电化学发光法测定NT-proBNP的效果及价值

王 静

辽宁省鞍山市中心医院检验科，辽宁鞍山 114001

N-末端脑利钠肽（NT-proBNP）用于急性冠状动脉综合征分级、心衰治疗和预后监测、心源性呼吸困难、心衰疾病诊断、早期心功能不全等诊断中能够提供准确、快速的诊断依据[1]。NT-proBNP 指标主要是通过心室肌合成且分泌而来，一旦出现心功能不全的症状，则会明显升高血浆水平。越来越多的研究学者指出，NT-proBNP 在鉴别、诊断心功能不全患者的生化指标中有一定的敏感性，且在心脏功能评价方面的价值也较为明显[2]。目前，我国临床在NT-proBNP 检测中主要是通过电化学发光法来完成，应该综合分析以及评价其检测性能以及评估价值，以便为临床制定治疗计划奠定良好的基础。本研究选取于鞍山市中心医院开展NT-proBNP 测定的86例心血管疾病患者作为研究对象，探析NT-proBNP分别采取电化学发光法、快速测定法进行测定的效果以及评估价值，现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2018年1月～2019年12月于鞍山市中心医院开展NT-proBNP 测定的86例心血管疾病患者作为研究对象，其中男46例，女40例；年龄42～80岁，平均（68.65±5.12）岁。纳入标准：①所有患者均需要开展NT-proBNP 检测；②患者符合与美国纽约心脏病学会（NYHA）分级方案区分心脏功能的标准。排除标准：①患有内分泌疾病者；②患有肾疾病者；③患有肺疾病者；④患有黄疸者；⑤患有脂血者；⑥溶血者。本研究经鞍山市中心医院医学伦理委员会审核批准。

1.2 方法

1.2.1 样本收集 在清晨空腹的状态下采集10 mL 血液，采集符合诊断标准的静脉血标本之后按照3000 r/min 的速度进行15 min 的离心处理。

1.2.2 试剂选择 选择深圳市新产业生物医学工程有限公司制造的血清NT-proBNP 试剂[供应商：基蛋生物科技股份有限公司；注册证号：苏食药械（准）字2014 第2400851号；国食药监械注册号：苏食药械生产许20050035号]，根据试剂说明书完成全自动检测以及定标。

1.2.3 检测方法 ①电化学发光法：选择迈格鲁米-Maglumi1000型全自动化学发光免疫分析仪开展检测。通过NT-proBNP 一株单克隆抗体作为ABEI 标记之后，选择另外一株单克隆抗体对磁性微球作包被处理，混匀单克隆抗体之后变成免疫复合物，同时添加磁场使其沉淀，将上清液去掉。通过洗涤液对沉淀物进行3次洗涤之后，将发光底物A、发光底物B 自动添加到仪器内，进行为期3 s 的自动检测，随后将光强度发出，对NT-proBNP的含量给予计算。②快速法：采取普朗N-端脑利钠肽前体检测试剂卡完成，同时有配套的FIA8000 系列免疫定量分析仪，选择高浓度混合血清作为NT-proBNP的阳性对照标准。

1.2.4 试验方法 ①准确度试验：选择高浓度的样本给予倍比稀释之后开展10次平行检测，通过分析期望浓度以及实测浓度，计算检测方法的稀释回收率。②精密度试验：选择NT-proBNP 低水平、高水平含量标本，分别为330.13、588.42 pg/mL，给予20次的平行测定，计算平均变异系数。③灵敏度试验：选择领标准品进行20次的平行测定，计算2倍的平均偏差。

1.3 观察指标及评价标准

快速检测法：NT-proBNP的阳性判断标准为数值>300 pg/mL。电化学发光法：根据试剂盒设定的临界值，根据不同的年龄段进行阳性的判断：≥75岁患者在NT-proBNP>610 pg/mL 的情况下为阳性；65～74岁患者在NT-proBNP>325 pg/mL 的情况下为阳性；55～64岁患者在NT-proBNP>225 pg/mL 的情况下为阳性；45～54岁患者在NT-proBNP>123 pg/mL 的情况下为阳性；18～44岁患者在NT-proBNP>96.5 pg/mL的情况下为阳性。

1.4 统计学方法

采用SPSS 22.0 统计学软件进行数据分析，计量资料用均数±标准差（±s）表示，两组间比较采用t 检验；计数资料用率表示，组间比较采用χ2检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

电化学发光法的准确度、精密度、灵敏度（95.51%、97.67%、98.84%）均高于快速检测法（88.37%、89.53%、87.21%），差异有统计学意义（P<0.05）（表1）。

表1 比较两种检测方法的准确度、精密度以及灵敏度[n（%）]

