复方中药对早期断奶仔猪血清免疫球蛋白及肠黏膜免疫细胞的影响

孟冬霞，马政禹，曹日亮

（1.山西农业大学，山西 晋中 030801；2.山西省农业科学院畜牧兽医研究所，山西 太原 030032）

仔猪早期断奶（3～5周龄断奶）是现代养猪的关键技术之一，它可以提高母猪生产力及圈舍利用率、减少母体向仔猪传播疾病的几率，在我国规模化猪场得到广泛重视。但早期断奶易诱发“仔猪早期断奶综合征”，仔猪表现为下痢、生长缓慢、饲料利用率低、免疫力和抗病力下降，发病率和死亡率增高等症状，给养猪业带来巨大的经济损失[1]。以前主要通过在饲料中添加促生长类抗生素预防仔猪腹泻，但随着限抗、禁抗的政策实施，寻找安全、有效的绿色替抗产品尽可能降低早期断奶对仔猪造成的伤害是当前养猪业迫切需要解决的问题。

研究证实中草药添加剂可有效缓解仔猪断奶应激[2-6]。本项目在研究复方中药对早期断奶仔猪生长性能及血清激素水平影响的基础上，进一步研究其对早期断奶仔猪血清免疫球蛋白及肠黏膜免疫细胞的影响，探讨复方中药抗仔猪早期断奶应激的作用效果，为开发口感好、安全、高效、无残留的绿色饲料添加剂提供参考。

1 材料与方法

1.1 饲养试验设计

试验动物为相同饲养条件的120头28日龄杜长大三元杂种仔猪，初始体重相接近，组间差异不显著。随机分为4组，空白对照组Ⅰ（28日龄不断奶，饲喂基础饲粮），空白对照组Ⅱ（28日龄断奶，饲喂基础饲粮），中草药Ⅰ组（28日龄断奶，饲喂基础饲粮+0.3%组方Ⅰ制得的中药制剂），中草药Ⅱ组（28日龄断奶，饲喂基础饲粮+0.3%组方Ⅱ制得的中药制剂）。试验期为14 d，于2015年7月27日至8月9日在山西太原某猪场进行。猪舍、饲养条件、卫生环境、饲料品质及其他饲养管理等均相同，试验猪常规免疫，自由采食和饮水。试验基础饲粮的原料组成及营养水平见表1。

表1 试验基础饲粮的原料组成及营养水平

1.2 中药制剂

山西省农业科学院畜牧兽医研究所中兽医药研究室负责中药的选择、组方。组方Ⅰ由茯苓乙醇提取物、鱼腥草乙醇提取物、白头翁乙醇提取物、白术乙醇提取物、麦冬乙醇提取物、党参乙醇提取物、当归乙醇提取物、姜黄乙醇提取物、山楂水提取物、葡萄糖、蒙脱石等按一定比例组成；组方Ⅱ由鱼腥草乙醇提取物、白术乙醇提取物、党参乙醇提取物、当归乙醇提取物、姜黄乙醇提取物、蒙脱石等按一定比例组成；所有中药均购自河北安国市祁瑞中药材有限责任公司。

乙醇提取物的制备：将原料清洗干净，放入提取罐中，加入9～10倍量体积分数为80%的乙醇，回流提取3次，每次分别为2 h、1 h、1 h，过滤，合并提取液；将提取液减压回收乙醇，并浓缩至相对密度1.20～1.25，得提取物浸膏；提取物浸膏经喷雾干燥机干燥即可。

水提取物的制备：将山楂粉碎成颗粒，加水浸泡1～3 h，加入原料8～12倍量水煎煮2～3次，过滤，合并煎煮液；将煎煮液减压浓缩至相对密度1.20～1.25，喷雾干燥后得混合提取物。

1.3 测定指标及方法

1.3.1 血样采集与血清制备 试验结束时，从各组随机选取5头仔猪，空腹清晨称重后，从前腔静脉采血5 mL于离心管中，室温下放置20 min，以3 000 r/min离心10 min，吸取血清，置于-20 ℃冰箱保存备用。

1.3.2 血清免疫球蛋白的指标测定 测定血清中免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白A（IgA）和免疫球蛋白M（IgM）的含量，试剂盒购自浙江伊利康生物技术有限公司，按说明书要求进行测定。

1.3.3 肠黏膜免疫细胞的指标测定 试验结束时，每组随机抽取3头猪，麻醉（15%复方噻胺酮，0.1 mL/kg体重）后，剖开腹腔，剪取十二指肠、空肠、回肠段各1 cm的样品，制作病理切片（甲醛固定→脱水→包蜡→切片→染色），分析肠黏膜免疫细胞的数量和分布。

