不同产地西红花中西红花苷I、西红花苷II和番红花素含量比较

2021-01-10冯坤苗赵统志张成中代威韩婷

科学与生活 2021年28期

冯坤苗赵统志张成中代威韩婷

摘要：目的利用高效液相色谱法，同时测定不同产地西红花柱头中西红花苷I、西红花苷II、苦番红花素含量。方法不同产地西红花柱头提取物的分析采用Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（4.6×250mm;5μm）;梯度洗脱，流动相乙腈-水;苦番红花素检测波长254nm，西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ检测波长为440nm;体积流量1.0mL/min;进样量20μL;柱温25℃。结果 6个产地西红花柱头中西红花苷I、西红花苷-Ⅱ、苦番红花素平均含量均为浙江建德最高，江苏最低。结论不同产地西红花成分含量差異较大，浙江建德产西红花药材质量佳，可能与采收加工有较大关系。

关键词：西红花;高效液相色谱法;含量测定

西红花为鸢尾科植物番红花Crocus sativus L.的干燥柱头，又称藏红花、番红花。其性平，味甘，归心、肝经，具有活血化瘀、解郁安神、凉血解毒的功效[1]。清代赵学敏在《本草纲目拾遗》中描述为“出西藏，形如菊……治各种痞结、吐血，屡试皆效”[2]。现代研究发现，西红花在治疗抑郁症、神经退行性疾病、阿尔茨海默病及认知功能障碍，改善学习记忆障碍等方面具有良好治疗作用[3-12]。西红花主产于伊朗、印度、西班牙、土耳其等国，我国在20世纪60年代引种，目前在我国的西藏、河南、上海、江苏等地已有种植，但由于种植方法、气候条件、加工方式等不同，造成各地西红花有效成分存在一定差异[13-15]。

本文采用高效液相色谱法，以6个不同产地西红花苷I、苷II、苦番红花素含量为研究对象，比较不同产地西红花中西红花苷I、苷II、苦番红花素含量的差异性，为进一步综合开发西红花资源及临床用药提供科学依据。

1仪器与材料

1.1 仪器 Vanquish Core系列液相色谱仪（赛默飞世尔科技有限公司）;DL-1000B智能超声波清洗器（上海之信仪器有限公司）;BT25S电子精密天平（Sartorius公司）。

1.2 试药西红花苷-Ⅰ标准品（生产批号：7358，纯度>99.8%）;西红花苷-Ⅰ标准品（批号：7400，纯度>99.8%）;苦番红花素（批号：7467，纯度>99.8%）（上海诗丹德生物技术有限公司）;乙腈为色谱纯（Adamas-beta有限公司）;乙醇为分析纯（购于上海泰坦科技股份有限公司）;屈臣氏蒸馏水（广州屈臣氏食品饮料有限公司）。

6批西红花药材分别产自伊朗、上海崇明、安徽亳州、浙江建德、江苏、河北保定。经海军军医大学药学院韩婷教授鉴定为鸢尾科植物番红花Crocus sativus L.的干燥柱头。

2方法与结果

2.1 色谱条件[1]色谱条件参考参照《中国药典》（2020版）。Agilent ZORBAX SB-C18柱（4.6×250mm;5μm）;流动相A为乙腈，流动相B为水;苦番红花素检测波长254nm，西红花苷Ⅰ和西红花苷Ⅱ检测波长为440nm;体积流量1.0mL/min;进样量20μL;柱温25℃。

2.2 对照品溶液制备精密称定西红花苷Ⅰ、西红花苷Ⅱ、苦番红花素对照品各5.0mg，置10ml 棕色容量瓶中，加入稀乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.5mg/mL的西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和苦番红花素对照品储备液，质量浓度为0.5mg/mL。4℃冰箱保存备用。

2.3 供试品溶液制备

柱头部位供试品溶液制备：分别取6个产地的西红花干燥柱头，研钵中研磨成细粉后，精密称取各产地药材20mg，分别置100ml 棕色容量瓶中，加入稀乙醇适量，避光冰水浴超声30min后，放置室温，稀乙醇定容至刻度，摇匀，滤过，即得浓度为0.2mg/mL供试品溶液，4℃ 冰箱中保存备用。

2.4 方法学考察

2.4.1 线性关系考察分别移取上述混合对照品溶液1.5、2、2.5、3、4mL置于10mL棕色容量瓶中，稀乙醇溶液稀释至刻度后，取20μL按照“2.1”项下色谱条件测定峰面积，以西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和苦番红花素对照品的质量浓度为横坐标（X），色谱峰峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，得西红花苷-Ⅰ线性回归方程：Y = 2.8911X – 4.5548（r=0.9996），西红花苷-Ⅱ线性回归方程：Y=0.9044X-0.8336（r=0.9998），苦番红花素线性回归方程：Y=0.9044X-0.8336（r=0.9998）。

2.4.2 精密度考察

精密吸取“2.2”项下对照品溶液20uL，按照“2.1”项下色谱条件连续进样6次。测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和苦番红花素的峰面积RSD分别为0.87%、1.22%、0.07%，表明仪器精密度良好。

2.4.3 重复性试验精密称定西红花柱头5份，每份20mg，按“2.3.2”项下方法平行制备5份供试品溶液，经过0.45μm微孔滤膜过滤后，按照“2.1”项下色谱条件进样20μL，测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和苦番红花素的含量RSD分别为0.15%、0.05%、0.63%，表明检测方法重复性较好。

2.4.4 稳定性考察取同一批西红花柱头供试品溶液适量，分别于0、2、4、6、8、12、24h在既定的色谱条件下进样20uL，测得西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和苦番红花素峰面积RSD分别为1.89%、1.83%、0.04%，表明供试品溶液在24h内稳定。

2.4.5 加样回收率试验精密称定已知含有量的西红花柱头5份，各10mg，分别精密加入西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ和苦番红花素对照品溶液，按既定的提取方法制备供试品溶液，在既定的色谱条件下进样20 μL，计算其加样回收率，结果见表1。

2.5 含量测定

精密称取不同产地西红花柱头，平行3组，按照“2.3”项下制备供试品溶液，并按照“2.1”项下色谱条件进样进行含量测定，结果见表2。

3讨论

本实验采用高效液相色谱法比较了不同产地西红花药用部位西红花苷-Ⅰ、西红花苷-Ⅱ、苦番红花素三个活性成分的含量，其中西红花苷I、II及苦番红花素平均含量浙江建德最高，而江苏产西红花总苷含量相对较低，不符合药典标准。西红花苷I、西红花苷II和苦番红花素为西红花中主要活性成分，是2020年版《中国药典》中规定质量控制成分。不同产地质量不同可能与土壤、气候、加工及贮藏方式有关，具体原因有待进一步研究。

参考文献：

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[2]张飞，王志尧，兰金旭，程蒙，杨光，陈随清.药食同源——西红花[J].中国食品药品监管，2021（1）：98-100.

[3]许俊杰.西紅花非药用部分化学成分和药理作用研究进展[J].医药前沿，2018，8（21）：7-8.

[4]邓颖，郭志刚，曾兆麟，等.藏红花的药理研究进展[J].中国中药杂志，2002，27（8）：565-568.

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[11]陈阳，杨婷，黄娟，等.西红花苷和西红花酸在小鼠体内抗氧化活性对比研究[J].中国药理学通报，2010，26（2）：248-251.