白癜风患者血清白细胞介素33及其可溶性受体ST2水平检测及意义

杨丽， 陆东庆， 马寒

(中山大学附属第五医院皮肤科，广东 珠海 519000)

白癜风(vitiligo)是一种常见的获得性色素脱失性皮肤黏膜病，病因复杂，确切发病机制尚未明确，多数学者认为白癜风是一种多基因遗传的自身免疫性疾病[1]。白细胞介素33(IL-33)是机体受到内外各种应激刺激时发挥作用的重要炎性细胞因子，在自身免疫性疾病、炎性疾病及肿瘤等多种疾病中发挥重要作用[2-3]。可溶性受体ST2(sST2)是IL-33的诱骗受体，通过与跨膜受体ST2竞争性结合IL-33进而负性调控后者介导的信号通路及炎性反应[4]。目前，关于IL-33和sST2在白癜风患者外周血表达水平的研究报道较少，本实验通过检测白癜风患者血清IL-33和sST2的表达水平，初步探讨细胞因子IL-33和sST2在白癜风发病机制中的可能作用及其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料

纳入2016年1月—12月我院皮肤科门诊确诊为白癜风[5]的患者62例，入组患者就诊前1个月未进行系统性及外用药物等治疗，无伴发其他自身免疫性疾病、系统性疾病及感染性疾病。其中男34例，女28例，年龄3～68岁，平均(30.74±12.55)岁，发病年龄1.5岁～60岁，平均(28.19±14.72)岁。病程20天～40年，平均(95.97±72.14)个月。选取30例健康体检者作为对照组，其中男17例，女13例，平均年龄(31.18±14.61)岁。两组性别(2=0.03，P=0.869)、年龄(t=1.39，P=0.168)差异均无统计学意义，具有可比性。本实验经医院伦理委员会批准，受检者(或其监护人)均签署知情同意书。

62例白癜风患者按照疾病活动度评分(vitiligo disease activity score,VIDA)[6]分为进展期48例、稳定期14例。白癜风皮损严重程度按白斑面积大小进行分级， 以手掌占体表面积1%为标准，轻度(<1%)44例、中重度及以上(1%～5%)18例。有家族史者占20.97%，发病前有精神应激诱因者占17.74%，微量元素异常者占24.19%，自身抗体异常者占16.13%(主要为抗甲状腺过氧化物酶抗体)。

1.2 主要试剂及仪器

人IL-33和sST2定量酶联免疫分析试剂盒(上海西塘生物科技有限公司)。酶标仪(美国BIO-RAD/IMARK公司)。

1.3 检测方法

收集白癜风患者及对照组患者外周静脉血4 mL干燥管促凝，分离血清，标记编号，-80 ℃冰冻保存待测。用ELISA法检测血清IL-33和sST2水平，实验步骤严格按照试剂盒使用说明操作。用酶标仪读取450 nm吸光度值，根据标准曲线计算样品中IL-33和sST2含量。

1.4 统计学方法

2 结 果

2.1 白癜风患者与对照组血清IL-33、sST2水平比较

白癜风患者进展期、稳定期血清IL-33水平分别为(105.57±40.62) pg/mL和(87.33±38.46) pg/mL，均明显高于对照组血清IL-33水平[(8.35±3.78) pg/mL]，差异均有统计学意义(t值分别为4.67、2.34，P值分别为0.004、0.031)，而进展期与稳定期比较差异无统计学意义(t=0.15，P=0.28)；白癜风患者进展期、稳定期血清sST2水平分别为(89.11±31.62) pg/mL和(60.04±35.17) pg/mL，明显高于对照组血清sST2水平[(15.29±8.04) pg/mL]，差异均有统计学意义(t值分别为3.59、2.09，P值分别为0.027、0.045)，进展期与稳定期比较差异无统计学意义(t=0.83，P=0.601)。详见表1。

表1 白癜风患者与正常对照组外周血 IL-33 及sST2 的表达水平Tab.1 The levels of serum IL-33 and sST2 in the patients with vitiligo and healthy group (pg

2.2 白癜风患者不同皮损面积分组间血清IL-33、sST2水平比较

不同白斑面积分组间血清IL-33、sST2水平如表2所示，白斑面积<1%组和≥1%组进行比较，差异均无统计学意义(P值均>0.05)。

表2 白癜风患者不同白斑面积间外周血IL-33及sST2 的表达水平Tab.2 The levels of serum IL-33 and sST2 in different groups in the patients with

2.3 不同临床亚组间血清IL-33、sST2水平比较

比较不同临床亚组间血清IL-33、sST2水平，结果如表3所示，不同性别、家族史、精神应激、微量元素亚组间血清IL-33、sST2水平均未见明显差异(P值均>0.05)，而自身抗体异常组sST2水平与无自身抗体异常组间差异有统计学意义(t=2.46，P=0.015)。

表3 白癜风患者不同临床亚组间血清IL-33与sST2的表达水平Tab.3 The levels of serum IL-33 and sST2 in different clinical subgroups in the patients with

