GLP-1R基因多态性与2型糖尿病患者利拉鲁肽疗效的相关性研究

王飞羽 江震 刘亦伟

摘 要 目的：探讨2型糖尿病（T2DM）患者胰高血糖素样肽-1受体（GLP-1R）基因单核苷酸多态性与利拉鲁肽疗效的关联性。方法：入选的T2DM患者给予利拉鲁肽12周，测定治疗前后糖化血红蛋白（HbA1c）水平。同时对其GLP-1R基因单核苷酸多态性（rs6923761、rs10305420、rs3765467、rs2254336）进行检测，统计分析降糖疗效与基因多态性的相关性。结果：最终纳入的62例患者，与野生型相比，HbA1c值在s3765467纯突变型（AA）患者中下降更显著（P<0.05），但在其余各基因型患者间无显著差异。结论：rs3765467基因多态性可能影响利拉鲁肽的降糖疗效，未发现rs6923761、rs10305420、rs2254336基因多态性对利拉鲁肽降糖疗效的影响。

关键词 2型糖尿病 利拉鲁肽 基因多态性 降糖疗效

中图分类号：R977.15； R587.1 文献标志码：B 文章编号：1006-1533（2021）23-0021-04

基金項目：福建省中青年教师教育科研项目（JT180186）；福建医科大学启航基金项目（2018QH1071）

The relationship between GLP-1R gene polymorphism and the efficacy of liraglutide in patients with type 2 diabetes

WANG Feiyu1， JIANG Zhen2， LIU Yiwei1

（1. Department of Pharmacy； 2. Department of Endocrinology， the First Affiliated Hospital of Fujian Medical University， Fuzhou 350005， China）

ABSTRACT Objective： To explore the association between the single nucleotide polymorphisms （SNPs） on a glucagonlike peptide-1 receptor （GLP-1R） gene and the efficacy of liraglutide in patients with type 2 diabetes （T2DM）. Methods： The T2DM patients were treated with liraglutide for 12 weeks and glycosylated hemoglobin （HbA1c） levels were determined before and after administration， also GLP-1R （rs6923761， rs10305420， rs3765467， rs2254336） genotypes were measured. The relationship between the hypoglycemic effect and the gene polymorphism was analyzed. Results： Sixty-two patients were finally enrolled and the HbA1c levels in the patients with rs3765467 pure mutant （AA） decreased more significantly compared with the wild type （P<0.05）. There were no significant differences among the patients with other genotypes. Conclusion： The rs3765467 gene polymorphism may affect the hypoglycemic effect of liraglutide， and no effect of rs6923761， rs10305420， rs2254336 gene polymorphism on the hypoglycemic efficacy of liraglutide has been found.

KEY WORDS type 2 diabetes； liraglutide； gene polymorphism； hypoglycemic efficacy

利拉鲁肽作为胰高血糖素样肽-1受体激动剂（glucagon-like peptide-1 receptor agonist， GLP-1RA）的代表，通过葡萄糖依赖的方式促进胰岛素的分泌及抑制胰高血糖素的分泌来达到降糖的目标，同时能够抑制食欲中枢，减少食物的摄入来达到降低体重的作用[1]。利拉鲁肽在有效降糖的同时，具有明确的心血管获益，近年来在糖尿病指南中的地位逐步提高[2]。

临床实践中发现利拉鲁肽的临床疗效存在可能与基因多态性相关的个体差异。利拉鲁肽通过与GLP-1R结合来发挥相应的作用。GLP-1R基因变异可导致GLP-1R与GLP-1之间的亲和力下降，改变GLP-1R对体内的反应[3]。人类GLP-1R基因由13个外显子和12个内含子组成，目前研究较多的与GLP-1R功能改变相关的单核苷酸多态性（single nucleotide polymorphism，SNP）主要集中在rs6923761、rs3765467、rs10305420、rs2254336[4]。多项研究表明，GLP-1R的相关基因突变对GLP-1RA的降糖及降低体重的效果存在潜在影响，但在不同人群中结论存在差异[5-7]。因此，本研究对使用利拉鲁肽的2型糖尿病（T2DM）住院患者进行GLP-1R基因多态性研究，进一步了解GLP-1R基因多态性对利拉鲁肽治疗作用的差异，以期对糖尿病个体化治疗提供一定的依据。

1.1 研究方案

选取2019年1月至2020年12月在我院内分泌科住院期间使用利拉鲁肽的T2DM患者作为研究对象。纳入标准：①年龄≥18岁；②体质量指数（BMI）≥24 kg/m2；③首次使用利拉鲁肽；④患者的空腹血糖（FBG）≥7.0 mmol/L，或餐后2 h血糖（2h PBG）≥11.1 mmol/L，糖化血红蛋白（HbA1c）≥6.5%；排除标准：①有严重并发症患者；②严重肝肾功能不全患者；③精神、意识障碍疾病患者。本研究经福建医科大学附属第一医院医学伦理委员会批准，且所有参与患者均签署知情同意书。