1.4 数据分析

试验数据采用SPSS 17.0统计软件中的ANOVA程序进行方差分析和邓肯氏（Duncan）多重比较，结果以平均值±标准差表示。

2 结果与分析

2.1 中药制剂对仔猪血清免疫球蛋白的影响

由表2可知，中草药Ⅰ组的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M含量极显著高于空白对照组Ⅱ（P＜0.01），显著高于中草药Ⅱ组（P＜0.05），与空白对照组Ⅰ差异不显著（P＞0.05）。

表2 中药制剂对仔猪血清免疫球蛋白的影响

2.2 中药制剂对仔猪肠黏膜免疫细胞的影响

由表3可知，中草药Ⅰ组的上皮内淋巴细胞数量，与空白对照组Ⅰ差异不显著（P＞0.05），极显著高于空白对照组Ⅱ（P＜0.01），显著高于中草药Ⅱ组（P＜0.05）；杯状细胞数量，中草药Ⅰ组与空白对照组Ⅰ差异不显著（P＞0.05），极显著高于空白对照组Ⅱ（P＜0.01），在十二指肠段、空肠段显著高于中草药Ⅱ组（P＜0.05）、在回肠段与中草药Ⅱ组差异不显著（P＞0.05）；肥大细胞数量，中草药Ⅰ组显著高于空白对照组Ⅰ（P＜0.05），极显著高于空白对照组Ⅱ（P＜0.01），在十二指肠、回肠段中草药Ⅰ组极显著高于中草药Ⅱ组（P＜0.01），在空肠段中草药Ⅰ组显著高于中草药Ⅱ组（P＜0.05）。

表3 中药制剂对仔猪肠黏膜免疫细胞的影响

3 讨论

3.1 中药制剂对仔猪血清免疫球蛋白的影响

断奶仔猪一方面通过母乳获得母源抗体的被动免疫，另一方面通过完善自身免疫系统获得主动免疫。仔猪断奶后被动免疫被中断，而自身的免疫系统尚不成熟，所以仔猪很容易遭受外界病原微生物的侵袭导致动物生长受阻，甚至死亡[7]。血清中免疫球蛋白的含量在一定程度上是对动物机体体液免疫状况的一种反映。免疫球蛋白的主要作用是与抗原起免疫反应，生成抗原-抗体复合物，使病原体失去致病作用。因此血清中维持较高水平的免疫球蛋白是保证仔猪健康和平稳度过断奶关的重要基础[8]。IgG是主动免疫后机体产生的主要抗体，是动物机体抗感染的主力，在体内发挥抗菌、抗病毒和抗毒素等免疫活性，在体液免疫中最为重要。IgA是外分泌液中的主要Ig，对呼吸道和肠道等局部黏膜免疫起着相当重要的作用。IgM是动物机体遭受病原体感染时，初次免疫应答中最早产生的抗体，具有抗菌和抗病毒等免疫活性[9]。断奶仔猪血清中IgG、IgM和IgA含量提高，在一定程度上表明其免疫力增强。中草药Ⅰ组的免疫球蛋白A、免疫球蛋白G、免疫球蛋白M含量极显著高于空白对照组Ⅱ（P＜0.01），显著高于中草药Ⅱ组（P＜0.05），与空白对照组Ⅰ差异不显著（P＞0.05）。试验结果表明，饲粮中添加0.3%组方Ⅰ制得的中药制剂能够明显提高断奶应激仔猪的体液免疫功能，在一定程度上增强断奶仔猪免疫力。

3.2 中药制剂对仔猪肠黏膜免疫细胞的影响

肠黏膜是机体抵御外源物质以及微生物的重要屏障，上皮内淋巴细胞是黏膜免疫系统中最先接触抗原的免疫活性细胞，在肠道黏膜中起重要的免疫屏障作用；杯状细胞分泌黏液，保护肠黏膜，是构成肠道机械屏障的结构之一；肥大细胞是抗感染免疫的第一线细胞，且能通过所分泌的细胞因子参与获得性免疫，是重要的免疫活性细胞[10]。中药组对仔猪肠黏膜免疫细胞都有不同程度的提高，中草药Ⅰ组的效果优于中草药Ⅱ组。与空白对照组Ⅱ相比，中草药Ⅰ组极显著提高上皮内淋巴细胞数量、杯状细胞数量、肥大细胞数量（P＜0.01）；中草药Ⅱ组显著提高上皮内淋巴细胞数量（P＜0.05）、极显著提高回肠段杯状细胞数量（P＜0.01）、显著提高空肠段肥大细胞数量（P＜0.05）。试验结果表明：饲粮中添加0.3%组方Ⅰ制得的中药制剂，能促进小肠上皮内淋巴细胞、杯状细胞、肥大细胞的增殖，提高肠道的免疫学屏障功能。