流动注射分析法测定挥发酚稳定性探究

李文锐，王万敏

(乐山市沙湾区疾病预防控制中心 , 四川 乐山 614900)

水中挥发酚通常指在蒸馏时可以随水蒸气挥发的苯及其稠环的羟基衍生物，长期接触有可能导致致畸、致癌和致突变[1]。目前常用的检测方法包括4-氨基安替比林分光光度法和流动注射-4氨基安替比林分光光度法，其中流动注射法因为具有自动化水平较高，准确度和精密度好，分析速度快，消耗试剂少，且不需要使用三氯甲烷有毒萃取试剂等优点，在挥发酚的测定应用中越来越广[2]。但挥发酚在空气中的稳定性和4-氨基安替比林易被空气氧化等因素对测量结果存在直接影响[3]。周绍伦[4]从标液配制、重复性试验等方面的不确定度，对流动注射测定挥发酚的稳定性进行了探究。但挥发酚和4-氨基安替比林在空气中随时间暴露自身的稳定性变化相关探究较少，本文通过运用流动注射分析仪，每间隔1 h对标准曲线和质控品进行重复测定，以吸光度变化情况反应挥发酚的浓度变化情况，探讨挥发酚在检测过程中的稳定状况。

1 材料与方法

1.1 仪器与试剂

仪器：流动分析仪，法国Alliance-proxima；纯水机，优普CPC-20T；分析天平，上海舜宇JA5003；超声波清洗机，昆山KQ-300DE。

试剂：铁氰化钾，分析纯，Sigma-Aldrich公司；硼酸，优级纯，国药集团化学试剂有限公司；4-氨基安替比林试剂，分析纯，默克公司；磷酸，优级纯，国药集团化学试剂有限公司；氯化钾，优级纯，国药集团化学试剂有限公司；氢氧化钠，优级纯，国药集团化学试剂有限公司；挥发酚质控，A190533，坛墨质检；挥发酚标准样品，GBW(E)080241，中国计量科学研究院。

1.2 试剂配制

1.2.1反应试剂配制

氢氧化钾溶液：溶解5.61 g氢氧化钾于80 mL超纯水中，定容至100 mL；磷酸蒸馏溶液：取50 mL磷酸于400 mL超纯水中，并用超纯水稀释至500 mL，混匀；4-氨基安替比林溶液：称取0.13 g 4-氨基安替比林溶解于200 mL超纯水中,混匀，超声过滤除气10 min后备用；铁氰化钾缓冲溶液：在250 mL烧杯中，依次称取0.4 g铁氰化钾，0.6 g硼酸，1 g氯化钾于180 mL超纯水中，并用氢氧化钾溶液调整pH值至10.3，定容至200 mL，混匀[5]。

1.2.2标准曲线系列

吸取1 000 mg/L标准溶液1 mL于100 mL容量瓶中，用超纯水定容，配置成10 mg/L中间液；从中间液中吸取5 mL于100 mL容量瓶中，用纯水定容，配置成500 μg/L的使用液，用使用液配置0、5、10、20、40、60、80、100 μg/L标准系列[6]。

1.2.3质控品使用液配制

准确吸取挥发酚标准质控品1 mL，于1 000 mL容量瓶中定容，配置成浓度为(7.25±0.48)μg/L的质控品使用液。

1.3 方法

1.3.1水样处理

因本实验目的在于探究挥发酚在自然状态下测量时的稳定性，所以在标准曲线溶液、质控品及试剂的配制过程中稀释溶剂皆用超纯水，不添加NaOH进行固定[3,7]。质控品分为实验组(质控1)和对照组(质控品2)两组，其中实验组在检测过程中持续暴露于空气中，每次测量前不进行溶液补充；对照组在每次检测前重新更换1.2.3中所配置的质控品使用液。

1.3.2参数设定

按照仪器操作规范打开仪器，连接后管道后，依次打开自动进样器、化学分析模块及电脑软件，设定相关参数。相关参数见表1。

1.3.3测量

表1 挥发酚测定相关参数设定

控制室温稳定于25 ℃，将仪器管线插入相应的试剂瓶中，待基线稳定后，将标准曲线溶液和质控1、质控品2溶液放置于样品架中固定，每间隔1 h进行一次测定，共测定5次，并记录所测标准曲线中各浓度的吸光度值、线性方程及质控值。

2 结果与分析

2.1 测量结果

在不同时间下所测标准曲线中各浓度的吸光度值及线性方程见表2，不同时间间隔下的两组质控品测量值见表3。

表2 在不同时间下所测标准曲线中各浓度的吸光度值、线性方程及质控值

表3 不同时间间隔下的两组质控品测量值

2.2 结果分析

2.2.1标准曲线的稳定性

由表2可知，标准曲线在5 h内总体线性较好r≥0.999 8，在10 g/L浓度时吸光度的波动随着时间变化较大，RSD为4.75%；在20、40、60、80、100 g/L浓度时吸光度的波动随时间变化较小，RSD分别为1.20%、1.60%、1.15%、0.72%、1.34%；低浓度挥发酚溶液随着在空气中暴露时间的延长，其浓度有下降的趋势，而较高浓度挥发酚溶液，其吸光度变化趋势较为平缓，溶液浓度变化较小。

2.2.2质控品稳定性

3 讨论

本实验中挥发酚低浓度(10 g/L)值的测量结果波动较大的原因，可能是由于流动分析仪测量时需要高浓度标准物质进行寻峰定性，导致基线波动较大，当寻峰定性完后，低浓度值在检测时受基线波动影响就相对较大。虽然低浓度吸光度受基线影响，但对整体的测量影响较小，标准曲线线性在5 h内均保持良好线性关系r≥0.999 8，且质控品在5 h内稳定性较好。实验结果表明，在运用连续流动分析仪进行测定过程中，挥发酚溶液和反应试剂在室温条件下稳定性较好，适合大批量样本在较长时间内连续测定。