宫颈癌组织FR-、TopoⅡ蛋白表达及意义

周顺平

（河南红阳工业有限责任公司职工医院妇产科，河南 南召 474678）

宫颈癌是女性常见恶性肿瘤,主要发生于宫颈阴道部或移行带及宫颈管内膜交界处,其中人乳头状瘤病毒感染、性激素失调、早婚早育及子宫颈糜烂症均为宫颈癌的诱发因素,近年来发病率呈逐年升高趋势[1]。文献[2，3]提示多种细胞因子与宫颈癌的侵袭和转移机制具有密切关系,多种因素共同影响癌细胞的快速增值、DNA 合成及修复，调控宫颈癌的发生发展，其中叶酸在癌细胞的DNA 高效分裂具有重要作用,因而转运叶酸的受体α 成为了研究热点，而FR-α 在黏液腺癌及部分脑肿瘤中均具有重要作用。TopoⅡ能够通过调节核酸结构的动态变化而调节DNA 修复、复制及转录等生命活动[4]。但FR-α、TopoⅡ蛋白在宫颈癌组织中表达及意义研究鲜有报道。因而，本研究深入探讨了FR-、TopoⅡ蛋白在宫颈癌组织、 癌旁组织及正常宫颈组织中的表达情况及与宫颈癌临床病理特征关系,旨在为寻求新的靶向治疗提供一定的帮助和依据,现报告如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取 2017 年 1 月至 2019 年 2 月在我院手术切除的宫颈癌组织、 癌旁组织标本92例,纳入标准：⑴均经病理学确诊；⑵术前未行放化疗等抗肿瘤治疗； ⑶临床资料保存完整。排除标准：⑴合并有其他系统肿瘤者；⑵合并有免疫系统性疾病、严重肝肾功能障碍、血液系统疾病等。同时选取正常宫颈组织标本78 例，宫颈癌和正常宫颈组织患者一般资料比较差异无统计学意义 （P＞0.05）,见表 1。

表1 宫颈癌和正常宫颈组织一般资料比较

1.2 实验方法 免疫组化染色法检测各组织标本FR-、TopoⅡ表达，常规石蜡切片后脱蜡处理，梯度水化后H2O2（3%）抑制内源性过氧化酶，枸橼酸钠（0.01mol/L） 抗原修复后，100℃热水 10min 加热，PBS 洗片后BSA（10%）封闭非特异性位点10min，4℃一抗孵育过夜， 以PBS 代替一抗呈阴性对照，加入生物素标记二抗，37℃下孵育30min，PBS 冲洗3 次，DAB 显色后苏木素复染，脱水、透明、干燥及封片。

1.3 结果判断 采用半定量积分方法,染色强度：无着色为0 分,淡黄色为1 分，棕黄色为2 分，棕褐色为3 分；阳性细胞比例＜1%为 0 分,1%～10%为 1 分,11%～50%为 2 分,51%～74%为 3 分,≥75%为 4 分。染色强度和阳性细胞比例得分之积≥3 分为阳性表达[5]。

1.4 统计学处理 采用SPSS22.0 进行统计分析，计量资料采用表示，组间比较使用t 检验，计数资料比较使用χ2检验，相关性采用Spearman 秩相关分析。检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 宫颈癌组织、 癌旁组织和正常宫颈组织FR-、TopoⅡ蛋白表达 宫颈癌组织FR-、TopoⅡ蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织和正常宫颈组织 （P＜0.05),而癌旁组织与正常宫颈组织间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表 2。

表2 宫颈癌组织、癌旁组织和正常宫颈组织FR-、TopoⅡ蛋白表达n（%）

2.2 FR-、TopoⅡ蛋白表达与宫颈癌临床病理关系宫颈鳞状细胞癌、TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴结转移宫颈癌组织FR-α 阳性表达率明显高于宫颈腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移宫颈癌组织（P＜0.05）； TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴结转移宫颈癌组织TopoⅡ蛋白阳性表达率明显高于宫颈腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移宫颈癌组织（P＜0.05）。见表 3。

