独活饮片炮制工艺研究

刘 斌，陈光宇，何 群，瞿昊宇，谢梦洲*

(1.湖南中医药大学，湖南 长沙 410208；2.湖南省药食同源功能性食品工程技术研究中心，湖南 长沙 410208)

独活始载于《神农本草经》，列为上品，为伞形科植物独活重齿毛当归AngelicapubescensMaxim.f.的干燥根，主产于重庆、鄂西、四川、甘肃等地，在我国有数千年的应用历史，是常用药材。其性微温，味辛、苦，归肾、膀胱经，具有祛风除湿、通痹止痛等功效，系风寒湿痹之要药，主治腰以下风寒湿痹及少阴伏风头痛。现代研究发现，独活具有镇痛、抗炎、解痉、抗癌、抗氧化、催眠、免疫调节以及防治阿尔茨海默病等作用，可用于肿瘤、肝、脑、心血管、骨关节等疾病的预防和治疗，为历版《中国药典》收载，以饮片入药。2015版《中国药典》一部263页规定：“除去杂质，洗净，润透，切薄片，晒干或低温干燥。”各种版本的中药炮制规范中独活的炮制工艺基本上皆为净制、软化、切制和干燥，无具体的工艺参数，欠规范，可操作性不强，批间差异大，重复性差，从而影响独活饮片的质量。为使独活炮制工艺科学、客观、量化，提高可操作性，本实验以浸出物、蛇床子素及二氢欧山芹醇当归酸酯为评价指标，参照2015版《中国药典》一部、各种炮制规范及相关文献[1-5]，对独活进行炮制工艺参数优化研究，优选出科学、合理、稳定、可行的独活炮制工艺参数，为工业化生产提供质量一致的独活饮片。

1 仪器与药材

1.1 仪器

Ultimate 3000高效液相色谱系统(赛默飞世尔科技(中国)有限公司，包括G1316A四元梯度泵，G1313A标准型自动进样器，G1316A恒温箱，G1314A紫外检测器，Agilent Chemstation 色谱工作站)；中文液晶台式超声波清洗器(昆山美美超声仪器有限公司)；ME204E型电子分析天平(上海梅特勒-托利多仪器有限公司)；TCS-100型电子台秤(上海乾峰电子仪器有限公司)；PW135型中草药粉碎机(天津泰斯特仪器有限公司)；SHH.W21电子三用水箱(北京中兴伟业仪器有限公司)；QY-1中药切片机(温州顶历医疗器械有限公司)；HWS-80B型恒温恒湿培养箱(天津市意博高科实验仪器厂)；101-0AB型电热鼓风干燥箱(北京中兴伟业仪器有限公司)。

1.2 药材及试剂

独活购于湖北省竹溪县，经王智老师鉴定为伞形科植物独活重齿毛当归(AngelicapubescensMaxim.f.)的干燥根；蛇床子素对照品(批号：110822-201710)购自中国食品药品检定研究院(国家药品标准物质)，供含量测定用(蛇床子素含量以99.5%计，ID：9USR-G73L)；二氢欧山芹醇当归酸酯对照品(批号：111583-201605)，购自中国食品药品检定研究院(国家药品标准物质)，供含量测定用(二氢欧山芹醇当归酸酯含量以98.6%计，ID：479G-HTJU)；乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水；液相色谱柱(月旭，Ultimate® XB-C18，4.6 mm×250 mm，5 μm；AcclaimTM120 C18，5 μm，120 Å 4.6 mm×250 mm)。

2 方法与结果

2.1 独活浸出物测定

将独活饮片粉碎过二号筛，取独活饮片粉末4.000 g，精密称定，用乙醇作为溶剂，按照2015版《中国药典》四部通则2201浸出物测定法202页“醇热浸法”测定[1]。

2.2 蛇床子素和二氢欧山芹醇当归酸酯含量测定[2]

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验 采用高效液相色谱法(通则0512)测定，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈-水(49∶51)为流动相，检测波长为330 nm。理论塔板数按二氢欧山芹醇当归酸酯峰计算应不低于6 000。

