3.72±2.04 5.14±1.75 1.30±0.60 2.88±0.97

中药材经过超微粉碎后有效提高了药材活性成分的提取率，用药时间缩短。但药材经过超微粉碎后，大量释放的不仅是有效成分，同时伴有其他成分溶出，可能会产生不良反应，如有毒药材的毒性成分溶出变快变多，或是毒副作用增强，影响临床应用。

在中药材超微粉应用过程中，需避免所有中药材（饮片）制成微粉应用于临床，应加强超微粉生物等效性、安全性的研究。刘玉兰［10］比较了四逆汤传统饮片和超微饮片化学成分及药效学差异，结果两者强心作用无明显差异，而双酯型乌头类生物碱毒性成分提取率明显升高，提示临床应警惕超微粉入药带来的毒性作用。由于中药材品种多、分类广，一概而论地认为超微粉碎好可能欠妥［11-17］。陈帅等［18］比较了西洋参普通粉和超微粉溶出度和药效学，结果西洋参超微粉有效成分溶出度和药效较普通粉末高，提示在临床将超微粉替代普通粉使用时，通过调整剂量保证生物等效性值得研究。

根据中药超微粉的特点，可选择经典名方或单味中药如附子理中汤、银翘散、保和丸等，结合中医临床中内科、外科、骨伤科、妇科、儿科等临床常见病、多发病进行中药超微饮片与其传统饮片（汤剂）、散剂临床疗效的对比研究，考察其不良反应，建立中药超微粉（饮片）的不良反应监测体系，监测中药超微粉（饮片）在临床使用中的不良反应，评估安全性。中药超微粉的应用，传承和发扬了中医药的特色与优势，对于保护中药材资源，促进中药行业的科技进步具有重要作用，对于推进中药饮片的规范化、标准化具有重要意义。

表3 灵芝超微粉对雄性SD大鼠血液生化学指标的影响（±s，n＝15）Tab.3 Effect of Ganoderma lucidum ultra-fine powder on blood biological indexes of male SD rats（±s，n＝15）

指标TP（g/L）Alb（g/L）TBiL（μmol/L）AST（IU/L）ALT（IU/L）ALP（IU/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）时间d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 A组57.13±2.25 59.76±1.98 31.20±1.23 32.00±1.58 2.54±0.21 2.64±0.06 95.50±13.92 91.60±13.28 44.30±9.17 38.60±3.65 128.0±22.4 120.0±29.9 1.75±0.42 1.78±0.33 0.584±0.197 0.808±0.278 B组56.62±2.39 59.32±1.55 31.40±1.51 31.60±1.95 2.49±0.28 2.77±0.12 104.30±26.52 92.00±19.42 44.50±11.58 39.40±16.83 134.8±34.3 119.6±40.7 1.54±0.22 1.45±0.14 0.420±0.179 0.494±0.190 C组55.77±2.29 59.26±1.78 30.30±1.49 31.00±2.00 2.60±0.14 2.66±0.33 102.00±15.97 94.80±11.73 46.80±11.87 39.40±1.52 138.6±43.9 125.0±48.2 1.31±0.16**1.66±0.24 0.495±0.232 0.862±0.193 D组55.59±1.80 58.08±3.24 30.20±1.55 31.20±2.17 2.61±0.20 2.59±0.15 106.10±13.55 92.20±16.78 44.80±9.68 39.40±7.54 139.5±80.4 105.2±23.7 1.36±0.16**1.67±0.43 0.555±0.331 0.566±0.113指标BUN（mmol/L）Cr（μmol/L）Glu（mmol/L）CK（IU/L）K＋（mmol/L）Na＋（mmol/L）Cl-（mmol/L）时间d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 A组7.68±1.55 7.46±0.88 54.50±6.29 52.00±2.83 7.44±1.19 7.42±0.96 253.8±58.6 297.2±104.0 4.24±0.17 4.05±0.18 141.1±0.8 140.1±0.6 105.2±0.8 104.5±0.9 B组5.73±0.37**7.56±1.46 49.50±3.54*48.40±2.61 7.08±0.99 6.50±0.43 223.0±86.0 269.0±107.7 4.16±0.16 4.01±0.16 136.9±11.7 139.9±2.0 104.1±2.1 104.0±2.0 C组6.81±0.94 6.42±1.00 49.70±4.14 47.60±5.41 6.84±0.75 6.82±0.86 207.8±88.4 305.4±190.5 4.22±0.17 4.12±0.28 140.2±1.2 139.5±0.8 104.4±1.1 104.2±0.9 D组6.44±0.76 7.16±0.51 48.50±3.24*49.00±2.92 6.97±0.75 6.82±0.69 176.3±83.5 294.2±149.7 4.14±0.15 4.12±0.29 142.0±2.4 139.4±0.5 105.7±1.9 104.7±0.3

