戊丙酸类药物气相色谱-质谱检验方法分析

河南省驻马店市食品药品检验所（463000）薛毅博 李启彬 叶英剑 刘园园

近年来，通过对戊丙酸类药物研究的逐步深入，创造出了诸多检验的方法，最普遍的就是荧光光度法、化学显色法、红外吸收法和气相色谱等[1]。通过将戊丙酸类药物和酸性物质结合发生化学反应，能够很快速的形成出新药物，即丙戊酸，所以对检材中的戊丙酸进行专业检测在操作上相对方便，易操作，因为戊丙酸类药物没有氮元素的存在，且本质上属于一种镇静止痛药物，其电负性很低，如果使用色谱-氮磷检测器和气相色谱-电子捕获检测器进行检测，由于这两种检测方法自身具有的局限性，导致检测准确率容易出现较大误差，就容易出现误检和漏检的情况产生[2]。如果使用气相色谱-质谱联用仪进行检测，其就能一定程度弥补其他检测方法的局限性，通过产生更高的灵敏度，降低检测限，就可以很大程度提高检测的准确率，降低漏检和误检的概率，这种方法在对诸多不同生物检材的戊丙酸检测中都能起到显著作用。此检测方法因为构成的不同，其分离效率更高，质谱灵敏度也要略胜一筹。将其用于戊丙酸类药物中毒事件的检测过程中，能够起到更加有效的作用[3]。

1 仪器和试剂

1.1 试剂和使用物质 对照品：戊丙酸、标准用品由专业机构提供。试剂：乙醇、三氯甲烷、无水硫酸钠、硝酸。

1.2 仪器和设备 安捷伦7890A-5975C气相色谱质谱联用仪（GC/MS）、ThermoTDZ5高速离心机、振荡器。

2 操作步骤及实验过程

2.1 配置溶液 配置出浓度为0.2mg/mL的戊丙酸标准溶液乙醇工作液，进行冷冻储存，其有效期大概为180d；配置3ug/ml的戊丙酸标准乙醇溶液来进行对比质量控制，常温保存，有限期限为120d；配置5ug/ml、15ug/ml、30ug/ml、50ug/ml、100ug/ml的戊丙酸乙醇标准溶液，当作标准曲线工作液。

2.2 检材处理 对每种检查材料进行取用，都为3克，将其分别注入2mol/L的硝酸溶液中，将其酸碱性进行微调，摇晃3min及以上，然后注入三氯甲烷10ml，使用超声波进行萃取15min，摇晃15min，再加入干性硫酸钠5mg，在20000r/min的高速离心机中进行离心15min，反复提取数次。

3 检验和结果

3.1 检验 分别以0.2mg/ml的戊丙酸标准的检材进行液体取用，空白添加提取液以及空白液供气质联用仪进行检验，每次进样2ul，分别进行3次。

3.2 结果

3.2.1 线性关系表现 通过对戊丙酸储备液的准确进行配制，其浓度为5ug/ml、15ug/ml、30ug/ml、50ug/ml、100ug/ml，分别对其进行评测。将峰面积（y）当作纵坐标，以浓度（x，ug/ml）作为横坐标进行线性回顾方程设定，回归方程为：y=3.633x-3.153；r2=0.89821，通过对结果进行分析讨论可以发现，戊丙酸在浓度5～600ug/ml的范围内峰面积和浓度呈线性关系，检测出的浓度最低值为5ug/ml。

3.2.2 进行回收的概率和精密度实验 取用空白人血共3ml，将其和一定剂量的戊丙酸进行融合，制备成的戊丙酸浓度为400ug/ml和600ug/ml的成品，再使用相同步骤和方法进行供气质联检验方法进行处理和检验，通过对两种不同浓度进行分析，戊丙酸的回收概率达到了76.3%和78.4%。

3.2.3 结果 通过对检材进行准确的检查并提取出一定量的液体进行检验，发现检材提取出的液体都检查出了和0.2mg/ml戊丙酸提取液体保存时间达到一致的色谱峰，其中检材提取液保存的时间为3.5～5.4min，戊丙酸标准液体保存的时间为3.2～6.5min，而且质谱特征离子碎片和相对丰度都比与戊丙酸标准液一致，空白对照样品没有干扰，阳性结果准确性高。

4 讨论及应用案例

4.1 关于色谱柱的选取 戊丙酸的结构较为特殊，其中含有一定量的-COOH这一类极性较大的物质，选取弱极性柱或者中性柱进行物质分离带来的检测准确率和效果也略胜一筹。此次研究对DP-1MS、HP-5MS、HP-INNOWAX（ms）和XO-17MS四种差异比较明显的色谱柱进行了检验，通过对其结果的观察分析可以发现，HP-5MS和HP-INNOWAX（ms）两种柱子峰形要更好，没有拖尾状况的产生，而且进行分离也更加方便快捷，效果更好。

4.2 如何选择去乳化剂 在对需要用于检验的生物检材的处理过程中，进行液体提取的话，其容易出现一定程度的乳化现场，尤其是进行血液提取的时候，乳化现象更是明显，所以要想进一步提高回收率，就要先做好消除乳化现象这一步骤。此次研究在对检材消除乳化的过程中，选取了无水硫酸钠作为主要去乳剂进行干预，得到的效果较好，不仅能够显著达到消除乳化的效果，还不会造成过度污染。

4.3 具体案例 2018年6月，XX省XX县公安局接到群众报案称，某女子在买菜回家的路上突发身体不适，在拨打120急救电话后，送医抢救无效后死亡。经过专业法医进行解剖查验发现，这名女子死亡的原因是呼吸系统突发状况，出现呼吸衰竭症状，可以排除机械性窒息和疾病导致窒息死亡。通过对常规农药进行检测和化验，均呈阴性，在对常见镇静止痛剂进行查验中，发现其中存在戊丙酸成分。经过核实，这名女子没有癫痫病病史，相关调查人员就死者关系人进行了调查，最终发现其中一个与其有感情纠纷且有癫痫疾病病史的嫌疑人，经查，嫌疑人为该女子的情夫，其出现感情纠纷后，为了教训死者，在死者的食物中添加了大量戊丙酸钠，最终导致其死亡。