2.4 年龄、发病年龄及病程与血清IL-33、sST2水平的相关性

Pearson相关分析显示，白癜风患者血清IL-33、sST2水平与年龄(r值分别为-0.29、-0.15)、发病年龄(r值分别为-0.15、-0.29)及病程(r值分别为0.18、0.14)均无明显相关性(P值均>0.05)。

3 讨论

白癜风的发病率约为0.1%～2%[7]，病因复杂，其发病与多种细胞因子相关[8-9]。细胞因子是一类具有广泛生物活性的小分子蛋白质，本文旨在探讨细胞因子IL-33及其可溶性受体ST2在白癜风发生发展中的可能作用。

IL-33是IL-1家族的新成员,可参与调控先天和适应性免疫反应[2, 10]。其可组成性表达并“储存”在细胞核中参与调节基因表达；当膜受损或细胞凋亡坏死时则被动释放至胞外作为警报素发挥调节作用[11]。跨膜型ST2和可溶性ST2 (sST2)是IL1RL1基因选择性剪接产生的两个主要转录产物，胞外游离的IL-33通过与跨膜型ST2和IL-1受体协同蛋白(IL-1RAcP)结合，激活受体细胞下游结合核因子κB (NF-κB)、氨基末端激酶和胞外信号调节激酶等介导的信号通路，诱导机体局部的炎症及免疫反应[4,12-13]。研究显示IL-33/ST2信号通路的启动在多种炎症性和自身免疫性疾病中发挥作用[12,14]。

本研究结果显示，62例白癜风患者血清中IL-33水平明显高于对照组(P<0.05)；比较不同分期、不同皮损面积临床亚组间血清IL-33水平，差异无统计学意义(P>0.05)。提示IL-33可能参与白癜风发病，但其血清水平的升高可能主要发生在白癜风发病前期或起始阶段，不随疾病进展改变，与疾病活动度及严重程度无明显相关性，病情的进展或是IL-33激活IL-33/ST2信号通路进而引起一系列微环境及免疫、炎症反应紊乱的结果。Li等[15]通过体外培养发现IL-33可抑制干细胞因子(stem cell factor,SCF)和碱性成纤维细胞生长因子(basic fibroblast growth factor,bFGF)的表达，而增加IL-6和TNF-α的分泌。SCF和bFGF可刺激黑素细胞生长，与黑素细胞的存活密切相关；IL-6和TNF-α则分别通过活化抗黑素细胞的免疫应答和抑制黑素干细胞的分化、增殖及降低酪氨酸酶活性等抑制黑素细胞。这与本实验结果的分析相似，即血清IL-33水平升高后或可引起微环境中上述细胞因子的改变，进而诱发黑素细胞损伤或数量改变。有研究表明在多发性硬化及炎症性肠病中，早期阶段IL-33通过介导炎症细胞的募集和激活以及Th细胞反应来增强炎症反应导致疾病的发生；而在后期IL-33作用于Treg和巨噬细胞，促进其免疫调节功能而限制和抑制炎症反应的破坏力[12]。本研究结果显示进展期及稳定期IL-33水平无统计学差异，或也提示在早期IL-33介导一系列炎症反应导致黑素细胞受损，疾病发生发展；在疾病后期IL-33可能作用于Treg和巨噬细胞等启动免疫调节功能使疾病进入稳定期，但IL-33与不同细胞结合的时机及机制仍需进一步研究。本研究显示年龄、发病年龄及病程与IL-33无明显相关性，比较家族史、精神应激、微量元素及自身抗体临床亚组间血清IL-33水平，差异均无统计学意义，提示IL-33致病机制可能相对独立于上述因素，但本研究病例数较少，且仅检测外周血细胞因子浓度，具体相关性可能需要更大样本量、更多样性的研究分析。

研究还发现，白癜风患者血清中sST2水平明显高于对照组(P<0.05)。sST2的表达具有很强的可诱导性，推测白癜风患者血清中IL-33水平升高后启动IL-33/ST2信号通路，引发局部异常炎症反应，机体负反馈性编码转录sST2，拮抗过度活化的炎性反应。有学者发现体外用sST2处理稳定表达ST2的小鼠胸腺瘤细胞，由于抑制了IL-33/ST2通路而削弱了NF-κB的活化[16]；此外，与野生型小鼠比较，给sST2转基因小鼠IL-33处理并不伴随炎症因子(IL-4、IL-5、IL-6、IL-13)的增加[17]，这与本文结论相似。比较不同分期、不同皮损面积、不同性别、家族史、精神应激、微量元素临床亚组间血清sST2水平，差异均无统计学意义(P>0.05)，但自身抗体异常组sST2水平明显高于无自身抗体异常组，差异有统计学意义(P=0.015)。提示sST2的高表达可能与患者机体过度活化的免疫应答也有关，这与文献[18-19]报道系统性红斑狼疮和干燥综合征等自身免疫性疾病患者血液中sST2表达较对照组明显升高的结论相似。但sST2参与白癜风发病的确切机制尚需进一步研究。

IL-33的多效性提示了IL-33/ST2信号通路在体内平衡和疾病中的关键作用。本研究显示IL-33和sST2血清水平的失衡可能是白癜风的发病原因之一。关于IL-33和sST2参与白癜风发病的具体机制的进一步研究或可为白癜风免疫学治疗的新目标靶点提供思路。