表3 FR-、TopoⅡ蛋白表达与宫颈癌临床病理关系n（%）

2.3 FR-、TopoⅡ蛋白表达相关性 将宫颈癌组织FR-与TopoⅡ蛋白表达进行相关性分析，结果显示FR-与 TopoⅡ蛋白表达呈正相关 （rs=0.392，P＜0.05），见表 4。

表4 FR-、TopoⅡ蛋白表达相关性

3 讨论

宫颈癌临床发生率仅次于乳腺癌,属于临床常见恶性肿瘤,其中我国宫颈癌的发生率约占全球宫颈癌总病例的30%左右[6]。宫颈癌的发生、发展受到多种基因的调控，研究[7]发现多种存在致癌可能性的环境共同作用可诱发抑癌基因和原癌基因的功能障碍，进而导致正常细胞出现恶性病变。现临床关于宫颈癌的发病机制尚不完全明确,普遍认为有多因素参与,其发生、发展涉及较多因素，均可能促进了疾病的发生、发展[8,9]。

宫颈癌的发生、发展属于复杂的过程，相关研究发现叶酸受体与宫颈癌的发生、发展可能存在重要关系，其中 FR-α、FR-β 及 FR-γ 均是叶酸受体的主要类型。早期研究[10]发现FR-α 在卵巢癌的早期诊断过程中具有较高的灵敏度和特异性,但新阶段与FR-α 与宫颈癌的相关性研究资料较为缺乏。文献[11,12]提示TopoⅡ能够评估宫颈癌患者预后，进而指导治疗方案的制定并在疾病的发生、发展中具有重要作用。本研究发现宫颈癌组织FR-、TopoⅡ蛋白阳性表达率明显高于癌旁组织和正常宫颈组织。该结果提示FR-、TopoⅡ蛋白具有成为诊断宫颈癌重要指标的潜力。TopoⅡ主要位于正常细胞的S、G、M 期，可在 G2/M 期达至峰值，进而参与细胞的分裂过程,属于临床细胞分裂的重要特异性指标[13]。故而，宫颈癌组织的TopoⅡ阳性表达要明显高于癌旁组织和正常宫颈组织。

FR-、TopoⅡ蛋白表达与宫颈癌临床病理关系研究结果显示宫颈鳞状细胞癌、TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴结转移宫颈癌组织FR-阳性表达率明显高于宫颈腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移宫颈癌组织； TNM 分期Ⅲ期、中低分化和有淋巴结转移宫颈癌组织TopoⅡ蛋白阳性表达率明显高于宫颈腺癌、Ⅰ～Ⅱ期、高分化和无淋巴结转移宫颈癌组织。该结果说明宫颈癌组织FR-、TopoⅡ蛋白可参与宫颈癌疾病进展及转移侵袭过程。TopoⅡ是机体常见核蛋白，在DNA 修复、复制及转录等过程均具有重要作用,还能在一定程度上调节核酸结构变化，进而维持机体的生命系统运转。因而，为提高宫颈癌的治疗效果，需要及时完善宫颈癌组织FR-与TopoⅡ蛋白等因子的检查,指导术后恢复治疗；通过对宫颈癌组织FR-与TopoⅡ蛋白的检查能够动态了解患者疾病发展,加强治疗的针对性，进而采取及时有效的干预措施，加速患者的恢复。

本研究将宫颈癌组织FR-与TopoⅡ蛋白表达进行相关性分析,结果显示FR-与TopoⅡ蛋白表达呈正相关。该结果说明宫颈癌组织FR-与TopoⅡ可能存在某种作用机制，在宫颈癌的发生、发展过程中相互调节并发挥作用,但具体机制还有待进一步探讨。国外研究[14]发现细胞分化程度越低，TopoⅡ含量越高，其表达水平与基地细胞增生、细胞的异型性均具有密切相关性,在外阴鳞癌及口腔上皮鳞癌中肿瘤细胞的分级均与TopoⅡ正相关,这也与本研究结论一致。相关研究[15,16]发现叶酸与多种药物（血清白蛋白、辣根过氧化物酶等）的共价偶联，通过FR-介导进入细胞,证实细胞不仅是通过吸收叶酸到细胞质中发挥作用而是以功能活性的形式参与到细胞蛋白的合成过程中,这也为叶酸受体与癌细胞的作用机制提供了理论基础。

综上所述, 宫颈癌组织FR-、TopoⅡ蛋白表达明显上调,与患者临床病理有一定关系。