自身抗体检测在自身免疫性肝病患者的临床应用价值研究

李阳超

(简阳市人民医院 检验科，四川 简阳)

0 引言

自身免疫性肝病 (autoimmune liver diseases， AILD) 是指由于自身免疫系统功能紊乱而引发的肝细胞或胆管上皮细胞炎症性病变[1]， 包括自身免疫性肝炎(autoimmune hepatitis，AIH)、原发胆汁性肝硬化(primary biliary cirrhosis， PBC)、原发硬化性胆管炎(primary sclerosing cholangitis， PSC)及重叠综合征[2]。近年来，随着诊疗水平的逐渐提高，AILD 患者检出率不断上升。目前已知与AILD 相关的自身抗体包括抗核抗体(autinu- clear antibodies，ANA)、抗肝肾微粒体抗体(antibody to liver/kidney microsome，抗-LKM)、抗1 型肝细胞溶质抗原抗体(anti-liver cytolol antgen type 1，抗-LC1)、抗可溶性肝抗原抗体(antibody against the solube liver antigen，抗-SLA)/抗肝胰抗原抗体(antibody anainst the liver-pancreas antigen，抗-LP) 和抗线粒体抗体(antimitochondrial antibody，AMA)等[3]。本研究旨在探讨血清自身抗体检测在AILD 患者的临床应用价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

从医院HIS 和LIS 收集患者资料，选取2018 年3 月到2019 年3 月简阳市人民医院检查就诊的AILD 患者82 例，并选择同期入院就诊的82 例病毒性肝炎患者作为对照组。AILD 患者的临床诊断及分型均符合《自身免疫性肝病诊断和治疗指南》中的诊断标准[4]；病毒性肝炎患者的临床诊断符合《病毒性肝炎防治方案 (试行)》中的诊断标准[5]。试验组患者中男性18 例，女性64 例，年龄26-68 岁，平均(44.3±8.5)岁；对照组患者中男性20 例，女性62 例，年龄25-70 岁，平均(45.1±9.1)岁。两组患者性别构成比和年龄比较，差异无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。

1.2 方法

所有患者均空腹8-12 小时，清晨于患者肘静脉抽取空腹静脉血5mL，每位患者各抽取2 个红管，孵育30min 后，使用离心机(3000r/min)离心10min 分离血浆待测。1、ANA采用间接荧光免疫法(IIF)检测，使用德国欧蒙公司试剂盒，将待测血清用0.01mol/L PH 值7.2 的磷酸盐缓冲液(PBS)作1：100 稀释，滴加25ul 于抗原基质片上，反应30min，洗涤浸泡并放置摇床上震荡5min，加入20ul 采用异硫氰酸荧光素(FITC)标记羊抗人IgG 抗体的荧光二抗避光室温温浴30min，洗涤浸泡并放置摇床上震荡5min，加入缓冲甘油封片后荧光显微镜下判读结果，检测结果以阳性或阴性表示。2、采用免疫印迹条带法检测AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1、Sp100、gp210 六种抗体，试剂盒为深圳市亚辉龙生物科技股份有限公司原装试剂，严格按照使用说明书要求操作检测和判断结果，检测结果以阳性或阴性表示。

1.3 统计学分析

数据分析采用SPSS 19.0 软件分析，计量资料采用(Mean±SD)表示，计数资料采用N(%)表示；两样本均数比较采用t 检验，率的比较采用χ2检验，以P＜0.05 为差异具有统计学意义。

2 结果

2.1 试验组和对照组患者抗体检出率对比分

试验组患者自身免疫性抗体ANA、AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1、Sp100、gp210 阳性率均显著高于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 试验组和对照组患者抗体检出率对比分析[n(%)]

2.2 不同类型自身免疫性肝病抗体检出率对比分析

AIH 患者以自身免疫性抗体ANA、AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1 阳性为主，PBC 患者以自身免疫性抗体ANA、AMA-M2、Sp100、gp210 阳性为主，见表2。

表2 不同类型自身免疫性肝病抗体检出率对比分析[n(%)]

3 讨论

目前国内外尚未阐明AILD 发病的机制，但相关研究显示AILD 的发病率存在明显的性别差异，文献报道女性AILD 发病率远远高于男性。本研究中AILD 患者中男女比例为9:32，与其他文献报道基本相符。查阅相关文献资料发现[6]，女性由于绝经后雌激素水平的改变和性染色的不同加之怀孕期间母体与胎儿之间不断发生物质交换等原因，自身免疫系统容易发生紊乱，容易比男性更容易患自身免疫性疾病。但相关的理论研究和实验研究还在不断的探索之中。

本研究显示，AILD 患者自身免疫性抗体阳性率远远高于病毒性肝炎患者，提示自身免疫性抗体的检查对于临床对AILD 的诊断和辅助诊断具有一定意义。在AIH 患者中，抗体阳性率最高的是ANA，高达86.57%，其次是AMA-M2 和SLA/LP。ANA 是抗各种细胞核成分抗体的泛指，虽然其在AIH 患者阳性率最高，但缺乏特异性，ANA 不仅存在于PBC和PSC 等自身免疫性肝病患者血清中，同样也存在于其他自身免疫性疾病患者(如类风湿关节炎、SLE 等)血清中，甚至存在于各种病毒性、酒精性肝炎等患者血清中。但有研究表示，高滴度的ANA 对AIH 的诊断价值较大[7]。AMA 是以线粒体内膜上某些物质作为靶抗原的一类抗体，根据靶抗原的不同，可分为1-9 个亚型，其中AMA-M2 是诊断PBC 最为特异的一种抗体，阳性率可高达80%以上。目前与PSC 相关的自身抗体研究较少，最新一项研究表明IgA 型抗-GP2 在PSC 患者中持续检出，其对于PSC 风险分层具有一定的临床应用价值[8]。本研究显示，虽然AIH 患者以自身免疫性抗体ANA、AMA-M2、SLA/LP、LKM-1、LC1 阳性为主，PBC 患者以自身免疫性抗体ANA、AMA-M2、Sp100、gp210 阳性为主，但PSC 患者并未发现特异性的抗体。对不同类型的AILD，自身免疫性抗体类型和阳性率有很大差别。这就为临床医生在自身抗体谱的选择带来了挑战，如何有针对性的为患者开展特异性强，灵敏度高的自身抗体检测，将是检验人员和临床医生共同努力的方向。

终上所述，自身免疫抗体检测对AILD 的诊断有一定的应用价值，不同疾病类型具有不同类型的自身免疫性抗体谱。针对不同类型疾病，临床医生有针对性地开展具有特征性的抗体检测很有必要。