定时人工授精后通过不同方法增加P4浓度对奶牛妊娠率的影响

2021-01-11张萌和东迁杨玉东文汇玉董雪岩罗芳王俊奎陈丽尧陶金忠

中国奶牛 2020年12期

张萌，和东迁，杨玉东，文汇玉，董雪岩，罗芳，王俊奎，陈丽尧，陶金忠

（1.宁夏大学农学院，银川 750021；2.宁夏农垦贺兰山奶业有限公司，银川 750021）

胚胎和胎儿丢失是造成奶牛不能妊娠和繁殖失败的主要原因，尽管人工授精后的受精率约为90%，但产犊率只有30%～50%[1]。奶牛大部分胚胎丢失发生在母畜和胚胎建立联系之前的妊娠早期[2]，70%～80%的胚胎丢失发生在人工授精后的前两周，在授精后前7d的胚胎死亡比例明显比其他时期高得多[3]。早期胚胎损失成为了影响奶牛繁殖力的主要因素。

孕酮（P4）在维持妊娠中起着重要的作用，妊娠早期P4不足会导致胚胎损失[4]。Ahmad等[5]发现在人工授精后6～7d，妊娠奶牛体内P4浓度显著高于未妊娠组。奶牛授精后第4～8天乳中P4浓度与早期胚胎存活率之间存在正相关关系，早期的P4浓度过低影响胚胎发育能力[6,7]。人工授精后的第6天，P4浓度低于正常值可导致妊娠失败。妊娠奶牛体内的P4浓度上升较早，且比未妊娠奶牛浓度更高[8]。Starbuck等[9]研究发现，奶牛在排卵后第5天乳中P4浓度在7～8ng/mL之间，且与最高妊娠率相关，而浓度较低与降低生育能力相关。有研究发现，从人工授精后第3～7天开始外源性补充P4能提高奶牛生育能力[10]。Stevenson等[11]研究发现，在人工授精后第13～18天增加P4浓度能提高妊娠率。但也有研究发现在妊娠早期补充P4对妊娠率没有影响[12,13]，补充P4最有效的时间和剂量是目前研究的关键。本研究通过利用不同方式及不同剂量的处理方法增加P4浓度，探究其与奶牛妊娠的关系，以期了解不同途径增加P4对奶牛妊娠率的影响。

1 材料与方法

1．1 试验动物和预同期处理方案

在某大型集约化奶牛场，随机选择胎次、年龄、配种日龄和体况相近（体况评分BCS2.75左右）的健康荷斯坦牛285头。在产后42±3d肌肉注射PG；56±3d肌肉注射PG；67±3d肌肉注射GnRH和阴道内放置P4阴道栓（CIDR）；74±3d肌肉注射PG和取出阴道内放置的CIDR，紧接着24h后肌肉注射PG，然后在32h后肌肉注射GnRH，16h后对发情奶牛进行人工授精。

1．2 试验药品

试验药品黄体酮注射液（P4）由宁波市三生药业有限公司生产，P4阴道栓（CIDR1380）由新西兰DCE国际有限公司生产。

1．3 试验分组及处理

CIDR P4D组：试验奶牛40头，定时人工授精后第4天将CIDR放入阴道内，第9天取出。

CIDR P13D组：试验奶牛40头，定时人工授精后第13天将CIDR放入阴道内，第18天取出。

P4P20组：试验奶牛48头，定时人工授精后第5天一次肌肉注射P420 mg/头。

P4P40组：试验奶牛44头，定时人工授精后第5天一次肌肉注射P440mg/头。

对照组：选取同一时期场内定时人工授精后不做处理的奶牛113头，作为对照组。

1．4 妊娠率及返情率的检测

使用B超于人工授精后第32天进行妊娠检测，通过B超观察试验奶牛确认怀孕状态。在配种后24d内发情的奶牛定为返情奶牛，24d以上发情以及32d妊检未妊娠的奶牛归为未妊娠奶牛，32d妊检怀孕的定为妊娠奶牛。妊娠率、未妊娠率及返情率计算如下：