3 讨论

心血管疾病对患者的心脏或者心室舒张功能有着一定的影响，作为临床综合征中常见的一种疾病，对患者的生存质量会产生一定的影响，及时确诊疾病对改善患者的治疗预后有着积极的作用[3]。1988年，日本学者第一次在猪脑中分离出一种多肽类物质，能够发挥着扩张血管、排钠、利尿等效果，将此作为脑钠肽（BNP）物质命名，紧接着在肺部、心脏、脊髓等组织中也明确了该物质，而心脏中该物质有着较高的水平。目前，可在脊髓动物中发现肾型肽尿扩张素、V型利钠肽（VNP）、D型利钠肽（DNP）、C型利钠肽（CNP）、BNP、心钠素（心房利钠肽，ANP）等物质，与NPR-C、NPR-B、NPR-A 等受体互相对应[4]。NPR-B、NPR-A的作用是通过结合利钠肽物质之后会出现抑制肾素血管紧张素、排钠、扩张血管、利尿等生物学效应，NPR-C 的作用能促使利钠肽分子得到有效清除。一旦心室容量负荷持续增加或者心室壁压力逐渐增加，会导致心室心肌细胞BNP的表达受到快速诱导，生成134个氨基酸的前BNP 原，经过酶将一个26-氨基酸信号肽全面切除之后，变成1800AA 的BNP 原（proBNP）[5]。proBNP 在血液内释放过后会受到内肽酶裂分解，变成32个氨基酸组成的BNP 以及76个氨基酸组成的NT-proBNP 物质。NT-proBNP 缺乏生物活性，而BNP 主要是通过一个和二流半胱氨基酸连接的特异性17-氨基酸环构成，产生生物学活性[6]。NT-proBNP 属于非活性的氨基酸片段，目前对于其生物学功能尚未明确。室壁张力以及左室牵张均能有效调节NT-proBNP的释放，而健康人体中BNP 以及NT-proBNP 等摩尔分泌有着基本相同的血浆浓度，一旦机体出现心力衰竭症状，NT-proBNP 浓度上升速度较快，和BUP 相比至少多2～10倍[7]。

欧洲心脏病协会建议在对心血管疾病评价时利用BNP 作为主要的实验室指标，但是BNP的生物半衰期只有20 min，所以BNP 在离开机体之后处于较不稳定的状态，但NT-proBNP的生物半衰期可维持在60～120 min，所以对NT-proBNP水平进行检测的诊断意义较好[8]。大部分研究学者均指出，对于风湿性心脏病开展换瓣手术、既往心梗、高血压、遗传性心脏病、糖尿病等高危人群的筛查工作中能够获得指导的效果，需要对NT-proBNP 数值进行定期检测，对心脏功能状况进行全面了解[9-11]。

临床上及时对NT-proBNP水平进行测定，能够早期确诊疾病，为疾病的治疗提供良好的依据，同时为判断危险分层以及治疗预后奠定良好的基础。NT-proBNP不但和患者的存活率有一定的关系，和体力活动受限情况的相关性较为明显，而且能够恢复循环稳定能力以及对机体代偿病理生理的变化进行反应[12]。但血浆中BUP 物质具有较短的半衰期，仅能开展床旁快速检测干预，而NT-proBNP水平具有较长的半衰期，有着较为稳定的生理活性，能够在-20℃的情况下长时间的保存血浆，适合在临床批量测定中使用。有学者指出，相对于BNP 来说，心功能受损的情况下NT-proBNP水平会出现明显增高，在早期心功能损害标志物发挥的意义较大，有着极大的敏感性[13-14]。目前，常见通过电化学发光法、快速免疫荧光法对NT-proBNP水平进行检测。电化学发光法能够在18 min 内获得检测NTproBNP的结果，测试范围在5～35 000 ng/L，选择NTproBNP 测定的试剂盒，通过两种多克隆抗体进行干预之后，通过电化学发光技术、夹心法免疫分析对样本中NT-proBNP 浓度进行测定，属于全自动分析方法[15]。快速免疫荧光法可在15 min 内获取结果，常用于床旁即时检测工作中，测试区域在5～5000 ng/L。本研究结果显示，电化学发光法的准确度、精密度、灵敏度 （95.51%、97.67%、98.84%） 均高于快速检测法（88.37%、89.53%、87.21%），差异有统计学意义（P<0.05）。需要注意的是，NT-proBNP 检测结果不会受到日常活动、时间、体位等影响，且有着长达60～120 min 的半衰期，其体外浓度在24 h 内维持在不变的状态，且外源性含BNP 成分的药物不会产生影响，以上稳定性较高的情况下能使检测结果与BNP 药物服用、标本运送等没有关系，但是，为了确保结果的准确性，需要及时将血液标本送往检测以及送检。而肾功能、肥胖、性别、年龄等生理因素会影响NT-proBNP的浓度，而NT-proBNP 会伴随着年龄的增加而出现升高的情况，主要是由于心舒张功能减退或者肾小球滤过率降低造成的。

综上所述，应用电化学发光法测定NT-proBNP水平能够有效地评估治疗预后，有着完全自动化、快速可靠、无创伤等优势，值得全面推广应用。