1.2 治疗方法

纳入研究时降糖方案修改为二甲双胍/二甲双胍及胰岛素加利拉鲁肽。利拉鲁肽注射剂（规格为3 mL： 18 mg，国药准字J20160037，诺和诺德制药有限公司）皮下注射，初始剂量为0.6 mg/d，如无严重不良反应，则1周后日剂量增至1.2 mg或1.8 mg，最大剂量不超过1.8 mg/d。

1.3 基因型检测

使用利拉鲁肽前采集患者外周静脉血5 mL，使用血液基因组DNA快速抽提试剂盒（生工生物工程（上海）股份有限公司）对血液样品进行DNA抽提。完成后，使用Qubit 2.0对获得的DNA进行浓度测定，以确保获得高质量的基因组DNA。采用多重PCR技术结合高通量测序（next-generation sequencing，NGS）技术的靶向测序法，检测GLP-1R（rs6923761、rs3765467、rs10305420、rs2254336）的基因分型，即对以上多个检测位点设计特异性引物，利用多重PCR，同时扩增多个核酸片段，之后结合NGS结果实现对样本多位点的高深度检测。

1.4 相关指标检测

记录患者使用利拉鲁肽前的相关指标，包括性别，年龄，BMI，FBG、2h PBG、HbA1c、空腹C肽和餐后C肽水平。使用利拉鲁肽3月后，再次测定HbA1c水平，以与基线值比较的差值△HbA1c评估其降糖疗效。

1.5 统计分析

2.1 研究对象基本资料

共纳入了62名T2DM患者，他们的年龄、性别、BMI、FBG、2h PBG、HbA1c、空腹C肽及餐后C肽的指标比较，差异均无统计学意义（P>0.05，表1）。

2.2 基因分型频率分布

本研究人群SNP rs6923761、rs10305420、rs2254336、rs3765467的基因型及等位基因频率详见表2，其分布均符合Hardy-Weinberg遗传平衡定律结果，具有群体代表性。

2.3 基因多态性对患者降糖疗效的影响

HbA1c指标在rs6923761 GA基因型患者治疗前后无显著下降，而在其余基因型患者中均有显著下降（P<0.05）；rs6923761、rs3765467、rs10305420中不同基因型患者組间降糖疗效无显著性差异，而rs3765467 AA突变型与野生型GG患者相比，HbA1c指标下降更显著（P<0.05，表3）。

rs6923761为研究最多的GLP-1R基因的SNP，在白种人中突变率较高，A等位基因突变率为53%～58%，在汉族人群突变频率为3.7%，此突变会降低胰岛素的分泌量，从而影响其降糖、降体质量的效果[5-9]。在我们的研究中，突变频率与之前报道的结果接近，我们的结果也显示表明携带A等位基因的患者可能影响利拉鲁肽的降糖疗效。GLP-1R rs6923761位点突变可能降低利拉鲁肽与GLP-1R的亲和力，进而减少胰岛素分泌，从而影响患者的降糖疗效。

Jesnterle等[10]开展了一项研究，评估rs10305420基因变异对利拉鲁肽治疗多囊卵巢综合征妇女体重的影响，与CC基因型相比，T等位基因的携带者治疗效果较差，此基因对糖尿病患者降糖疗效的影响未见报道。我们的结果表明，两种基因型对利拉鲁肽降糖疗效没有显著性差异。

最新的一项研究[11]以152例超重的T2DM患者为研究对象，探索rs2254336和rs3765467基因多态性与利拉鲁肽减重疗效及不良反应的相关性。研究表明，rs2254336及rs3765467基因多态性与利拉鲁肽相关的体重减轻效果无相关性，而与胃肠道不良反应相关。在一项韩国的研究中[12]，rs3765467携带A等位基因的患者能够获得更好的降糖疗效。在我们的研究中，rs3765467携带A等位基因也更容易降低HbA1c水平，与上述韩国的研究结果的一致。rs3765467的基因变异可能调节细胞的信号传导，从而改变利拉鲁肽与GLP-1R的结合能力，从而影响降糖疗效。但我们的研究中该位点突变率低，仅有2例突变纯合子，提示我们可扩大样本量来进一步验证。

GLP-1R基因多态性对GLP-1治疗糖尿病临床疗效及不良反应的影响尚未完全明确，我们的研究结果与既往的已有研究结果有一致或相反的结果。可能是我们纳入的人群遗传背景较为单一，样本量较少，未进行长期随访，试验结果存在一定局限性。后续将纳入更多人群及进行更长时间的随访来验证GLP-1R基因多态性对于糖尿病患者临床疗效的影响。

参考文献

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