电针足三里对重度失血性休克大鼠肝脏损伤的影响△

陆化梅 于国军 郭永娟 耿智隆

(1.河南省洛阳正骨医院(河南省骨科医院)麻醉科 洛阳 471000；2.解放军联勤保障部队第940医院麻醉科(原兰州军区总医院) 兰州 730000)

研究表明[1～2]，穴位电针可以有效抑制脑、心等器官缺血再灌注后炎性细胞浸润，调控炎性信号传导通路，改善再灌注损伤，但尚无对失血性休克后肝损伤的影响。此项研究在重度HS大鼠模型的基础上，探讨电针刺激足三里疗法应用于HS与液体复苏后肝脏的效果及可能的机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

选用雄性成年健康SD大鼠，体重约280～310g，购于兰州大学动物中心。所有动物适应性饲养5d，温度22℃～26℃，湿度40%～70%，自由进食水。

1.2 实验方法

1.2.1重度失血性休克模型制备及穴位电刺激

采用改良wigger's法[3]复制失血性休克模型, 3%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，经右侧股动脉放血，30min内使MAP降低至35mmHg，通过放血或自体血回输维持MAP 35±5mmHg水平60min，复制重度失血性休克模型。实验全程动物保持自主呼吸，肛温控制在(37±0.5)℃。穴位定位参照《腧穴名称与定位》[2]，采用0.3mm×25mm针灸针，刺入双侧足三里穴，进针深度5mm，接电针仪，疏密波2/15Hz，强度0.1mA，30min。

1.2.2实验方案及分组

随机数字表法将60只大鼠(n=10)分为6组：对照组(C组)只麻醉，置管，不放血；休克组分为单纯休克组(S)和休克复合穴位电针组(SEN)。重度失血性休克模型制备成功后，休克60min时间点处死大鼠，取标本保存。复苏组分为乳酸林格液复苏组(LR)、乳酸林格液复合穴位电针1组(LREN1)和乳酸林格液复合穴位电针2组(LREN2)。复苏方案：各复苏组于休克60min后行3倍失血量LR液复苏处理，30min内均速输注。LREN1组液体复苏同时以相同参数在相应位置电刺激30min。LREN2组复制重度失血性休克模型同时相应位置相同电针刺激维持30min。复苏液输注结束，生理盐水6ml/kg·h持续输注240min。

1.2.3指标检测

1.2.3.1静脉血AST、ALT检测

于未休克时(基础值)、休克60min、复苏后240min 这3个节点分别抽取1ml的股动脉血，同时等量血经股静脉回输，测定AST、ALT。

1.2.3.2肝组织TNF-α、MIP-2蛋白含量及MPO活性测定

休克组在休克60min，其余各组在复苏后240min，采用穿刺心脏法处死大鼠，取部分肝组织比色法测定MPO活性； ELISA法测定TNF-α与MIP-2。

1.2.3.3肝组织病理学观察

休克组在休克60min，其余各组在复苏后240min，处死大鼠，采集左叶肝组织(大小为0.1cm见方)，制作电镜标本，观察肝组织超微结构改变。

1.3 统计学处理

2 结果

2.1 血内AST、ALT的变化

与C组相比，在休克后60min、复苏后240min这2个节点其余各组的血浆ALT、AST升高(P<0.05)；3个复苏组在复苏后240min血浆ALT、AST含量升高(P<0.05)；对比LR组，另2个复苏组显著偏低(P<0.05)；与LREN1组比较，LREN2组复苏后240minAST、ALT降低(P<0.05)，见表1。

2.2 肝组织中TNF-α、MIP-2表达及MPO活性的变化

与休克各组比较，液体复苏各组以上各指标升高(P<0.05)；与LR组比较，LREN1及LREN2组TNF-α、NF-κB、MIP-2明显降低，MPO活性降低(P<0.05)；与LREN1组比较，LREN2组以上各指标明显降低(P<0.05)，见表2。

表1 各组大鼠血浆AST、ALT含量变化

表2 各组TNF-α、MIP-2表达及MPO活性

2.3 肝组织病理学改变(图1)

C组肝细胞超微结构正常；S组细胞膜和核膜变形，线粒体肿胀透亮化，嵴明显疏松，毛细胆管胆汁淤积；SEN组，肝细胞线粒体肿胀轻度异常，毛细胆管正常； LR组，细胞染色质边集，局灶性肝细胞见溶解坏死现象，核膜消失，线粒体明显肿胀； LREN1组，肝细胞核轻度变异，线粒体肿胀，粗面内质网扩张；LREN2组，肝血窦腔轻度增大，线粒体损伤较轻。

C组

S组

LR组

LREN1组

LREN2组

3 讨论

本实验中，各组大鼠失血量、MAP基础值比较差异无统计学意义，失血性休克后MAP降低，液体复苏后MAP上升，各组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。与休克各组比较，各复苏组血浆AST、ALT含量明显升高，肝组织TNF-α及MIP-2等细胞因子生成明显增加，超微结构显示肝细胞膜及核膜变形，线粒体肿胀，嵴明显疏松，空泡形成。虽然失血性休克导致了肝损伤，但复苏后肝脏损伤加重，出现了再灌注损伤。3个复苏组中，以LR组肝脏损伤最重，炎症反应最剧烈，超微结构显示线粒体高度肿胀，粗面内质网脱颗粒，局灶性肝细胞溶解坏死等。与LREN1组比较，LREN2组肝损伤明显减轻，表明在出血性休克同时电刺激双侧足三里肝脏保护效果最好。

已有研究表明[4]在促肾上腺皮质激素 (ACTH)和高张盐水等措施逆转失血性休克时,胆碱能抗炎通路也发挥着必不可少的重要作用，抑制TNF-α等炎症因子的生成。电针刺激足三里可对迷走神经胆碱能纤维施以有效刺激，使胆碱能抗炎途径活化。MIP-2属于一类趋化因子，其特定靶细胞为中性粒细胞，可评估炎症活动情况[5]。本研究显示，失血性休克的同时电针刺激双侧足三里，能够抑制复苏后TNF-α、中性粒细胞趋化因子MIP-2的生成，阻止其之间的相互作用，减少中性粒细胞在肝组织中聚集，进而抑制肝组织炎症反应起到保护作用，其机制或许是通过激活胆碱能抗炎通路实现的。