蒲黄的过筛净制研究

刘亚萍 高明亮 陈佩东 周桂生

1.南京中医药大学附属医院药学部，江苏南京 210029；2.南京中医药大学药学院，江苏南京 210046

蒲黄为香蒲科植物水烛香蒲（Typha angustifolia L.）或同属植物的干燥花粉。每年6～7 月份，采集蒲棒顶部黄色雄花序，制备成草蒲黄。草蒲黄进一步经过碾轧和筛取等工艺去除杂质制备成蒲黄[1]。我国的蒲黄资源非常丰富，全国各地都有分布[2]。蒲黄始载于神农本草经，在中医临床中有着广泛的应用，有炒蒲黄和蒲黄炭等不同炮制品，是化瘀止血的重要药物[3-4]。生蒲黄饮片常用于淤血所致的经闭痛经、脘腹疼痛等，而炒蒲黄和蒲黄炭饮片则主要用于各类出血病症[5]。

蒲黄中主要含有黄酮类、甾体类、有机酸类及脑苷和多糖等成分[6-9]。现代研究表明，蒲黄中的黄酮类化合物具有化瘀、抗氧化[10-11]作用、蒲黄具有抗动脉硬化，保护内皮细胞的功效[12]以及干预凝血系统作用[13-14]。为了保证蒲黄的质量，控制饮片中非花粉的数量，《中国药典》[1]规定蒲黄中香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量要大于0.5%。但是目前市售蒲黄饮片掺伪现象依然严重，导致产品质量参差不齐[15-16]。因此本研究对蒲黄饮片净制方法进行探讨，对筛制后的花粉粒及杂质中香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量进行测定，为蒲黄饮片的质量控制研究提供依据。

1 材料

1.1 仪器

高效液相色谱仪（美国Agilent1290）；日立S-4800 型扫描电镜（日本东京）；MS-105DU 型电子天平（Mettler Toledo，万分之一）。纱筛购自浙江上虞市道墟张兴纱筛厂。

1.2 试药

蒲黄样品采集于南京栖霞区庙山湖南侧（118°58′14.39″E，32°04′52.69″N），经南京中医药大学鉴定教研室张瑜副教授鉴定为水烛香蒲。香蒲新苷（Y14S 8H43976）和异鼠李素-3-O-新橙皮苷（H30M3X1）对照品购自源叶生物科技有限公司。乙腈（默克公司，SHBK5734）、甲醇（江苏汉邦科技有限公司，180975）及磷酸（阿拉丁，C1801089）均为色谱纯。

2 方法与结果

2.1 蒲黄过筛样品制备

取蒲黄样品过筛并称重，花粉过6～8 号筛平均得率分别为98.30%、95.13%和91.57%。

2.2 蒲黄扫描电镜观察

蒲黄用FAA 固定液脱水处理后用扫描电镜检查，可见蒲黄中混有纤维、植物碎屑以及一些极小的微粒。见图1。

图1 蒲黄样品扫描电镜

2.3 对照品和供试品溶液的制备

对照品溶液制备方法：分别称取香蒲新苷及异鼠李素-3-O-新橙皮苷对照品约10 mg，精密称定后置10 mL 棕色量瓶中，加甲醇定容，既得。供试品溶液制备方法：分别称取样品约0.5 g，精密称定后置于具塞锥形瓶中。精密量取甲醇50 mL 并称定重量，先冷浸12 h，再加热回流1 h，放冷后再称定重量。以甲醇补足缺失的重量，摇匀后过滤，取续滤液，即得。

2.4 蒲黄花粉粒与杂屑中黄酮化合物的含量测定

2.4.1 色谱条件 采用PRAZIS C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱；以乙腈（A）-0.05%磷酸（B）为流动相梯度洗脱。梯度设置为0～5 min，5.0%～14.0%A；5～10 min，14.0%～32.0%A；10～15 min，31.5%A；15～40 min，31.5%～45.0%A；40～43 min，45.0%～5.0%A；43～46 min，5.0%A。流速设置为1.0 mL/min，柱温设置为30℃，进样量为10 μL。

2.4.2 系统适用性试验 分别吸取对照品溶液及供试品溶液按以上“2.4.1”中色谱条件进行测定。实验结果表明在供试品溶液的色谱图中，出现与对照品相同位置的峰，且组分之间分离较好。见图2。测试的供试品溶液理论塔板数按异鼠李素-3-O-新橙皮苷计不低于5000。