2.2.2 二氢欧山芹醇当归酸酯对照品溶液制备 取二氢欧山芹醇当归酸酯对照品约0.010 0 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含二氢欧山芹醇当归酸酯1.08 mg的二氢欧山芹醇当归酸酯浓溶液1；精密移取1 mL二氢欧山芹醇当归酸酯溶液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含二氢欧山芹醇当归酸酯0.108 mg的二氢欧山芹醇当归酸酯浓溶液2；再精密移取5 mL二氢欧山芹醇当归酸酯浓溶液2于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含二氢欧山芹醇当归酸酯54.0 μg的二氢欧山芹醇当归酸酯对照品溶液，过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，即得。

2.2.3 蛇床子素对照品溶液制备 取蛇床子素对照品约0.010 0 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含蛇床子素1.01 mg的浓溶液1；精密移取1.5 mL蛇床子素浓溶液1于10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成每1 mL含蛇床子素151.5 μg的蛇床子素对照品溶液，过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，即得。

2.2.4 供试品溶液制备 精密称取本品粉末(过三号筛)约0.5 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇20 mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250 W，频率50 kHz)30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，离心7 min，精密移取上清液2.5 mL至10 mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，取上清液过0.22 μm微孔滤膜至进样小瓶中，备用。

2.2.5 测定方法 分别精密吸取两种对照品溶液10 μL与供试品溶液15 μL，注入液相色谱仪中测定，见图1、图2、图3、图4。

图1 蛇床子素对照品HPLC

图2 二氢欧山芹醇当归酸酯对照品HPLC

图3 独活饮片供试品HPLC

图4 独活阴性对照品HPLC(甲醇空白)

2.3 独活原药材前处理方法[3]

取独活药材，除去泥沙、杂草、非药用部位和虫蛀、霉败、腐烂品，将其放入沥箕内，用自来水淋湿，旋转沥箕(模拟滚筒式洗药机)1 min，再用自来水冲洗1 min，如此操作数次，直至洗净为止(无肉眼可见泥沙灰尘等，约8 min)。

2.4 单因素考察闷润工艺[3]

称取药材3份，每份100 g ，用自来水淋洗使药材表面全部湿润，将其放入广口玻璃瓶中，密闭，分别置于20 ℃、30 ℃、40 ℃电热培养箱中，并不时摇动瓶子，待表面无明显水迹，用喷壶均匀喷入清水，边喷水边翻动药材，使药材表面全部湿润(约5%)，装入盆中盖紧，再置于电热培养箱中，并不时摇动瓶子，待表面无明显水迹后再喷水、闷润，直至润透(内外含水一致、全体软化)，记录不同温度软化所需时间，见表1。

表1 独活原药材闷润温度与时间考察结果

表1实验结果表明，淋洗5 min后，闷润2 h，取出，均匀喷水4.3 g，再闷润2 h，须根吸水过多，颜色很深，呈褐色，主根颜色鲜艳色白，故须根与主根需分别润。从不同温度闷润结果来看，20 ℃、30 ℃饮片颜色好，40 ℃独活大饮片颜色较深，因20 ℃需要6 h方可软化，而30 ℃只需4 h即可软化，故闷润温度定为30 ℃。

独活的最佳闷润工艺为：取独活，分离主根与须根，分别淋洗5 min，主根密闭润2 h，取出喷水4.3%，再闷润2 h；须根淋洗后敞开润30 min即可切片，主根密闭润4 h时，药材吸水率达13%～19%左右即可，二者切片，切面颜色均佳。