表4 灵芝超微粉对雌性SD大鼠血液生化学指标的影响（±s，n＝15）Tab.4 Effect of Ganoderma lucidum ultra-fine powder on blood biological indexes of female SD rats（±s，n＝15）

指标BUN（mmol/L）Cr（μmol/L）Glu（mmol/L）CK（IU/L）K＋（mmol/L）Na＋（mmol/L）Cl-（mmol/L）时间d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 A组7.87±1.57 9.24±1.21 64.90±12.85 61.60±4.56 6.87±0.82 6.54±0.60 203.3±59.8 345.6±144.8 4.22±0.35 3.83±0.14 140.4±1.1 139.1±1.4 104.2±1.2 104.6±1.4 B组7.17±1.21 8.20±1.06 58.30±4.32 55.60±3.44 6.57±0.35 7.04±0.78 247.3±88.1 204.2±86.2 4.26±0.25 3.82±0.22 140.4±1.1 139.0±1.5 104.0±1.5 104.3±0.8 C组8.80±1.73 7.74±1.02 64.50±6.64 59.40±4.39 6.41±0.45 7.14±0.34 200.4±89.3 171.0±69.8 4.19±0.22 3.02±1.69 140.7±1.5 138.1±1.3 104.7±1.8 103.1±1.0 D组7.81±0.94 7.74±0.61 61.22±6.50 55.00±4.12 6.67±0.42 7.22±0.66 191.2±71.9 194.8±111.6 4.32±0.22 3.78±0.16 139.9±1.5 138.9±1.5 103.5±2.0 104.1±2.0指标TP（g/L）Alb（g/L）TBiL（μmol/L）AST（IU/L）ALT（IU/L）ALP（IU/L）TC（mmol/L）TG（mmol/L）时间d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 d91 d121 A组61.41±2.27 59.74±1.24 35.50±2.12 34.60±1.14 2.68±0.46 3.02±0.35 90.80±12.80 92.40±8.91 36.10±17.28 31.40±6.88 70.00±23.10 57.40±15.14 1.88±0.40 1.55±0.24 0.344±0.147 0.340±0.098 B组60.32±3.56 60.34±3.54 34.10±2.13 33.60±3.13 2.96±0.42 2.77±0.18 93.60±17.05 81.20±8.73 32.60±7.44 29.20±4.60 85.50±28.47 61.00±12.39 1.91±0.40 1.57±0.29 0.459±0.238 0.216±0.042 C组61.07±2.88 59.58±2.99 35.80±1.99 33.60±1.14 2.80±0.31 2.95±0.41 92.44±14.14 80.80±9.96 42.10±21.68 28.40±2.70 69.60±29.24 60.40±16.41 1.93±0.27 1.79±0.53 0.452±0.159 0.346±0.119 D组59.36±2.72 61.14±2.48 34.20±1.99 35.00±1.58 2.70±0.63 3.08±0.28 88.60±8.30 76.80±6.76*30.30±4.72 30.40±2.88 87.10±35.12 64.40±12.22 1.70±0.38 1.73±0.55 0.460±0.235 0.374±0.176