2.4.3 线性关系考察 精密称取各对照品，分别制备成浓度为48.10、30.96 μg/mL 的香蒲新苷、异鼠李素-3-O-新橙皮苷母液。再分别吸取以上各母液25、50、100、200、400 μL 至2 mL 容量瓶中，加甲醇溶液至刻度定容。密塞，摇匀后按“2.4.1”中色谱条件进行测定。各对照品浓度设为横坐标X，将峰面积设为纵坐标Y得出标准曲线。香蒲新苷的回归方程为Y=11.665X-3.0371，r=0.9998；异鼠李素-3-O-新橙皮苷回归方程为Y=14.729X-2.4082，r=0.9998。香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷分别在0.7516～48.1000 μg/mL和0.4338～30.9600 μg/mL 浓度范围内与其峰面积呈现出较好的线性关系。

图2 蒲黄及过筛杂质的高效液相色谱图

2.4.4 精密度试验 取同一蒲黄供试品溶液，按上述“2.4.1”中色谱条件测定6 次，分别计算香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的峰面积，结果以上2 种成分的RSD 分别为0.71%和0.75%，表明仪器精密度良好。对照品的检测限分别为0.1259 μg/mL 和0.3788 μg/mL；定量限分别为0.3223 μg/mL 和0.0252 μg/mL。

2.4.5 重复性试验 取同一批蒲黄按上述供试品溶液制备的方法制备。吸取样品，重复测定6 次，计算其中香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的峰面积。结果香蒲新苷平均含量为3.72 mg/g，RSD 为0.82%，异鼠李素-3-O-新橙皮苷为2.99 mg/g，RSD 为1.07%，表明此方法重复性较好。

2.4.6 稳定性试验 在室温条件下，按上述色谱条件对蒲黄样品进行测定，分别于0、2、4、6、12 h 计算香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的峰面积，结果RSD分别为0.64%和0.59%，表明蒲黄样品溶液在12 h 内稳定性良好。

2.4.7 加样回收率试验 精密称取蒲黄同一批次样品6 份，每份取样量约为0.25 g，按前述供试品溶液制备的方法，分别精密加入已知量的对照品，进行加样回收实验。见表1。

表1 加样回收测定结果

2.4.8 样品含量测定 精密称取三批样品按照“2.3”中供试品溶液的制备方法以及上述“2.4.1”中色谱条件测定，每批样品测定3 次，计算其中所含香蒲新苷和异鼠李素-3-O-新橙皮苷的含量。见表2。

2.3 讨论

蒲黄在采收、制备时会混有雌花序、花蕊等杂质，常有细小杂质[17]。目前饮片市场中的蒲黄饮片，常混有花丝及纤维的混合物，存在着不合格产品[18-19]。由于蒲黄饮片中参入杂质较多，影响了颜色，有些饮片又参入了一些染色剂[20-21]。在本实验中，所检测样品中除花粉粒外，还有纤维导管及花丝、苞片等植物碎片。在这些碎片上，还可以观察到黏附的一些微小颗粒状物质。由于6～8 号筛的孔径远大于花粉粒直径，可筛除花粉粒中混杂的植物碎片。从含量测定结果可以看出，样品过筛后，黄酮类化合物含量显著增高。其中，过7 号筛后香蒲新苷等化合物的含量最高，原因可能是在过8 号筛时，有一部分花粉粒黏附到杂质上，造成损失。同时，本研究对过筛后的杂质进行了含量测定，结果表明，杂质中也含有一些黄酮类成分。

表2 过筛后花粉粒及杂质中黄酮化合物含量（n=3）

研究表明，蒲黄饮片造假主要是添加非药用部位，一般通过7 号筛能去除绝大部分杂质[22]。评价蒲黄饮片及其复方制剂品质的方法主要是测定其中的黄酮苷类化合物[23-24]。在蒲黄炒炭的加热炮制的过程中，可以通过热力动力学对炮制工艺进行设定[25]。但是由于花粉壁与植物纤维等组成不同，受热分解的温度有差异，所以蒲黄中的非药用部位对炮制也有影响，造成炮制品质量不稳定。

本研究结果表明，所测定样品中黄酮类成分符合药典的规定。但是，经过进一步过筛净制，黄酮化合物含量显著增加。所以，过筛对蒲黄饮片质量控制具有重要意义。