但考虑到工业化生产分离主根与须根分别进行淋洗与闷润费时费力，人工成本过高，故未采用，正交设计与验证实验仍采用主根与须根同时淋洗、闷润。

2.5 正交设计试验优选独活最佳切片(炮制)工艺参数

2.5.1 正交设计试验因素水平的确定 影响饮片质量的因素主要有鼓风干燥温度、铺层厚度、翻动次数，考察因素水平参照文献确定[4-8]，见表2。

表2 独活切片工艺正交设计试验因素水平

2.5.2 正交设计试验安排及数据统计处理 以蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯的含量百分率为评价指标，采用L9(34)正交设计试验表进行试验，其组合方案见表3。饮片样品制备：取净药材约900 g，按大小品质均分为9份，每份100 g，分别淋洗5 min，30 ℃闷润2.0 h，每份喷水4.3 g，再闷润2 h，均切3 mm厚片，湿独活饮片按表2的因素水平与表3的组合试验号进行实验，对9个试验号所得饮片按照“2.1”“2.2”项下评价指标及方法进行测定，结果见表3，极差分析见表4，方差分析见表5。

表3 独活饮片炮制正交设计试验安排及实验结果

表4 独活炮制正交设计试验极差分析结果

由表4、表5结果可知，以蛇床子素的含量百分率为评价指标时，因素水平皆无统计意义，各因素可取任意水平。以二氢欧山芹醇当归酸酯的含量百分率为评价指标时，A因素有统计意义，其水平数按最佳确定，A因素取2水平；从降低成本考虑，B因素取3水平，C因素取1水平；综合分析可得，A因素取2水平，B因素取3水平，C因素取1水平，最终确定最佳组合为A1B3C1，即独活最佳切制炮制工艺为50℃鼓风干燥，切3 mm厚片，堆放2 cm厚，翻动1次。

表5 独活炮制正交设计试验方差分析(完全随机模型)

2.5.3 独活炮制正交设计验证试验 取除去杂质和泥沙的独活原药材3份，每份1 000 g，淋洗5 min，装入不锈钢桶中盖紧密闭2 h，分别置于30 ℃电热培养箱中，用喷壶均匀喷入清水4.3%，边喷水边翻动药材，使药材表面全部湿润，闷润2 h，再按正交设计试验确定的最佳组合因素水平，即切3 mm厚片，堆放2 cm厚，50 ℃鼓风干燥，翻动1次，进行验证试验，并与同批次原药材3份样品比较，按“2.1”“2.2”项下评价指标及方法进行测定，结果见表6。

表6 独活炮制正交设计验证试验

由表6结果可知，浸出物、蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯含量百分率均优于正交设计中最佳的6号，量值传递率均达到115%以上，表明优选出的工艺稳定可靠，故确定独活饮片最佳炮制工艺为50 ℃鼓风干燥，切3 mm厚片，堆放20 mm厚，翻动1次。

3 讨论

独活炮制工艺中的干燥时间以干燥至含水量达5%为标准，故无须考察干燥时间，而且正交设计试验9个样品的含水量皆一致，使实验结果具有可比性。

本实验闷润采用恒温恒湿培养箱，不仅可控制温度，还可控制湿度，设定RH=80%，使实验过程中闷润的湿度参数一致，结果具有可比性。

理论上来讲，鼓风干燥温度越低，蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯被破坏的量越少，则含量越高，但鼓风干燥温度越低，干燥时间越长，蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯被破坏的量则越多，故干燥温度和时间两者有一使蛇床子素、二氢欧山芹醇当归酸酯被破坏最少的最佳平衡值，故正交设计试验结果优选出了最佳的鼓风干燥温度为50 ℃，而不是40 ℃。

独活切片厚度确定为切3 mm厚片，系因切太厚不宜干燥，太薄则干燥后易碎，开始手工切制薄厚不均，后改用切药机切制，发现切成3 mm厚片最佳，故未列入正交设计试验表中考察。

4 结语

随着科学技术的进步，中药炮制逐步走向现代化、智能化，如干洗法清洗药材，采用切药机切片，无需闷润软化，更不需要加热干燥。本实验开始采用手工切片，因切的厚度不一，改用切药机切片，发现可以不经闷润过程，药材淋洗后，沥干水可直接用切药机切片，若采用干洗技术，无需加热，则可彻底颠覆传统的炮制方法。