妊娠率=妊娠奶牛头数/人工授精奶牛头数×100%

未妊娠率=未妊娠奶牛头数/人工授精奶牛头数×100%

返情率=返情奶牛头数/人工授精奶牛头数×100%

1．5 数据统计分析

数据经过Excel整理后，使用SAS对各数据之间差异显著性采用卡方检验，以P＜0.05作为差异显著性判断标准。

2 结果

2．1 定时人工授精后通过不同方法增加P4浓度对奶牛妊娠率、未妊娠率的影响

由表1可知，CIDR P4D组和对照组妊娠率分别是50.00%和40.71%，CIDR P4D组妊娠率比对照组高了22.80%，差异显著（P＜0.05）；未妊娠率分别为15.00%和31.86%，CIDR P4D组未妊娠率显著低于对照组（P＜0.05）；而CIDR P13D组与对照组相比妊娠率和未妊娠率差异不显著（P>0.05）。而一次高剂量和低剂量注射P4的P4P20组和P4P40组与对照组相比妊娠率差异不显著（P>0.05）；P4P20组和P4P40组与对照组相比未妊娠率差异显著（P＜0.05）。

2．2 定时人工授精后通过不同方法增加P4浓度对奶牛返情率的影响

由表1可知，CIDR P4D组和对照组返情率分别是35.00%和27.43%，CIDR P4D组返情率显著高于对照组（P＜0.05）；P4P20组和P4P40组与对照组相比返情率差异显著（P＜0.05），CIDR P13D组与对照组的返情率差异不显著（P>0.05）。

表1 不同处理组和对照组奶牛妊娠率、未妊娠率和返情率比较

3 讨论

3．1 CIDR对定时人工授精后奶牛妊娠率的影响

黄体中的P4对妊娠的建立和维持至关重要，在反刍动物妊娠早期，黄体中的P4在调节子宫内膜分泌方面发挥重要作用，而子宫内膜分泌对于刺激和调节胚胎的生长和分化至关重要[14]。奶牛P4浓度与胚胎发育的关系早在妊娠第5天就已存在[15]。人工授精后第5天P4浓度降低会对子宫启动囊胚发育产生不利影响，导致妊娠率降低和胚胎发育受损[16]。本研究发现人工授精后第5天肌肉注射不同剂量P4与对照组妊娠率差异不显著，不能提高奶牛妊娠率，说明在人工授精后第5天一次注射P4不能提高受胎率，可能的原因是注射后体内P4一次性升高，不能长时间维持P4较高的水平，所以对妊娠率没有影响。但是降低了未妊娠率，增加了返情率，使得返情奶牛的比例增加，这个比例的增加可以缩短奶牛再次配种的时间间隔，进而缩短产后到配种的时间间隔，有利于提高奶牛的繁殖率。

据Bisinotto等的研究，人工授精后使用CIDR补充P4，降低了泌乳奶牛妊娠损失，与对照组相比在人工授精后第4～9天使用CIDR处理的奶牛的受孕率有所提高[17,18]，这与本研究结果一致。本研究还发现人工授精后第4天CIDR组奶牛妊娠率显著高于对照组，表明人工授精后第4天CIDR处理有利于增加并维持体内P4浓度。而据Naoki等的研究，在人工授精后第12～19天，使用CIDR处理日本黑奶牛，没有增加血浆P4浓度，也没有改善其生育能力[19]，这也与本研究的结果一致。表明在人工授精后第13天后使用CIDR处理没有效果，说明10d内持续补充P4有利于胚胎的存活。

3．2 CIDR和P4对定时人工授精后奶牛返情率的影响

有研究发现CIDR可以增加奶牛返情的比率[20]，但受时间限制；Alnimer等研究发现，人工授精后第4天，与对照组相比，CIDR处理组奶牛返情率显著增加[21]；EI-zarkouny等研究发现，人工授精后第13天CIDR处理和对照组无P4处理相比，使用CIDR未能增加未怀孕奶牛的返情率[22]。以上与本研究的结果一致，本研究表明，人工授精后第4天使用CIDR增加了奶牛返情率，降低了未妊娠率。有研究表明，从第3～7天开始外源性补充P4，并达到适当的P4水平，有益于提高奶牛生育能力[10]。本研究中人工授精后第5天使用不同剂量P4，虽没有提高奶牛妊娠率，但是显著提高了奶牛返情率，进而缩短了奶牛再次配种的时间间隔。